在1990年代***使用的綠色熒光蛋白(從水母維多利亞水母克隆)及其衍生物(例如藻紅藍(lán)蛋白、藻膽蛋白和藻紅蛋白等)是當(dāng)今生物學(xué)研究中**常用的一些生物熒光團(tuán)。雖然熒光團(tuán)可用于在細(xì)胞、細(xì)菌和各種***中表達(dá)質(zhì)粒,但它們的使用有一些缺點(diǎn),即它可能很耗時(shí),并且在融合時(shí)還能夠改變某些細(xì)胞蛋白的正常生物學(xué)功能。此外,與許多其他熒光團(tuán)相比,生物熒光團(tuán)的光穩(wěn)定性和靈敏度較低。綠色熒光蛋白(GFP)綠色熒光蛋白是當(dāng)下流行的生物熒光團(tuán)之一,由238個(gè)氨基酸組成,其中三個(gè)負(fù)責(zé)發(fā)出可見(jiàn)綠色熒光的結(jié)構(gòu)。在水母本身中,熒光團(tuán)與水母發(fā)光蛋白(一種蛋白質(zhì))相互作用,當(dāng)添加鈣時(shí)會(huì)發(fā)出藍(lán)光。通過(guò)DNA重組,研究人員可以使用負(fù)責(zé)...
Cy5:激發(fā)波長(zhǎng)633/635nm,比較大發(fā)射波長(zhǎng)670nm。1)其標(biāo)記的抗體適用于所有配備633nm氟離子激光器的流式細(xì)胞儀;2)在流式細(xì)胞儀的FL4通道檢測(cè);3)適用于熒光顯微鏡技術(shù);4)同樣為小分子染料,非常適合需小分子染料的流式細(xì)胞術(shù),熒光強(qiáng)度低于APC。5)與單核和粒細(xì)胞非特異性結(jié)合多,易出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。 5、PE:激發(fā)波長(zhǎng)488nm,比較大發(fā)射波長(zhǎng)575nm。1)其標(biāo)記的抗體適用于所有配備488nm氯離子激光器的流式細(xì)胞儀:2)在流式細(xì)胞儀的FL2通道檢測(cè);3)其熒光泯滅性強(qiáng),不適用于傳統(tǒng)的熒光顯微鏡技術(shù),但適用于激光共聚焦顯微鏡技術(shù)。 6、PE-TR:激發(fā)波長(zhǎng)48...
在熒光顯微術(shù)中,不僅蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)感興趣,而且對(duì)核酸也感興趣。有時(shí)有必要通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞核來(lái)確定細(xì)胞的確切位置或數(shù)量。最常見(jiàn)的DNA染色劑之一是DAPI(4',6-二氨基-2-苯基吲哚),主要與DNA雙螺旋富含A-T的區(qū)域結(jié)合。與未結(jié)合態(tài)相比,DAPI在DNA上的熒光強(qiáng)度增加。染料被UV(紫外線)光激發(fā),比較大激發(fā)波長(zhǎng)為358nm。發(fā)射光譜較寬,峰值在461nm。弱熒光也可以檢測(cè)到RNA結(jié)合。在這種情況下,發(fā)射轉(zhuǎn)移到500nm。有趣的是,DAPI能夠滲透完整的細(xì)胞膜。因此,該染料既可用于固定細(xì)胞也可用于活細(xì)胞。南京星葉生物熒光染料標(biāo)記蛋白。青海供應(yīng)熒光染料熒光染料在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中具有廣泛的應(yīng)用1、細(xì)胞膜標(biāo)...
熒光標(biāo)記技術(shù)是指運(yùn)用熒光染料與待研究對(duì)象結(jié)合,利用它的熒光特性,提供待研究對(duì)象相關(guān)信息。熒光標(biāo)記具有操作簡(jiǎn)便、高穩(wěn)定性、高靈敏度等優(yōu)勢(shì),使熒光染料在生命科學(xué)研究中應(yīng)用,包括:標(biāo)記活細(xì)胞或固定細(xì)胞中的蛋白質(zhì)、多肽;作為功能性指示劑表征細(xì)胞健康狀況;設(shè)計(jì)各種熒光探針,尋找特定蛋白或藥物靶點(diǎn)。應(yīng)用分類:多肽、蛋白、抗體標(biāo)記:氨基標(biāo)記、巰基標(biāo)記、羧基標(biāo)記;***成像:水溶性/脂溶性熒光染料、近紅外I區(qū)/II區(qū)熒光染料南京星葉生物科技有限公司提供不同用途的熒光染料,了解更多(包括但不限于) 熒光素衍生物具有高吸收率優(yōu)異的熒光量子產(chǎn)率和良好的水溶性是流式細(xì)胞儀和免疫熒光中常用的熒光標(biāo)記之一。青...
如何選擇的染料? 考慮到熒光染料種類繁多,您如何為您的特定應(yīng)用選擇使用哪種染料?以下是您需要考慮的一些因素?!c實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的兼容性:雖然它們可能與其他熒光團(tuán)共享一些光譜相似性,但每種染料都是***的,并且具有不同的功能、激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)、波段形狀和寬度以及光穩(wěn)定性。為確保成功,請(qǐng)選擇與您的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)相輔相成的一種。與設(shè)備的兼容性:選擇與您正在使用的照明源相匹配的染料。在選擇合適的熒光儀器時(shí),請(qǐng)考慮儀器的靈敏度、動(dòng)態(tài)范圍、穩(wěn)定性和通量、信噪比和信空白比。為了獲得更好的結(jié)果,請(qǐng)確保染料的發(fā)射曲線與可用的檢測(cè)方法相匹配。與樣品中其他熒光材料的相容性:在雙重或三重標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中,您選擇的染料的發(fā)射和激...
一種發(fā)光雜環(huán)化合物,存在于生物發(fā)光的生物體中,如螢火蟲(chóng)。在含有三磷酸腺苷的情況下,通過(guò)熒光素酶氧化脫羧產(chǎn)生光。可用于熒光素酶生物發(fā)光成像和細(xì)胞高通量篩選應(yīng)用。D-熒光素(D-Luciferin)是螢火熒光素酶底物,其量子效率為0.88,是Luminol的20倍。反應(yīng)原理:首先,在鎂離子存在下熒光素酶使熒光素與ATP反應(yīng),接著它被氧化形成二氧雜環(huán)丁烷結(jié)構(gòu)并發(fā)出黃綠色的光。Luciferin-luciferase發(fā)光用于ATP監(jiān)控以測(cè)定細(xì)胞活力以及細(xì)菌計(jì)數(shù)。它還用于報(bào)告基因檢測(cè)??膳c小動(dòng)物***成像系統(tǒng)配套使用,用于標(biāo)記LUC基因后的體內(nèi)***熒光檢測(cè)。D-熒光素游離酸(D-Luciferin,f...
綠色熒光染料ICG的主要作用吲哚菁綠(IndocyanineGreen,簡(jiǎn)稱ICG)是一種廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)和生物領(lǐng)域的熒光染料。它具有獨(dú)特的化學(xué)結(jié)構(gòu)和性質(zhì),因此被***用于熒光顯像、光熱***、生物識(shí)別和藥物輸送等領(lǐng)域。吲哚菁綠的綠色溶解度是其在水中的溶解度,它是衡量該染料在溶液中的溶解能力的重要指標(biāo)。吲哚菁綠具有較好的水溶性,可以在水中迅速溶解,形成穩(wěn)定的溶液。這一特性使得吲哚菁綠在醫(yī)學(xué)診斷和***中得到廣泛應(yīng)用。吲哚菁綠的主要作用之一是在醫(yī)學(xué)影像學(xué)中作為造影劑。由于其具有強(qiáng)烈的熒光特性,能夠在近紅外光譜范圍內(nèi)吸收和發(fā)射光線,因此被***用于近紅外熒光顯像技術(shù)中。在臨床中,醫(yī)生可以通過(guò)注射吲哚...
光熱***是另一個(gè)吲哚菁綠的重要應(yīng)用領(lǐng)域。在光熱***中,吲哚菁綠可以被引入**組織,并在近紅外激光的照射下吸收光能轉(zhuǎn)化為熱能,從而使**組織受到熱損傷,達(dá)到***的效果。吲哚菁綠的熒光性質(zhì)使得其在光熱***中具有很高的選擇性,可以精確地破壞**組織而對(duì)正常組織幾乎沒(méi)有影響。這種精細(xì)的***方式有助于減少***的副作用,提高***效果。吲哚菁綠在生物識(shí)別和藥物輸送方面也有廣泛的應(yīng)用。在生物識(shí)別中,吲哚菁綠可以與特定的生物分子結(jié)合,通過(guò)檢測(cè)其熒光信號(hào)來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)這些生物分子的定量分析。這種技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)研究、藥物篩選和疾病診斷中具有重要的意義。另外,吲哚菁綠還可以作為藥物輸送系統(tǒng)的一部分,將藥物包裹...
3.粘壁細(xì)胞的染色(1)使粘壁的細(xì)胞在無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)。(2)從培養(yǎng)基中移走蓋玻片,吸走過(guò)量培養(yǎng)液,將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。(3)在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液,輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。(4)在37℃培養(yǎng)細(xì)胞2~20分鐘,不同的細(xì)胞比較好培養(yǎng)時(shí)間不同。(5)吸干染料工作液,用培養(yǎng)液洗蓋玻片2~3次,每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞,培養(yǎng)5~10分鐘,然后吸干培養(yǎng)基。 4.顯微鏡檢測(cè)(1)DiD,DiO,DiI,DiR和DiS濾光器的選擇參見(jiàn)表1。(2)多色染料的同時(shí)檢測(cè),濾光器按照以下設(shè)定:a)DiI和DiO=OmegaXF52,Chroma51004;b)DiI和D...
Cy7DiC18(DiR)是一個(gè)親脂性、近紅外熒光花青染料。這個(gè)染料常用于標(biāo)記細(xì)胞質(zhì)膜。Cy7DiC18(DiR)的兩個(gè)18-碳鏈插入到細(xì)胞膜,從而進(jìn)行特定的、穩(wěn)定的細(xì)胞染色,幾乎不會(huì)發(fā)生細(xì)胞間的染料轉(zhuǎn)移。Cy7DiC18(DiR)(近紅外熒光)和其他細(xì)胞膜熒光染料如DiI(橙色熒光),DiO(綠色熒光),DiD(紅色熒光)配合使用,為多色成像和流式細(xì)胞分析提供了有效的工具。Cy7DiC18(DiR)染色后可進(jìn)行多聚甲醛(不可使用甲醇等其他試劑)的固定,但不建議在染色后進(jìn)行透化的過(guò)程。此外,在固定透化(室溫下用0.1%TritonX-100透化)后,也可以很好地進(jìn)行質(zhì)膜染色。 1、C...
熒光標(biāo)記技術(shù)是指運(yùn)用熒光染料與待研究對(duì)象結(jié)合,利用它的熒光特性,提供待研究對(duì)象相關(guān)信息。熒光標(biāo)記具有操作簡(jiǎn)便、高穩(wěn)定性、高靈敏度等優(yōu)勢(shì),使熒光染料在生命科學(xué)研究中應(yīng)用,包括:標(biāo)記活細(xì)胞或固定細(xì)胞中的蛋白質(zhì)、多肽;作為功能性指示劑表征細(xì)胞健康狀況;設(shè)計(jì)各種熒光探針,尋找特定蛋白或藥物靶點(diǎn)。應(yīng)用分類:多肽、蛋白、抗體標(biāo)記:氨基標(biāo)記、巰基標(biāo)記、羧基標(biāo)記;***成像:水溶性/脂溶性熒光染料、近紅外I區(qū)/II區(qū)熒光染料南京星葉生物科技有限公司提供不同用途的熒光染料,了解更多(包括但不限于) DiD,DiO,DiI,DiR和DiS染料是一族親脂性的熒光染料,可以用來(lái)染細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)...
在熒光顯微術(shù)中,不僅蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)感興趣,而且對(duì)核酸也感興趣。有時(shí)有必要通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞核來(lái)確定細(xì)胞的確切位置或數(shù)量。最常見(jiàn)的DNA染色劑之一是DAPI(4',6-二氨基-2-苯基吲哚),主要與DNA雙螺旋富含A-T的區(qū)域結(jié)合。與未結(jié)合態(tài)相比,DAPI在DNA上的熒光強(qiáng)度增加。染料被UV(紫外線)光激發(fā),比較大激發(fā)波長(zhǎng)為358nm。發(fā)射光譜較寬,峰值在461nm。弱熒光也可以檢測(cè)到RNA結(jié)合。在這種情況下,發(fā)射轉(zhuǎn)移到500nm。有趣的是,DAPI能夠滲透完整的細(xì)胞膜。因此,該染料既可用于固定細(xì)胞也可用于活細(xì)胞。Super Fluor 555(效果同Alexa Fluor 555)琥珀酰亞胺酯熒光染料。...
羅丹明屬于呫噸族。與市場(chǎng)上的許多其他染料相比,羅丹明具有出色的光穩(wěn)定性以及許多光物理特性,使其非常適合用作激光染料、熒光探針和顏料。它們?cè)诰酆衔锛{米粒子表面的表征、聚合物-生物偶聯(lián)物的檢測(cè)、活細(xì)胞的成像以及寡核苷酸在膠乳上的吸附分析等方面特別有用。羅丹明熒光染料的衍生物也用作:分子開(kāi)關(guān),病毒表面修飾,化學(xué)傳感器,硫醇。不同類型的染料通過(guò)它們各自的取代基(R1、R2、R3、R4和G)來(lái)區(qū)分。由于它們的差異,這些熒光染料在溶液中也表現(xiàn)出不同的光物理特性(例如不同的熒光壽命和發(fā)射比較大值)。氨基被剛性化的羅丹明染料無(wú)論溫度范圍如何都表現(xiàn)出高量子產(chǎn)率,而在每個(gè)氮處具有兩個(gè)烷基取代基的那些表現(xiàn)出活化的內(nèi)...
一、體外生物發(fā)光試驗(yàn)熒光素試劑的制備:D-熒光素,鉀鹽,無(wú)菌純水,完全培養(yǎng)基(自行配置)1、用無(wú)菌水制備100X熒光素原液(15mg/ml),輕輕顛倒搖動(dòng)至熒光素完全溶解?;靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b后-20℃凍存。2、將D-luciferin,potassiumsalt溶解于預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基中制備成濃度為150μg/ml的工作液。用組織培養(yǎng)基1∶100稀釋儲(chǔ)存液,配置工作液(終濃度150μg/mL)3、去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基圖像分析前,向細(xì)胞培養(yǎng)板中添加1×熒光素工作液,然后進(jìn)行圖像分析-注射器濾膜過(guò)濾除菌,0.2μm注:成像前在37℃下對(duì)細(xì)胞進(jìn)行短時(shí)間孵育可增強(qiáng)信號(hào)。DAPI染色液(DAPI St...
羅丹明屬于呫噸族。與市場(chǎng)上的許多其他染料相比,羅丹明具有出色的光穩(wěn)定性以及許多光物理特性,使其非常適合用作激光染料、熒光探針和顏料。它們?cè)诰酆衔锛{米粒子表面的表征、聚合物-生物偶聯(lián)物的檢測(cè)、活細(xì)胞的成像以及寡核苷酸在膠乳上的吸附分析等方面特別有用。羅丹明熒光染料的衍生物也用作:分子開(kāi)關(guān),病毒表面修飾,化學(xué)傳感器,硫醇。不同類型的染料通過(guò)它們各自的取代基(R1、R2、R3、R4和G)來(lái)區(qū)分。由于它們的差異,這些熒光染料在溶液中也表現(xiàn)出不同的光物理特性(例如不同的熒光壽命和發(fā)射比較大值)。氨基被剛性化的羅丹明染料無(wú)論溫度范圍如何都表現(xiàn)出高量子產(chǎn)率,而在每個(gè)氮處具有兩個(gè)烷基取代基的那些表現(xiàn)出活化的內(nèi)...
二、***成像分析:D-熒光素,鉀鹽,D-PBS,不含鈣、鎂1、配制溶液使用無(wú)菌D-PBS(w/oCa2+;Mg2+)配制D-熒光素鉀鹽溶液(15mg/ml),0.22μm濾膜過(guò)濾除菌(避光),分裝后于-20℃或-80℃冷凍保存,避免反復(fù)凍融。使用時(shí)4℃融化,實(shí)驗(yàn)前平衡至室溫(避光)2、注射量取決于注射方式,具體如下:注射方式劑量靜脈注射(25-27gauge針頭)按10μl/g體重濃度,加入相應(yīng)體積的15mg/ml熒光素工作液腹腔注射(25-27gauge針頭)按10μl/g體重濃度,加入相應(yīng)體積的15mg/ml熒光素工作液肌肉注射(27gauge針頭)50μl,濃度為1-2mg/ml熒光素...
其他細(xì)胞結(jié)構(gòu)常用染料生物染料在細(xì)胞結(jié)構(gòu)和組分鑒定中有著廣泛的應(yīng)用,除細(xì)胞膜研究外,我們經(jīng)常也會(huì)對(duì)一些其它細(xì)胞結(jié)構(gòu)及成分進(jìn)行探索,例如線粒體、溶酶體、蛋白質(zhì)、細(xì)胞核等,而對(duì)于不同的細(xì)胞結(jié)構(gòu)有不同的染料進(jìn)行染色細(xì)胞染色神器DAPI+PhalloidinDAPI染色液(DAPIStainingSolution)常用于細(xì)胞核染色,可將細(xì)胞核染成藍(lán)色。鬼筆環(huán)肽(Phalloidin)是細(xì)胞骨架的染色神器,羅丹明標(biāo)記的Phalloidin(TRITC-Phalloidin)可將細(xì)胞染成橙紅色,DAPI與Phalloidin染色液是研究細(xì)胞形態(tài)變化時(shí)經(jīng)常用到的兩種共染的試劑,染色效果可見(jiàn)A1-E1用TRIT...
一、體外生物發(fā)光試驗(yàn)熒光素試劑的制備:D-熒光素,鉀鹽,無(wú)菌純水,完全培養(yǎng)基(自行配置)1、用無(wú)菌水制備100X熒光素原液(15mg/ml),輕輕顛倒搖動(dòng)至熒光素完全溶解?;靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b后-20℃凍存。2、將D-luciferin,potassiumsalt溶解于預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基中制備成濃度為150μg/ml的工作液。用組織培養(yǎng)基1∶100稀釋儲(chǔ)存液,配置工作液(終濃度150μg/mL)3、去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基圖像分析前,向細(xì)胞培養(yǎng)板中添加1×熒光素工作液,然后進(jìn)行圖像分析-注射器濾膜過(guò)濾除菌,0.2μm注:成像前在37℃下對(duì)細(xì)胞進(jìn)行短時(shí)間孵育可增強(qiáng)信號(hào)。脂溶性熒光染料cy3、cy5、...
熒光標(biāo)記技術(shù)是指運(yùn)用熒光染料與待研究對(duì)象結(jié)合,利用它的熒光特性,提供待研究對(duì)象相關(guān)信息。熒光標(biāo)記具有操作簡(jiǎn)便、高穩(wěn)定性、高靈敏度等優(yōu)勢(shì),使熒光染料在生命科學(xué)研究中應(yīng)用,包括:標(biāo)記活細(xì)胞或固定細(xì)胞中的蛋白質(zhì)、多肽;作為功能性指示劑表征細(xì)胞健康狀況;設(shè)計(jì)各種熒光探針,尋找特定蛋白或藥物靶點(diǎn)。應(yīng)用分類:多肽、蛋白、抗體標(biāo)記:氨基標(biāo)記、巰基標(biāo)記、羧基標(biāo)記;***成像:水溶性/脂溶性熒光染料、近紅外I區(qū)/II區(qū)熒光染料南京星葉生物科技有限公司提供不同用途的熒光染料,了解更多(包括但不限于) Super Fluor 488(效果同Alexa Fluor 488)標(biāo)記蛋白。江西熒光染料脂溶PI是...
羅丹明123一種可對(duì)活細(xì)胞線粒體染色的細(xì)胞染色試劑。羅丹明123可透過(guò)細(xì)胞膜且在活細(xì)胞的線粒體內(nèi)聚集,并發(fā)出黃綠色熒光。羅丹明123***用作檢測(cè)線粒體膜電位,也常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)。由于細(xì)胞內(nèi)ATP的量與羅丹明123的熒光強(qiáng)度之間有相關(guān)性,此熒光染料被應(yīng)用于檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的ATP。羅丹明123的比較大激發(fā)波長(zhǎng)為507nm,比較大發(fā)射波長(zhǎng)為525nm。在熒光顯微鏡下觀察,呈現(xiàn)黃綠色熒光。 一:工作液配制用緩沖液或者預(yù)熱的培養(yǎng)液直接稀釋儲(chǔ)存液到需要的工作液濃度(1~20μM),充分混勻。具體的工作液濃度使用者要根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)體系進(jìn)行調(diào)整。【注意】:對(duì)于細(xì)胞實(shí)驗(yàn),要控制好總體稀釋倍數(shù),DMSO在...
羰花青染料***用作Di來(lái)標(biāo)記細(xì)胞、細(xì)胞器、脂質(zhì)體、病毒和脂蛋白。長(zhǎng)鏈羰花青包括DiO(DiOC18(3))、DiI(DiIC18(3))、DiD(DiIC18(5))和DiR,以及二烷基氨基苯乙烯基染料DiA(4-Di-16-ASP)用于標(biāo)記膜和其他疏水結(jié)構(gòu)。DiIC16(3)具有比DiI(C18)更短的烷基取代基(C16)。它們?cè)谥|(zhì)環(huán)境中具有極高的消光系數(shù)、環(huán)境依賴性熒光和短的激發(fā)態(tài)壽命。它們?cè)谑覝叵率怯蜖钗铮谒邪l(fā)出微弱熒光,但當(dāng)摻入膜中或與親脂性生物分子結(jié)合時(shí),它們發(fā)出高熒光且相當(dāng)耐光。這些光學(xué)特性使它們成為細(xì)胞質(zhì)膜染色的理想選擇。一旦應(yīng)用于細(xì)胞,這些染料就會(huì)在質(zhì)膜內(nèi)橫向擴(kuò)散,導(dǎo)致...
三:貼壁細(xì)胞染色1、將貼壁細(xì)胞培養(yǎng)于無(wú)菌蓋玻片上。2、從培養(yǎng)基中移走蓋玻片,吸走過(guò)量培養(yǎng)液,但要使表面保持濕潤(rùn)。3、在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液,輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。4、37℃孵育細(xì)胞2~20min,不同的細(xì)胞比較好培養(yǎng)時(shí)間不同??梢?0min作為起始孵育時(shí)間,之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記效果。5、吸干染料工作液,用培養(yǎng)液洗蓋玻片2~3次,每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞,孵育5~10min,然后吸干培養(yǎng)基。但要使表面保持濕潤(rùn)。四:結(jié)果檢測(cè)樣品可在培養(yǎng)基中進(jìn)行檢測(cè),可通過(guò)熒光顯微鏡成像或流式細(xì)胞儀分析。小動(dòng)物成像熒光染料是一種先進(jìn)的技術(shù)可以在小動(dòng)物體內(nèi)實(shí)時(shí)觀察和研究細(xì)胞、...
所需的CY3-NHS酯的量取決于待標(biāo)記蛋白的量,以及CY3-NHS的比較好摩爾比為10。示例:假設(shè)所需的標(biāo)記蛋白為500μL2mg/mLIgG(MW=150,000),用100μLDMSO溶解1mgCY3-NHS酯,得到所需的CY3-NHS酯體積為5.05μL,詳細(xì)計(jì)算過(guò)程如下:1)mmol(IgG)=mg/mL(IgG)×mL(IgG)/MW(IgG)=2mg/mL×0.5mL/150,000mg/mmol=6.7×10-6mmol2)mmol(CY3-NHS酯)=mmol(IgG)×10=6.7×10-6mmol×10=6.7×10-5mmol3)uL(CY3-NHS酯)=mmol(CY3...
熒光染料:能發(fā)出熒光的染料。在吸收紫外線或可見(jiàn)光后,能把短波長(zhǎng)的光轉(zhuǎn)變?yōu)椴ㄩL(zhǎng)較長(zhǎng)的可見(jiàn)光波而反射出來(lái),呈閃亮的鮮艷色彩。例如,酸性曙紅、熒光黃、紅汞以及某些分散染料等。它們大多是含有苯環(huán)或雜環(huán)并帶有共軛雙鍵的化合物。熒光染料可以單獨(dú)使用,也可以組合成復(fù)合熒光染料使用。其中復(fù)合熒光染料是利用熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)合成的熒光染料,由距離非常近、能量可以在彼此間傳遞的一個(gè)供體及一個(gè)受體熒光物分子所組成。復(fù)合染料在受體分子的激發(fā)波長(zhǎng)被激發(fā),在供體分子的發(fā)射波長(zhǎng)發(fā)射一個(gè)光子。熒光染料發(fā)展非常迅速,已開(kāi)發(fā)的用于科研和臨床應(yīng)用的熒光染料已基本覆蓋了由紫外到可見(jiàn)光及紅外的整個(gè)光譜范圍。熒光染料可以單獨(dú)使用,也可...
小動(dòng)物***成像技術(shù)(invivoimagingtechnology)是利用高靈敏度的光學(xué)檢測(cè)儀器直接檢測(cè)動(dòng)物***體內(nèi)的細(xì)胞活動(dòng)和基因行為研究的一類技術(shù),是近年來(lái)發(fā)展**快的生命科學(xué)研究方法,是**直接觀察細(xì)胞和分子在體內(nèi)行為的新興技術(shù),已廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域[1]。***動(dòng)物體內(nèi)光學(xué)成像主要采用生物發(fā)光與熒光發(fā)光兩種技術(shù)。生物發(fā)光是利用熒光素酶報(bào)告基因在***內(nèi)表達(dá)產(chǎn)生的熒光蛋白與體外注射的熒光素底物發(fā)生化學(xué)反映產(chǎn)生熒光。而熒光發(fā)光成像技術(shù)是將熒光物質(zhì)或熒光物質(zhì)標(biāo)記的小分子物質(zhì)如基因、細(xì)胞也可是小分子藥物、抗體、納米材料等導(dǎo)入到***體內(nèi),通過(guò)小動(dòng)物***成像系統(tǒng)的激發(fā)光源激發(fā)...
藻紅蛋白-藻紅蛋白(PE)是一種紅色蛋白色素復(fù)合物,屬于藻膽蛋白家族。它可以在紅藻和隱植物中找到,它作為葉綠素色素的附屬物。在生物科學(xué)中,熒光團(tuán)可以與蛋白質(zhì)結(jié)合,例如用于抗原檢測(cè)的抗體等,因?yàn)樗軌虬l(fā)出明亮的熒光。由于熒光團(tuán)往往會(huì)很快發(fā)生光漂白,因此很少在熒光顯微鏡中使用。它經(jīng)常用于流式細(xì)胞術(shù)?!鶆e藻藍(lán)蛋白(APC)-與藻紅蛋白一樣,別藻藍(lán)蛋白也屬于藻膽蛋白家族,是從紅藻中分離出來(lái)的。在594和633nm的激光線激發(fā)下,熒光團(tuán)的比較大吸光度在650nm處,而熒光發(fā)射峰在66nm處。與熒光素偶聯(lián)物相比,熒光團(tuán)的靈敏度已顯示高5至10倍,并具有許多其他有益特性,包括大斯托克斯位移、高水溶性、長(zhǎng)波長(zhǎng)...
常用抗體標(biāo)記熒光染料的特性及其應(yīng)用 1、FITC:激發(fā)波長(zhǎng)488nm,比較大發(fā)射波長(zhǎng)525nm。1)其標(biāo)記的抗體適用于所有配備488nm氟離子激光器的流式細(xì)胞儀;2)在流式細(xì)胞儀的FL1通道檢測(cè);3)可用于熒光顯微鏡技術(shù)4)熒光強(qiáng)度易受PH值影響,PH值降低時(shí)其熒光強(qiáng)度減弱。2、AlexaFluor488:激發(fā)波長(zhǎng)488nm,比較大發(fā)射波長(zhǎng)519nm。1)其標(biāo)記的抗體適用于所有配備488nm氟離子激光器的流式細(xì)胞儀:2)在流式細(xì)胞儀的FL1通道檢測(cè);3)具有超乎尋常的光穩(wěn)定性,非常適用于熒光顯微鏡技術(shù);4)在較寬的PH值范圍內(nèi)保持穩(wěn)定(PH4~10)。5)南京星葉生物科技有限公司Su...
納米粒子納米顆粒是指尺寸在1到100納米之間的顆粒。由于它們的小尺寸,納米粒子通常用于不同類型的細(xì)胞和組織的熒光成像。當(dāng)今生物成像中常用的一些納米材料包括碳點(diǎn)、貴金屬納米顆粒、聚合物點(diǎn)、量子點(diǎn)和熒光摻雜二氧化硅等。在成像中,與其他分子熒光團(tuán)和探針相比,納米顆粒/納米材料具有多種優(yōu)勢(shì),使其成為理想的選擇。除了提高亮度外,納米粒子是惰性的并且往往分布均勻,這有助于在成像過(guò)程中獲得更好的結(jié)果。此外,與各種分子熒光團(tuán)相比,納米顆粒和納米材料沒(méi)有細(xì)胞毒性,并且不受非特異性結(jié)合問(wèn)題的影響。由于這些特性,大多數(shù)熒光納米顆粒(染色納米顆粒)可以內(nèi)化到細(xì)胞/組織中,并容易靶向給定部位。Super Flour 系...
羅丹明屬于呫噸族。與市場(chǎng)上的許多其他染料相比,羅丹明具有出色的光穩(wěn)定性以及許多光物理特性,使其非常適合用作激光染料、熒光探針和顏料。它們?cè)诰酆衔锛{米粒子表面的表征、聚合物-生物偶聯(lián)物的檢測(cè)、活細(xì)胞的成像以及寡核苷酸在膠乳上的吸附分析等方面特別有用。羅丹明熒光染料的衍生物也用作:分子開(kāi)關(guān),病毒表面修飾,化學(xué)傳感器,硫醇。不同類型的染料通過(guò)它們各自的取代基(R1、R2、R3、R4和G)來(lái)區(qū)分。由于它們的差異,這些熒光染料在溶液中也表現(xiàn)出不同的光物理特性(例如不同的熒光壽命和發(fā)射比較大值)。氨基被剛性化的羅丹明染料無(wú)論溫度范圍如何都表現(xiàn)出高量子產(chǎn)率,而在每個(gè)氮處具有兩個(gè)烷基取代基的那些表現(xiàn)出活化的內(nèi)...
其他細(xì)胞結(jié)構(gòu)常用染料生物染料在細(xì)胞結(jié)構(gòu)和組分鑒定中有著廣泛的應(yīng)用,除細(xì)胞膜研究外,我們經(jīng)常也會(huì)對(duì)一些其它細(xì)胞結(jié)構(gòu)及成分進(jìn)行探索,例如線粒體、溶酶體、蛋白質(zhì)、細(xì)胞核等,而對(duì)于不同的細(xì)胞結(jié)構(gòu)有不同的染料進(jìn)行染色細(xì)胞染色神器DAPI+PhalloidinDAPI染色液(DAPIStainingSolution)常用于細(xì)胞核染色,可將細(xì)胞核染成藍(lán)色。鬼筆環(huán)肽(Phalloidin)是細(xì)胞骨架的染色神器,羅丹明標(biāo)記的Phalloidin(TRITC-Phalloidin)可將細(xì)胞染成橙紅色,DAPI與Phalloidin染色液是研究細(xì)胞形態(tài)變化時(shí)經(jīng)常用到的兩種共染的試劑,染色效果可見(jiàn)A1-E1用TRIT...