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Co-IP實驗的外源檢測與內(nèi)源檢測各有其優(yōu)缺點。外源檢測的優(yōu)點在于其可控性高，能精確地表達目標(biāo)蛋白及其標(biāo)簽，且背景清晰，易于檢測。此外，外源檢測系統(tǒng)通常更為敏感，能夠檢測到較弱的相互作用。然而，其缺點也顯而易見，即不能完全模擬體內(nèi)的真實環(huán)境，可能導(dǎo)致某些體內(nèi)特有的相互作用無法被檢測到。內(nèi)源檢測則能更真實地反映生物體內(nèi)的蛋白質(zhì)相互作用情況，因為它直接利用細胞內(nèi)的天然蛋白。然而，這種方法的挑戰(zhàn)在于細胞內(nèi)蛋白表達的復(fù)雜性和多樣性，可能導(dǎo)致背景噪聲高，難以準(zhǔn)確檢測目標(biāo)蛋白。此外，內(nèi)源檢測的靈敏度通常較外源檢測低。綜上所述，選擇外源檢測還是內(nèi)源檢測，需根據(jù)實驗?zāi)康暮途唧w情況來權(quán)衡。如需高靈敏度和可控性，...

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）的局限性主要包括：可能檢測不到低親和力和瞬間的相互作用：低親和力和瞬間的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)之間的相互作用可能檢測不到，這可能導(dǎo)致某些重要的相互作用被遺漏。不能確保直接相互作用：免疫共沉淀不能保證沉淀的蛋白復(fù)合物是由直接相互作用的兩種蛋白組成。兩種蛋白質(zhì)的結(jié)合可能不是直接結(jié)合，而可能有第三者在中間起橋梁作用。靈敏度限制：免疫共沉淀的靈敏度不如某些其他技術(shù)，如親和色譜，這可能影響到對低豐度蛋白或微弱相互作用的研究。樣本純度要求高：如果將蛋白復(fù)合物直接進行質(zhì)譜分析，需要得到較高純度和濃度的蛋白復(fù)合物樣品，這并非易事，并且成本較高。對抗...

Co-IP（免疫共沉淀）技術(shù)是一種在生物學(xué)研究中廣泛應(yīng)用的實驗方法，主要用于研究蛋白質(zhì)之間的相互作用。該技術(shù)利用特異性抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，并通過與磁珠或瓊脂糖等固相支持物的結(jié)合，將復(fù)合物從復(fù)雜的細胞或組織提取物中分離出來。這種分離過程是在非變性條件下進行的，因此可以保留蛋白質(zhì)間的天然相互作用狀態(tài)。Co-IP技術(shù)的主要優(yōu)勢在于其直接性、特異性和靈敏度。通過選擇特異性強的抗體，研究人員能夠準(zhǔn)確地捕獲目標(biāo)蛋白及其相互作用伙伴，從而揭示蛋白質(zhì)在生命過程中的功能和調(diào)控機制。此外，該技術(shù)還可以用于研究間接相互作用的蛋白，如蛋白復(fù)合物的多種成分。總之，Co-IP技術(shù)為深入研究蛋白質(zhì)相互作用提...

免疫共沉淀與免疫沉淀技術(shù)所使用的原理與方法大致相似，所不同的是，在免疫共沉淀中，對靶蛋白的結(jié)合與沉淀由另一個與之發(fā)生相互作用的蛋白替代。在免疫共沉淀或免疫沉淀的基礎(chǔ)上，通過進一步與其它技術(shù)的結(jié)合，如聚丙烯酰胺凝膠電泳，還可進一步對靶蛋白的的分子量等特性進行鑒定。 免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）：利用抗原抗體特異性反應(yīng)，對某個特定蛋白純化富集的方法，主要過程包括捕獲和固定。(2)免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，CoIP）：CoIP是在IP實驗的基礎(chǔ)上進行的擴展，主要用于蛋白之間的互作研究，常被用于鑒定特定蛋白復(fù)合物的中已知或未知的蛋白...

IP-WB（免疫沉淀-Western Blot）是一種常用的實驗方法，用于驗證蛋白質(zhì)之間的相互作用。在IP-WB實驗中，首先使用特異性抗體將目標(biāo)蛋白從細胞或組織裂解液中免疫沉淀下來。這一步驟確保了只有與目標(biāo)蛋白特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)被富集。隨后，將免疫沉淀得到的蛋白質(zhì)復(fù)合物進行SDS-PAGE凝膠電泳，使蛋白質(zhì)按照分子量大小分離。接著，通過Western Blot技術(shù)，利用特異性抗體檢測目標(biāo)蛋白或其相互作用伙伴的存在。Western Blot利用抗體與蛋白質(zhì)的特異性結(jié)合，通過顯色反應(yīng)可視化目標(biāo)蛋白，從而實現(xiàn)對蛋白質(zhì)相互作用的驗證。IP-WB技術(shù)結(jié)合了免疫沉淀的高特異性與Western Blot的高...

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）是一種在生物藥物領(lǐng)域廣泛應(yīng)用的技術(shù)，主要用于研究蛋白質(zhì)之間的相互作用。該技術(shù)通過利用特異性抗體將目標(biāo)蛋白與其相互作用的蛋白一同沉淀下來，從而揭示蛋白質(zhì)間的相互作用關(guān)系。在蛋白泛素化研究方面，Co-IP技術(shù)也發(fā)揮著重要作用。通過該技術(shù)，研究人員可以鑒定并驗證與泛素連接酶和泛素受體相互作用的蛋白質(zhì)，進一步揭示泛素化修飾的調(diào)控機制。同時，結(jié)合質(zhì)譜分析，Co-IP技術(shù)還可以鑒定泛素化修飾的靶標(biāo)蛋白質(zhì)及其相互作用蛋白質(zhì)，揭示泛素化修飾在細胞信號傳導(dǎo)、代謝調(diào)控等生命過程中的功能和調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。Co-IP（免疫共沉淀）技術(shù)應(yīng)用場景。廣西蛋白蛋...

IP-Mass（免疫沉淀-質(zhì)譜）技術(shù)是一種結(jié)合了免疫沉淀和質(zhì)譜分析的方法，用于研究蛋白質(zhì)相互作用和差異蛋白質(zhì)分析。該技術(shù)首先利用特異性抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合，形成抗原-抗體復(fù)合物。然后，這些復(fù)合物被吸附到固相載體上，經(jīng)過洗滌步驟去除非特異性結(jié)合的雜質(zhì)。接下來，蛋白質(zhì)復(fù)合物從載體上洗脫下來，并通過質(zhì)譜分析進行鑒定和檢測。質(zhì)譜分析是IP-Mass技術(shù)的重要部分，它可以提供關(guān)于蛋白質(zhì)的質(zhì)量、荷質(zhì)比和豐度等信息。通過對質(zhì)譜數(shù)據(jù)的分析，可以鑒定出與目標(biāo)蛋白相互作用的蛋白質(zhì)，以及蛋白質(zhì)之間的相互作用強度和特異性。然而，IP-Mass技術(shù)也存在一些局限性，如抗體特異性、樣品制備和實驗條件等因素可能對結(jié)果產(chǎn)生影響...

在CoIP（免疫共沉淀）實驗中，對照組的設(shè)置對于驗證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性至關(guān)重要。對照組的主要目的是排除非特異性結(jié)合和背景干擾，從而更準(zhǔn)確地評估目標(biāo)蛋白與誘餌蛋白之間的相互作用。陰性對照組設(shè)計建議：1. 無抗體對照組：在免疫沉淀步驟中不加入特異性抗體，以檢測是否存在非特異性結(jié)合。如果在此條件下仍然檢測到目標(biāo)蛋白，則可能是非特異性結(jié)合，需要在分析時予以排除。2. 無關(guān)抗體對照組：使用與誘餌蛋白和靶蛋白均無關(guān)的抗體進行免疫沉淀，以驗證特異性抗體的作用。如果在此條件下未檢測到目標(biāo)蛋白，則可以增強對特異性抗體所檢測到的相互作用的信心。Co-IP外源檢測需注意蛋白互作真實性、表達系統(tǒng)與標(biāo)簽選擇、規(guī)范...

IP-Mass（免疫沉淀-質(zhì)譜）實驗流程主要包括以下步驟：樣品制備：收集細胞或組織樣品，并進行適當(dāng)?shù)牧呀馓幚?，以釋放細胞?nèi)的蛋白質(zhì)。免疫沉淀：將特異性抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合，形成抗原-抗體復(fù)合物。隨后，將復(fù)合物與固相載體（如磁珠）結(jié)合，通過洗滌步驟去除非特異性結(jié)合的雜質(zhì)。洗脫：從固相載體上洗脫免疫沉淀得到的蛋白質(zhì)復(fù)合物，以便進行后續(xù)的質(zhì)譜分析。蛋白酶消化：將洗脫下來的蛋白質(zhì)復(fù)合物進行蛋白酶消化，將其分解成小分子的肽段。質(zhì)譜分析：將消化后的肽段進行質(zhì)譜分析，通過測量肽段的質(zhì)量和電荷信息，鑒定出蛋白質(zhì)的種類和序列。數(shù)據(jù)分析：對質(zhì)譜數(shù)據(jù)進行處理和分析，確定與目標(biāo)蛋白相互作用的蛋白質(zhì)，以及相互作用的可能性...

IP-Mass（免疫沉淀-質(zhì)譜）技術(shù)是一種結(jié)合了免疫沉淀和質(zhì)譜分析的方法，用于研究蛋白質(zhì)相互作用和差異蛋白質(zhì)分析。該技術(shù)首先利用特異性抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合，形成抗原-抗體復(fù)合物。然后，這些復(fù)合物被吸附到固相載體上，經(jīng)過洗滌步驟去除非特異性結(jié)合的雜質(zhì)。接下來，蛋白質(zhì)復(fù)合物從載體上洗脫下來，并通過質(zhì)譜分析進行鑒定和檢測。質(zhì)譜分析是IP-Mass技術(shù)的重要部分，它可以提供關(guān)于蛋白質(zhì)的質(zhì)量、荷質(zhì)比和豐度等信息。通過對質(zhì)譜數(shù)據(jù)的分析，可以鑒定出與目標(biāo)蛋白相互作用的蛋白質(zhì)，以及蛋白質(zhì)之間的相互作用強度和特異性。IP-Mass技術(shù)在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中具有廣泛的應(yīng)用價值。它不僅可以用于研究蛋白質(zhì)相互作用，還可以...

IP-Mass（免疫沉淀-質(zhì)譜）技術(shù)是一種結(jié)合了免疫沉淀和質(zhì)譜分析的方法，用于研究蛋白質(zhì)相互作用和差異蛋白質(zhì)分析。該技術(shù)首先利用特異性抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合，形成抗原-抗體復(fù)合物。然后，這些復(fù)合物被吸附到固相載體上，經(jīng)過洗滌步驟去除非特異性結(jié)合的雜質(zhì)。接下來，蛋白質(zhì)復(fù)合物從載體上洗脫下來，并通過質(zhì)譜分析進行鑒定和檢測。質(zhì)譜分析是IP-Mass技術(shù)的重要部分，它可以提供關(guān)于蛋白質(zhì)的質(zhì)量、荷質(zhì)比和豐度等信息。通過對質(zhì)譜數(shù)據(jù)的分析，可以鑒定出與目標(biāo)蛋白相互作用的蛋白質(zhì)，以及蛋白質(zhì)之間的相互作用強度和特異性。然而，IP-Mass技術(shù)也存在一些局限性，如抗體特異性、樣品制備和實驗條件等因素可能對結(jié)果產(chǎn)生影響...

Co-IP技術(shù)作為研究蛋白質(zhì)相互作用的重要手段，其結(jié)果在多數(shù)情況下是可靠的。然而，該技術(shù)也存在一些潛在的限制和影響因素，需要研究人員予以注意。在實際應(yīng)用中，由于細胞內(nèi)蛋白質(zhì)種類繁多且相互作用復(fù)雜，可能會出現(xiàn)非特異性結(jié)合或背景噪聲，這要求研究者選擇特異性強的抗體，并通過洗滌步驟去除雜質(zhì)。此外，樣品的純度、抗體的質(zhì)量和實驗條件等也會對結(jié)果產(chǎn)生影響，因此，對抗體的選擇和驗證、樣品的準(zhǔn)備以及實驗條件的控制都至關(guān)重要。為了進一步提高結(jié)果的準(zhǔn)確性，研究人員通常會結(jié)合多種方法進行相互驗證，如使用不同抗體或?qū)嶒灄l件重復(fù)實驗，或結(jié)合質(zhì)譜技術(shù)來驗證Co-IP的結(jié)果。這些措施共同增強了Co-IP技術(shù)結(jié)果的可靠性。免...

免疫共沉淀實驗步驟主要包括以下五個部分：樣品處理：將細胞或組織樣品進行裂解，得到待檢測的蛋白質(zhì)混合物，并加入蛋白酶抑制劑以避免目標(biāo)蛋白被降解。抗體處理：將專一的抗體連接到親和樹脂上，如蛋白A的親和樹脂或蛋白G的親和樹脂，或?qū)⒌鞍着c其特異性抗體結(jié)合，新形成的復(fù)合物與封閉劑緩慢搖擺在二氧化硅珠上，使碘酸鈣交聯(lián)后節(jié)制反應(yīng)。免疫共沉淀：將有抗體樹脂的樣品與吸附抗體樹脂形成免疫復(fù)合物。洗滌：采用洗滌緩沖液對樣品進行洗滌，以去除非特異性的蛋白質(zhì)和雜質(zhì)，同時盡量避免對復(fù)合物的影響。洗滌緩沖液選擇對樣品不會引起較大影響的緩沖液和洗滌劑。蛋白鑒定：將沉淀的復(fù)合物通過SDS-PAGE分離出來，并進行Western...

免疫共沉淀CoIP實驗，細胞的收集及裂解方法如下： 收集2E7個細胞樣品，加入PBS洗滌細胞，離心后棄上清收集細胞沉淀。 準(zhǔn)備500μl預(yù)冷的CellLysisBuffer,分別加入5μlProteaseInhibitor、5μlPMSF，混勻后加進細胞沉淀中吹打均勻，冰上孵育30min，期間渦旋混勻幾次。 4℃,12000rpm離心10min，取上清，進行蛋白濃度測定及后續(xù)實驗。廣州基云生物，在IP互作組檢測和關(guān)鍵機制分子篩選驗證領(lǐng)域，具有豐富的經(jīng)驗，助力您的互作機制研究，歡迎垂詢合作。 Co-IP技術(shù)廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)、藥物研發(fā)、蛋白質(zhì)組學(xué)等領(lǐng)域，助力科研人員探索生命...

在CoIP（免疫共沉淀）實驗中，技術(shù)重復(fù)和生物重復(fù)設(shè)計建議如下：進行多次技術(shù)重復(fù)（在同一實驗條件下使用不同的樣品或樣品批次）和生物重復(fù)（使用來自不同生物或不同實驗條件的樣品），以評估結(jié)果的穩(wěn)定性和可靠性。在設(shè)置對照組時，還需要注意以下幾點：對照組的設(shè)置應(yīng)遵循科學(xué)原理，并充分考慮實驗的具體需求和目標(biāo)。確保對照組和實驗組在實驗條件和操作步驟上保持一致，以便進行準(zhǔn)確的比較。在分析實驗結(jié)果時，應(yīng)綜合考慮對照組和實驗組的數(shù)據(jù)，以得出更準(zhǔn)確的結(jié)論。總之，在CoIP實驗中，通過精心設(shè)計和執(zhí)行對照組實驗，可以提高實驗的準(zhǔn)確性和可靠性，從而更準(zhǔn)確地評估目標(biāo)蛋白與誘餌蛋白之間的相互作用。CoIP實驗需多次重復(fù)，科...

CoIP-Mass和CoIP-WB檢測要點： 互作蛋白篩選和驗證：數(shù)據(jù)分析以非標(biāo)定量信號強度（LFQintensity和FC>10）作為強陽篩選，以文獻查閱，功能匹配，批量CoIP-WB驗證，提高驗證成功率。理想CoIP-MS結(jié)果的蛋白定量都到超過1000種蛋白。其中絕大部分蛋白為非特異結(jié)合或背景蛋白。以目的蛋白的富集信號強度和差異倍數(shù)作為參考（相對強信號和差異），分析實驗組中明顯定量較高且差異較大的蛋白，作為重要候選蛋白。同時對重要候選蛋白進行STRING互作分析，文獻分析，目的蛋白功能匹配分析，選擇Top的4-5個蛋白進行CoIP-WB驗證，提高CoIP-WB成功率。 免疫共...

Co-IP實驗的內(nèi)源檢測注意事項如下：首先，確保使用的抗體具有高特異性和親和力，這是內(nèi)源檢測成功的關(guān)鍵。由于細胞內(nèi)蛋白表達復(fù)雜，非特異性結(jié)合可能導(dǎo)致實驗結(jié)果失真。其次，嚴格控制實驗條件，如細胞裂解和洗滌條件，以避免破壞蛋白質(zhì)相互作用或引入非特異性蛋白。溫和地釋放細胞內(nèi)蛋白，保證釋放出的蛋白不被蛋白酶分解，同時實驗過程需保持低溫。此外，注意樣本的采集和處理。樣本應(yīng)盡快處理，避免蛋白降解，同時防止樣本在運輸過程中溫度過高導(dǎo)致變質(zhì)。另外，結(jié)合其他實驗方法進行驗證，如Western Blot等，以確認Co-IP實驗結(jié)果的可靠性。綜上所述，Co-IP實驗的內(nèi)源檢測需要關(guān)注抗體選擇、實驗條件控制、樣本處理...

對于Co-IP實驗初學(xué)者，常遇到的“坑”主要有：首先，抗體選擇至關(guān)重要。選擇特異性不強或親和力低的抗體，可能導(dǎo)致非特異性結(jié)合，干擾實驗結(jié)果。因此，選擇經(jīng)過驗證的高質(zhì)量抗體是關(guān)鍵。其次，實驗操作規(guī)范不容忽視。細胞裂解不充分、洗滌不當(dāng)?shù)榷紩绊懙鞍讖?fù)合物的純化，進而影響實驗結(jié)果。初學(xué)者應(yīng)嚴格按照步驟操作，確保每一步都精確無誤。再者，結(jié)果解讀需謹慎。初學(xué)者可能因經(jīng)驗不足，誤將非特異性結(jié)合視為真實相互作用。因此，解讀結(jié)果時，需結(jié)合其他實驗方法如Western Blot進行驗證。另外，實驗安全不可忽視。遵守實驗室規(guī)章制度，注意個人防護和實驗室衛(wèi)生，是確保實驗順利進行的基礎(chǔ)。綜上所述，初學(xué)者在進行Co-I...

CoIP-Mass應(yīng)用場景：CoIP-Mass：用于構(gòu)建目的蛋白的蛋白互作組數(shù)據(jù)，或用于不同遺傳背景/實驗條件下的互作組差異。CoIP-WB：用于驗證目的蛋白和候選蛋白的相互作用關(guān)系，或用于不同遺傳背景/實驗條件下的互作變化。 CoIP-Mass和CoIP-WB技術(shù)價值：（1）蛋白質(zhì)相互作用數(shù)據(jù)是機制研究的重要基礎(chǔ)內(nèi)容，體現(xiàn)機制研究的嚴謹性，能明顯提高臨床基礎(chǔ)類研究文章的檔次。（2）細胞內(nèi)蛋白互作處于動態(tài)變化過程，在不同條件下可發(fā)生動態(tài)變化，蛋白動態(tài)互作組檢測，是蛋白互作機制的亮點。（3）蛋白互作，往往是結(jié)構(gòu)域或部分關(guān)鍵區(qū)段的互作，可通過蛋白區(qū)段拆分，進一步明確互作的結(jié)構(gòu)域，提升機制...

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）的局限性主要包括：可能檢測不到低親和力和瞬間的相互作用：低親和力和瞬間的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)之間的相互作用可能檢測不到，這可能導(dǎo)致某些重要的相互作用被遺漏。不能確保直接相互作用：免疫共沉淀不能保證沉淀的蛋白復(fù)合物是由直接相互作用的兩種蛋白組成。兩種蛋白質(zhì)的結(jié)合可能不是直接結(jié)合，而可能有第三者在中間起橋梁作用。靈敏度限制：免疫共沉淀的靈敏度不如某些其他技術(shù)，如親和色譜，這可能影響到對低豐度蛋白或微弱相互作用的研究。樣本純度要求高：如果將蛋白復(fù)合物直接進行質(zhì)譜分析，需要得到較高純度和濃度的蛋白復(fù)合物樣品，這并非易事，并且成本較高。對抗...

IP-WB（免疫沉淀-Western Blot）技術(shù)的缺點主要包括以下幾個方面：抗體特異性要求：IP-WB技術(shù)對抗體的特異性要求極高。如果抗體特異性不強，可能會導(dǎo)致非特異性結(jié)合，增加背景噪聲，影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。低豐度蛋白檢測難度：由于IP-WB技術(shù)的靈敏度限制，對于低豐度的蛋白質(zhì)相互作用，可能難以檢測到。操作復(fù)雜性：IP-WB技術(shù)涉及多個步驟，包括樣品制備、免疫沉淀、電泳分離和Western Blot檢測等，操作相對復(fù)雜，需要一定的實驗經(jīng)驗和技能。結(jié)果解讀難度：Western Blot結(jié)果可能受到多種因素的影響，如蛋白表達水平、抗體親和力等，結(jié)果解讀可能具有一定的難度。雖然IP-WB技術(shù)存在一...

Co-IP（免疫共沉淀）實驗注意事項眾多，以確保實驗的準(zhǔn)確性和可靠性。首先，抗體的選擇至關(guān)重要，必須選擇特異性強的抗體，避免非特異性結(jié)合導(dǎo)致背景噪聲。其次，樣品的處理過程需要嚴格控制，確保樣品純度和完整性，減少雜質(zhì)或降解產(chǎn)物對結(jié)果的影響。實驗過程中，操作細節(jié)也需特別注意，如避免抗體過量使用，確保洗滌步驟充分，以去除非特異性結(jié)合的雜質(zhì)。此外，實驗條件的選擇和優(yōu)化同樣重要，包括pH值、離子濃度、溫度等因素，都可能影響實驗結(jié)果。另外，結(jié)果的驗證和重復(fù)實驗也是必不可少的，通過不同抗體或?qū)嶒灄l件的重復(fù)實驗，或使用其他方法進行驗證，如質(zhì)譜技術(shù)，以提高結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。總之，Co-IP實驗需要注意抗體選...

CoIP-Mass是一種檢測細胞內(nèi)蛋白互作組的套餐技術(shù)。該技術(shù)通過聯(lián)合免疫共沉淀技術(shù)和質(zhì)譜檢測技術(shù)，對目的蛋白在特定細胞/組織內(nèi)的互作蛋白，進行系統(tǒng)的檢測和分析。該技術(shù)適用于目的蛋白在特定細胞/組織中的蛋白互作組數(shù)據(jù)檢測，或用于不同遺傳背景/實驗條件下的互作組差異研究。因此，該技術(shù)是研究細胞內(nèi)蛋白互作調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的常規(guī)前置技術(shù)。CoIP-WB是一種檢測細胞內(nèi)蛋白互作的驗證技術(shù)。該技術(shù)通過聯(lián)合免疫共沉淀技術(shù)和WesternBlot蛋白檢測技術(shù)，對目的蛋白在特定細胞/組織內(nèi)的互作關(guān)系進行探究，明確蛋白直接的相互作用關(guān)系。該技術(shù)適用于目的蛋白在特定細胞/組織中的蛋白互作檢測驗證，或用于不同遺傳背景/實驗...

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）的局限性主要包括：可能檢測不到低親和力和瞬間的相互作用：低親和力和瞬間的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)之間的相互作用可能檢測不到，這可能導(dǎo)致某些重要的相互作用被遺漏。不能確保直接相互作用：免疫共沉淀不能保證沉淀的蛋白復(fù)合物是由直接相互作用的兩種蛋白組成。兩種蛋白質(zhì)的結(jié)合可能不是直接結(jié)合，而可能有第三者在中間起橋梁作用。靈敏度限制：免疫共沉淀的靈敏度不如某些其他技術(shù)，如親和色譜，這可能影響到對低豐度蛋白或微弱相互作用的研究。樣本純度要求高：如果將蛋白復(fù)合物直接進行質(zhì)譜分析，需要得到較高純度和濃度的蛋白復(fù)合物樣品，這并非易事，并且成本較高。對抗...

Co-IP（免疫共沉淀）和ChIP（染色質(zhì)免疫沉淀）是兩種常用于研究蛋白質(zhì)與DNA或蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用的實驗方法。實驗原理方面的區(qū)別：Co-IP利用抗體與抗原之間的特異性結(jié)合，將目標(biāo)蛋白及其與之相互作用的蛋白一起拉下來，進而研究它們之間的相互作用。而ChIP則是在活細胞狀態(tài)下固定蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物，并通過超聲或酶處理將其隨機切斷為一定長度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段，然后通過抗原抗體的特異性識別反應(yīng)沉淀此復(fù)合體，特異性地富集目的蛋白結(jié)合的DNA片段。Co-IP外源檢測靈敏可控但難模擬體內(nèi)環(huán)境，內(nèi)源檢測真實但背景復(fù)雜，選擇需權(quán)衡實驗?zāi)康?！上海蛋白蛋白互作檢測CoIP-Western BlotCo-...

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法，是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。其原理是：當(dāng)細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質(zhì)X的抗體免疫沉淀X，那么與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來。目前多用精制的prorein A預(yù)先結(jié)合固化在argarose的beads上，使之與含有抗原的溶液及抗體反應(yīng)后，beads上的prorein A就能吸附抗原達到富集的目的。這種方法常用于測定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合；也可用于確定一種特定蛋...

CoIP-Mass是一種檢測細胞內(nèi)蛋白互作組的套餐技術(shù)。該技術(shù)通過聯(lián)合免疫共沉淀技術(shù)和質(zhì)譜檢測技術(shù)，對目的蛋白在特定細胞/組織內(nèi)的互作蛋白，進行系統(tǒng)的檢測和分析。該技術(shù)適用于目的蛋白在特定細胞/組織中的蛋白互作組數(shù)據(jù)檢測，或用于不同遺傳背景/實驗條件下的互作組差異研究。因此，該技術(shù)是研究細胞內(nèi)蛋白互作調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的常規(guī)前置技術(shù)。CoIP-WB是一種檢測細胞內(nèi)蛋白互作的驗證技術(shù)。該技術(shù)通過聯(lián)合免疫共沉淀技術(shù)和WesternBlot蛋白檢測技術(shù)，對目的蛋白在特定細胞/組織內(nèi)的互作關(guān)系進行探究，明確蛋白直接的相互作用關(guān)系。該技術(shù)適用于目的蛋白在特定細胞/組織中的蛋白互作檢測驗證，或用于不同遺傳背景/實驗...

CoIP-Mass和CoIP-WB優(yōu)劣勢：優(yōu)勢：高通量獲得目的蛋白的專屬蛋白互作庫。劣勢：CoIP的蛋白庫魚龍混雜，包含目的蛋白的直接/間接互作蛋白，非特異結(jié)合，殘留蛋白。常規(guī)理想IP-Mass項目可鑒定到1000-2000個蛋白，其中絕大部分是非特異性結(jié)合及清洗殘留的背景蛋白，導(dǎo)致CoIP-Mass假陽性高，CoIP-WB驗證成功率低，導(dǎo)致研發(fā)進展反復(fù)跌宕，時間和經(jīng)費成本占用較大，嚴重影響士氣。其次，項目受限于蛋白表達量和IP抗體有效性，達到理想狀態(tài)的CoIP-Mass較難，同時分析門檻較高。因此，該項目成功實施，比較依賴成熟和有分析經(jīng)驗的團隊。建議整包交給專業(yè)的服務(wù)商開展檢測。IP-Mas...

對于Co-IP實驗初學(xué)者，常遇到的“坑”主要有：首先，抗體選擇至關(guān)重要。選擇特異性不強或親和力低的抗體，可能導(dǎo)致非特異性結(jié)合，干擾實驗結(jié)果。因此，選擇經(jīng)過驗證的高質(zhì)量抗體是關(guān)鍵。其次，實驗操作規(guī)范不容忽視。細胞裂解不充分、洗滌不當(dāng)?shù)榷紩绊懙鞍讖?fù)合物的純化，進而影響實驗結(jié)果。初學(xué)者應(yīng)嚴格按照步驟操作，確保每一步都精確無誤。再者，結(jié)果解讀需謹慎。初學(xué)者可能因經(jīng)驗不足，誤將非特異性結(jié)合視為真實相互作用。因此，解讀結(jié)果時，需結(jié)合其他實驗方法如Western Blot進行驗證。另外，實驗安全不可忽視。遵守實驗室規(guī)章制度，注意個人防護和實驗室衛(wèi)生，是確保實驗順利進行的基礎(chǔ)。綜上所述，初學(xué)者在進行Co-I...

IP-WB（免疫沉淀-Western Blot）是一種常用的實驗方法，用于驗證蛋白質(zhì)之間的相互作用。在IP-WB實驗中，首先使用特異性抗體將目標(biāo)蛋白從細胞或組織裂解液中免疫沉淀下來。這一步驟確保了只有與目標(biāo)蛋白特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)被富集。隨后，將免疫沉淀得到的蛋白質(zhì)復(fù)合物進行SDS-PAGE凝膠電泳，使蛋白質(zhì)按照分子量大小分離。接著，通過Western Blot技術(shù)，利用特異性抗體檢測目標(biāo)蛋白或其相互作用伙伴的存在。Western Blot利用抗體與蛋白質(zhì)的特異性結(jié)合，通過顯色反應(yīng)可視化目標(biāo)蛋白，從而實現(xiàn)對蛋白質(zhì)相互作用的驗證。IP-WB技術(shù)結(jié)合了免疫沉淀的高特異性與Western Blot的高...