久久青青草视频,欧美精品v,曰韩在线,不卡一区在线观看,中文字幕亚洲区,奇米影视一区二区三区,亚洲一区二区视频

在核酸遞送中的應(yīng)用核酸***可以通過基因增強、基因抑制和基因組編輯實現(xiàn)持久甚至***的效果。然而，裸核酸分子難以進入細胞，陽離子聚合物作為非病毒核酸遞送系統(tǒng)，其分子上帶有正電荷基團，可濃縮核酸分子形成納米顆粒，幫助核酸跨越屏障在細胞中表達蛋白質(zhì)或抑制目標基因表達。陽離子聚合物易于合成、修飾和結(jié)構(gòu)控制，是一類有前途的核酸遞送系統(tǒng)7。在顱內(nèi)遞送合成mRNA中的應(yīng)用在本研究中，使用常用的轉(zhuǎn)染試劑建立了顱內(nèi)遞送合成mRNA的小鼠模型。將合成的熒光素酶mRNAs用兩種不同的轉(zhuǎn)染試劑包裹后定點微注射到大腦中，通過小動物成像系統(tǒng)監(jiān)測遞送的mRNA的表達狀態(tài)，并通過行為和血液生化測量評估可能的試劑誘導(dǎo)的生物毒...

原代細胞和干細胞的轉(zhuǎn)染效率通常較低。原代細胞剛剛從組織中分離出來，還保留著體內(nèi)復(fù)雜的生理特性，其細胞膜上的受體和內(nèi)吞機制等可能不適應(yīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染。例如，原代間充質(zhì)干細胞的轉(zhuǎn)染效率可能低于10%。干細胞由于其特殊的自我更新和分化潛能，其細胞內(nèi)部的信號通路和膜運輸機制對脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染比較敏感，轉(zhuǎn)染效率也不高。而且在轉(zhuǎn)染過程中，還需要考慮不影響干細胞的干性，這也增加了轉(zhuǎn)染的難度。 原代細胞和干細胞對脂質(zhì)體的毒性反應(yīng)比較敏感。脂質(zhì)體可能會干擾它們的正常生理功能，如影響干細胞的自我更新和分化能力。對于原代細胞，可能會改變其原有的表型或者***細胞的應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致細胞提前衰老或者死亡。 基因注射包括通...

其他轉(zhuǎn)染試劑：機制概述：例如CALNPRNAi轉(zhuǎn)染試劑，其轉(zhuǎn)染機制可能與傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑不同。該試劑轉(zhuǎn)染效率***高于傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑，同時毒性比較低。其具體轉(zhuǎn)染機制可能涉及對RNA的攝取、細胞利用率及細胞毒性的綜合作用。在不同細胞類型中的表現(xiàn)：目前文獻中未明確提及CALNPRNAi轉(zhuǎn)染試劑在特定細胞類型中的具體表現(xiàn)，但研究表明該試劑為難轉(zhuǎn)染細胞的RNA干擾帶來了新的選擇7。綜上所述，不同RNA轉(zhuǎn)染試劑在不同細胞類型中的轉(zhuǎn)染機制存在差異，這些差異主要表現(xiàn)在與RNA的結(jié)合方式、進入細胞的途徑以及在細胞內(nèi)的釋放和作用方式等方面。了解這些差異對于選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑進行特定細胞類型的RNA轉(zhuǎn)染實驗具有重要意義...

轉(zhuǎn)染時間對奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細胞轉(zhuǎn)染的影響：在奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細胞中，應(yīng)用帶有FAM標記的miRNA-185mimics為報告基因，檢測兩種不同轉(zhuǎn)染試劑（LipofectamineRNAiMAX與Lipofectamine2000）在細胞接種不同時間后的轉(zhuǎn)染效率33。結(jié)果顯示，無論使用哪種轉(zhuǎn)染試劑，12h的轉(zhuǎn)染效率均極***高于18、24h，LipofectamineRNAiMAX各時間點的轉(zhuǎn)染效率均極***高于Lipofectamine2000。并且，使用LipofectamineRNAiMAX作為轉(zhuǎn)染試劑時，12h的熒光強度也比較高。這說明在奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細胞中，選擇合適的轉(zhuǎn)染...

三、脂質(zhì)體組成對轉(zhuǎn)染效率的影響不同脂質(zhì)組成的影響：研究發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)體的組成對不同類型細胞的轉(zhuǎn)染效率有影響。例如，四種不同的DOTAP與DOPE重量比的脂質(zhì)體配方對不同細胞系的轉(zhuǎn)染效率不同。Huh7和AGS細胞的比較好脂質(zhì)體組成是T1P0和T3P1；COS7細胞是T3P1和T1P1；A549細胞是T1P1和T1P36。脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)的影響：脂質(zhì)體復(fù)合物的形狀會隨著DOPE比例的增加從層狀結(jié)構(gòu)變?yōu)榈沽切谓Y(jié)構(gòu)，但在所有使用的細胞系中，特定結(jié)構(gòu)在轉(zhuǎn)染效率上沒有明確的優(yōu)勢6。四、其他因素的影響血清的影響：對于某些細胞，血清的存在會影響轉(zhuǎn)染效率。如Siha細胞在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)時轉(zhuǎn)染效率更高，而在Caco-2...

對于容易轉(zhuǎn)染的貼壁細胞如人胚腎細胞（HEK293）和人宮頸*細胞（HeLa），脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率相對較高。這些細胞具有較強的內(nèi)吞能力，能夠有效地攝取脂質(zhì)體-核酸復(fù)合物。例如，在標準的轉(zhuǎn)染條件下，HEK293細胞的轉(zhuǎn)染效率可以達到50%-70%。而對于一些難轉(zhuǎn)染的貼壁細胞，如原代肝細胞和某些神經(jīng)細胞，其轉(zhuǎn)染效率較低。這是因為它們的細胞膜結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜，可能存在較厚的糖萼或者緊密的細胞間連接，阻礙了脂質(zhì)體-核酸復(fù)合物的進入。例如，原代肝細胞的轉(zhuǎn)染效率可能只有10%-20%。 一般來說，貼壁細胞對脂質(zhì)體的耐受性相對較好。但是，在高濃度脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的情況下，即使是耐受性好的細胞也會受到影響。例如，H...

RNA電穿孔高效轉(zhuǎn)染原代淋巴細胞：使用體外轉(zhuǎn)錄的mRNA通過電穿孔可以實現(xiàn)高基因轉(zhuǎn)染效率和低轉(zhuǎn)染相關(guān)毒性。例如，在用GFP或mCD62L轉(zhuǎn)染的受激原代人和鼠T淋巴細胞中觀察到90％以上的轉(zhuǎn)基因表達和80％以上的活細胞。GFPRNA對未刺激的人PBMC或鼠脾細胞進行電穿孔，分別產(chǎn)生95％和56％的GFP?細胞。此外，基因表達迅速且持久，對經(jīng)過RNA電穿孔的T淋巴細胞未觀察到不良影響7。五、優(yōu)化共轉(zhuǎn)染方法整合共轉(zhuǎn)染和平行共轉(zhuǎn)染：研究不同的共轉(zhuǎn)染和連續(xù)轉(zhuǎn)染方法，特別是體外轉(zhuǎn)錄信使RNA（IVTmRNA）。對于在納米載體形成之前預(yù)混合的IVTmRNAs（整合共轉(zhuǎn)染）和同時用單獨形成的納米載體轉(zhuǎn)染細胞（...

選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑GenMute試劑在人肝*細胞模型中的應(yīng)用：在人肝*細胞HepG2和Huh7.5中，研究對比了脂質(zhì)體類的Lipofectamine?RNAiMAX和HepG2特異性的聚合物類GenMute?兩種轉(zhuǎn)染試劑30。通過細胞成像分析發(fā)現(xiàn)，GenMute處理的細胞對熒光標記的陰性對照siRNA的攝取高于LipofectamineRNAiMAX轉(zhuǎn)染的細胞。并且，MTT實驗表明，GenMute轉(zhuǎn)染的細胞比LipofectamineRNAiMAX處理的細胞具有更高的存活率。這提示在人肝*細胞模型中，GenMute試劑可能是更適合的轉(zhuǎn)染試劑，在提高轉(zhuǎn)染效率的同時降低了細胞死亡。siRNA共軛殼...

磁共振成像（MRI）技術(shù)磁共振成像技術(shù)是目前較為先進的醫(yī)學(xué)影像技術(shù)之一，在動物成像中也得到了廣泛應(yīng)用。優(yōu)化實驗動物眼部磁共振成像技術(shù)：王戰(zhàn)京、雷建鋒、焦昆的研究通過改進實驗動物眼部的磁共振成像技術(shù)，提高了眼科疾病研究的準確性，并促進了新治療方法的研發(fā)1。他們選用了健康的SD大鼠，利用Bruker7.0TMRI掃描儀進行檢測，通過精確的定位和細致的掃描參數(shù)調(diào)整，對比了T2WI與FLASH兩種成像技術(shù)。研究結(jié)果顯示，F(xiàn)LASH序列在眼部結(jié)構(gòu)成像中展現(xiàn)出更高的信噪比，從而提供了更為清晰的圖像和更豐富的組織細節(jié)。3T動物磁共振成像傳導(dǎo)冷卻超導(dǎo)磁體研究：陳順中、王秋良、孫萬碩采用傳導(dǎo)冷卻技術(shù)研制了一臺3...

其他轉(zhuǎn)染試劑：機制概述：例如CALNPRNAi轉(zhuǎn)染試劑，其轉(zhuǎn)染機制可能與傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑不同。該試劑轉(zhuǎn)染效率***高于傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑，同時毒性比較低。其具體轉(zhuǎn)染機制可能涉及對RNA的攝取、細胞利用率及細胞毒性的綜合作用。在不同細胞類型中的表現(xiàn)：目前文獻中未明確提及CALNPRNAi轉(zhuǎn)染試劑在特定細胞類型中的具體表現(xiàn)，但研究表明該試劑為難轉(zhuǎn)染細胞的RNA干擾帶來了新的選擇7。綜上所述，不同RNA轉(zhuǎn)染試劑在不同細胞類型中的轉(zhuǎn)染機制存在差異，這些差異主要表現(xiàn)在與RNA的結(jié)合方式、進入細胞的途徑以及在細胞內(nèi)的釋放和作用方式等方面。了解這些差異對于選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑進行特定細胞類型的RNA轉(zhuǎn)染實驗具有重要意義...

納米顆粒遞送藥物并發(fā)揮功能的能力在很大程度上取決于它們被細胞攝取的機制。以蒲公英湯劑體為例，研究發(fā)現(xiàn)親溶酶體物質(zhì)能***抑制蒲公英湯劑體進入細胞；巨胞飲抑制劑細胞松弛素D和阿米洛利能***降低蒲公英湯劑體的胞內(nèi)攝入，且呈現(xiàn)劑量依賴性，敲減Rac1和PAK1也有效地抑制其進入細胞。這些結(jié)果提示蒲公英湯劑體通過內(nèi)吞進入A549細胞且主要由巨胞飲介導(dǎo)26。同理，RNA轉(zhuǎn)染試劑在某些情況下也可能利用巨胞飲途徑進入細胞。電穿孔轉(zhuǎn)染中的內(nèi)吞途徑電穿孔轉(zhuǎn)染是一種用于基因遞送的技術(shù)，在研究其機制時發(fā)現(xiàn)，用冰冷介質(zhì)處理或在電穿孔轉(zhuǎn)染前使用內(nèi)吞抑制劑處理三種不同的人類細胞系（HEK293、HCT116和HT29）...

魚精蛋白作為RNA遞送穩(wěn)定劑具有重要作用，其具體作用機制主要包括以下幾個方面：一、保護RNA免受降解魚精蛋白是一種天然陽離子肽混合物，由于其帶正電荷的特性，可以與帶負電荷的RNA通過相反電荷驅(qū)動耦合23。在生物系統(tǒng)中，RNA很容易被RNase降解，而魚精蛋白可以與RNA復(fù)合，形成穩(wěn)定的復(fù)合物，從而保護RNA免受降解1213。例如，通過將單鏈RNA（ssRNA）與帶正電荷的蛋白魚精蛋白復(fù)合，可以穩(wěn)定陰離子RNA1213。二、增強細胞穿透性魚精蛋白不僅可以保護RNA，還能增強RNA的穿透細胞的能力。魚精蛋白-RNA復(fù)合物的形成具有雙重功能，一方面保護RNA不被降解，另一方面增強其穿透進入細胞的能力...

動物視網(wǎng)膜成像技術(shù)為基礎(chǔ)研究提供了有力工具。從小鼠視網(wǎng)膜多種成像方式探討眼科光學(xué)成像技術(shù)進展：張鵬飛、張廷瑋、宋維業(yè)闡述了近年來在小鼠和人眼視網(wǎng)膜高精度光學(xué)成像領(lǐng)域出現(xiàn)的技術(shù)突破6。幾種在人眼視網(wǎng)膜成像中廣泛應(yīng)用的光學(xué)成像技術(shù)在動物視網(wǎng)膜中得到了成功應(yīng)用，實現(xiàn)了對動物視網(wǎng)膜的高精度細胞級別成像，為科研工作者提供了有力工具。同時，動物視網(wǎng)膜的研究工作也開發(fā)了一些新型成像技術(shù)或增強了對人眼視網(wǎng)膜功能機理的理解。綜上所述，動物成像技術(shù)在磁共振成像、熱成像、X射線發(fā)光成像、近紅外高光譜成像、非人靈長類動物超高場磁共振腦成像、新型動物搖籃的小動物多重成像、紅外成像以及動物視網(wǎng)膜成像等方面都取得了***的...

選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑陽離子脂質(zhì)體：如LipofectamineTM2000等陽離子脂質(zhì)體是常用的轉(zhuǎn)染試劑。通過優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件，如轉(zhuǎn)染前細胞融合度、質(zhì)粒質(zhì)量與脂質(zhì)體體積比及轉(zhuǎn)染時間等，可以提高轉(zhuǎn)染效率。例如，在脂質(zhì)體介導(dǎo)RNA干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染雞成骨細胞的試驗中，當轉(zhuǎn)染前細胞融合達到90％以上，質(zhì)粒DNA與脂質(zhì)體比例為1:2.5時轉(zhuǎn)染效率比較高，并且在轉(zhuǎn)染后48h轉(zhuǎn)染效果比較好，對細胞的毒性作用較小4。二、利用天然陽離子肽混合物——魚精蛋白作為穩(wěn)定劑和增強劑：魚精蛋白不僅可以作為肝素的中和藥物和緩釋胰島素配方中的化合物，還可以用于核酸的細胞遞送。自***作為轉(zhuǎn)染增強劑使用以來，魚精蛋白已被***用作RNA...

考慮RNA需求較少的RNA需求可以降低實驗成本，同時也可以減少對細胞的潛在毒性。比較不同試劑的RNA用量：不同的轉(zhuǎn)染試劑可能需要不同量的RNA才能達到相同的轉(zhuǎn)染效果。在選擇比較好的RNA轉(zhuǎn)染試劑并將其與電穿孔法進行病毒RNA的比較的研究中，某些商業(yè)轉(zhuǎn)染試劑在適當優(yōu)化后，細胞死亡少得多，RNA需求少，轉(zhuǎn)染效率提高3?？紤]實驗規(guī)模：如果實驗需要大量轉(zhuǎn)染細胞，那么選擇RNA需求較少的試劑可以降低成本。例如，在大規(guī)模的細胞培養(yǎng)實驗中，選擇RNA需求少的轉(zhuǎn)染試劑可以節(jié)省成本和資源。四、考慮血清兼容性在有血清的情況下能夠遞送RNA的轉(zhuǎn)染試劑可以簡化實驗操作，提高實驗的可重復(fù)性。血清對轉(zhuǎn)染的影響...

對基因表達的影響：在微小RNA-1180轉(zhuǎn)染對腎*細胞生長的影響的研究中，腎*細胞分為兩組：dsControl組和miR-1180組。實時定量（qRT）-PCR檢測p21mRNA的表達變化，結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染miR-1180后，786-O和ACHN細胞中p21mRNA水平分別上調(diào)（P〈）和（P〈），p21蛋白表達趨勢與qRT-PCR結(jié)果相符，CDK4、CDK6和CyclinD1蛋白的表達明顯下調(diào)。同時，流式細胞術(shù)（FCM）檢測細胞周期變化顯示細胞周期被阻滯在G0/G1期，MTS結(jié)果顯示細胞活力明顯降低，集落形成實驗顯示細胞增殖能力降低。結(jié)論是miR-1180能******腎*細胞中p21...

在大腸桿菌細胞中復(fù)制的質(zhì)粒通常含有二核苷酸頻率為1:16的CpG基序，這與細菌DNA中的頻率相似。CpG免疫刺激的兩個應(yīng)用領(lǐng)域是疫苗接種和腫瘤免疫***。許多出版物表明，免疫刺激CpG基序可以用于疫苗接種策略，包括給藥編碼抗原的pDNA載體或給藥抗原本身。通過不同的給藥途徑給藥含CpG的脂叢可以抑制**生長。這些結(jié)果來源于使用表達促炎細胞因子(如IL-12)的轉(zhuǎn)基因或甚至不含外源轉(zhuǎn)基因的載體的研究。**的生長抑制似乎是由CpG基序引起的，因為這些序列的甲基化否定了這種作用。雖然有***效果，但含CpG基序?qū)?*生長的抑制的確切性質(zhì)尚不清楚。產(chǎn)生的細胞因子對腫瘤細胞和**脈管系統(tǒng)都有多重作用。一...

化學(xué)轉(zhuǎn)染可分為基于脂質(zhì)體或非基于脂質(zhì)體?；谥|(zhì)體的轉(zhuǎn)染試劑是一種化學(xué)物質(zhì)，它能夠形成帶正電的脂質(zhì)聚集體，這些聚集體可以與宿主細胞的磷脂雙分子層順利融合，從而允許外來遺傳物質(zhì)以**小的阻力進入。另一方面，非脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑可進一步分為幾類，包括磷酸鈣、樹狀大分子、聚合物、納米顆粒和非脂質(zhì)體。磷酸鈣是轉(zhuǎn)染中使用的低價的化學(xué)物質(zhì)之一，轉(zhuǎn)染涉及將帶正電的鈣離子(Ca2+)與帶負電的核酸結(jié)合，形成沉淀，然后被宿主細胞吸收。然而，磷酸鈣轉(zhuǎn)染的成功率較低，需要事先優(yōu)化才能達到較高的轉(zhuǎn)染效率。樹狀大分子是三維的、高度支化的有機大分子，可以與核酸形成復(fù)合物，作為一種替代的非脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，它優(yōu)于磷酸鈣。然而，使...

聯(lián)合使用其他技術(shù)優(yōu)化DNA和RNA轉(zhuǎn)移的轉(zhuǎn)染試劑在肌肉細胞中的應(yīng)用：在C2C12細胞中，比較了五種商業(yè)轉(zhuǎn)染試劑（Lipofectamine?3000、Viafect?、Fugene?HD、C2C12CellAvalanche?和JetOPTIMUS?）的轉(zhuǎn)染效率7。通過優(yōu)化DNA:轉(zhuǎn)染劑比例和細胞密度，所有試劑都達到了超過60%的轉(zhuǎn)染效率，且對細胞生長和活力的影響有限。然而，在C2C12細胞中優(yōu)化的用于DNA轉(zhuǎn)移的條件下，這些試劑對siRNA的轉(zhuǎn)移效率較低，并且對原代肌肉細胞的毒性較高。這提示在使用轉(zhuǎn)染試劑時，可以通過聯(lián)合使用其他技術(shù)或優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件，以提高轉(zhuǎn)染效率并降低細胞死亡。例如，可以進一...

RNA和信使RNA與DNA轉(zhuǎn)染類似，RNA可以通過基于RNA的病毒或非病毒載體導(dǎo)入真核細胞。與涉及DNA的轉(zhuǎn)染相比，RNA轉(zhuǎn)染可能產(chǎn)生更高的轉(zhuǎn)染效率，因為后者不需要穿越核膜。在不需要基因組整合、轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后處理的情況下，RNA轉(zhuǎn)染也可能加速所需蛋白質(zhì)的產(chǎn)生。使用基于信使RNA(mRNA)的載體也可以防止因整合到宿主基因組而引起的并發(fā)癥，從而允許表達特定的，所需的蛋白質(zhì)。然而，RNA轉(zhuǎn)染后，蛋白質(zhì)表達是短暫的，與DNA相比，RNA的穩(wěn)定性相對較差，因此在細胞內(nèi)運輸時更容易降解。小RNA是長度為18-200個堿基對(bp)的RNA分子，具有調(diào)控轉(zhuǎn)錄后基因調(diào)控和RNA修飾的能力。小RNA包括micr...

PLL(聚L -賴氨酸)是生理條件下帶正電的多氨基酸,當鏈長超過20個殘基時，它可以與質(zhì)粒DNA結(jié)合并凝聚成致密顆粒。研究人員發(fā)現(xiàn)，配體在PLL上的共價附著可通過受體介導(dǎo)的途徑***增強內(nèi)吞作用。例如，涎腺樣體(ASOR)是涎腺糖蛋白受體的配體，在肝細胞上表達。當ASOR共價附著在PLL上時，受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用和質(zhì)粒的細胞攝取***增加。此外，與葉酸或轉(zhuǎn)鐵蛋白相關(guān)的PLL已被開發(fā)出來，并在將pDNAs轉(zhuǎn)染到*細胞中取得了實質(zhì)性進展。另一種重要的聚氨基酸是PLO(聚L-鳥氨酸)。PLO具有PLL的特性，但轉(zhuǎn)染效率比PLL提高了10倍。Ramsay和Gumbleton證明，與PLL相比，PLO以更...

PLL(聚L -賴氨酸)是生理條件下帶正電的多氨基酸,當鏈長超過20個殘基時，它可以與質(zhì)粒DNA結(jié)合并凝聚成致密顆粒。研究人員發(fā)現(xiàn)，配體在PLL上的共價附著可通過受體介導(dǎo)的途徑***增強內(nèi)吞作用。例如，涎腺樣體(ASOR)是涎腺糖蛋白受體的配體，在肝細胞上表達。當ASOR共價附著在PLL上時，受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用和質(zhì)粒的細胞攝取***增加。此外，與葉酸或轉(zhuǎn)鐵蛋白相關(guān)的PLL已被開發(fā)出來，并在將pDNAs轉(zhuǎn)染到*細胞中取得了實質(zhì)性進展。另一種重要的聚氨基酸是PLO(聚L-鳥氨酸)。PLO具有PLL的特性，但轉(zhuǎn)染效率比PLL提高了10倍。Ramsay和Gumbleton證明，與PLL相比，PLO以更...

納米顆粒的尺寸很小，但它們比其他顆粒具有更大的粘附表面，同時具有高穩(wěn)定性。正因為如此，它們能夠成功地穿過細胞膜，進入細胞，并與自然發(fā)生的細胞內(nèi)途徑結(jié)合，具有將特定顆粒帶到預(yù)定目標位置的***準確性。由于納米顆粒在細胞內(nèi)運輸和保護化合物方面具有巨大的潛力，可以避免酶的消化或儲存在核內(nèi)體中，因此納米顆粒作為細胞過程成像的工具，作為將藥物攜帶到細胞內(nèi)的各種系統(tǒng)的一部分，或**終用于基因傳遞。納米顆粒通過官能團和非共價鍵之間的特異性和非特異性鍵與核酸結(jié)合的特性類似于體內(nèi)DNA和抑制蛋白之間的自然結(jié)合。在細胞內(nèi)運輸外源DNA的效率受到兩個主要因素的限制:內(nèi)吞作用，穿過細胞膜的方式，或適當?shù)募毎荏w***...

攜帶要轉(zhuǎn)染的特定核酸的載體構(gòu)建可以進一步分為病毒載體或質(zhì)粒載體。病毒和質(zhì)粒通過存在合適的真核啟動子促進外源轉(zhuǎn)基因的表達。病毒載體可能在宿主細胞中觸發(fā)免疫原性反應(yīng)，而非病毒載體的免疫原性相對較低。需要一種傳遞機制來促進靶向核酸或載體結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)移到宿主細胞中。其中一些需要物理方法，而另一些涉及使用遞送載體，可能是脂質(zhì)載體或非脂質(zhì)載體，以幫助增強載體載體復(fù)合物與宿主細胞膜之間的接觸，從而促進復(fù)合物進入細胞。設(shè)計和啟動轉(zhuǎn)染試驗可能具有挑戰(zhàn)性，特別是可供選擇的轉(zhuǎn)染方法或策略種類繁多的情況***式細胞術(shù)可以更精確地定量表達特定熒光基因的細胞，以評估轉(zhuǎn)染效率。DOTAP 轉(zhuǎn)染試劑**近的研究已經(jīng)確定了陽離子脂質(zhì)...

在轉(zhuǎn)染中，DNA通常通過病毒或非病毒載體(如質(zhì)粒)轉(zhuǎn)運到宿主細胞中。質(zhì)粒的基本結(jié)構(gòu)包括啟動子、復(fù)制起點、多個克隆位點、目標基因和選擇標記。質(zhì)粒復(fù)制需要復(fù)制的起源，而多個克隆位點包含獨特的內(nèi)切酶切割位點，用于插入外源基因。適當?shù)恼婧藛幼?如CMV或EF-1a)的存在允許外源基因在宿主細胞中表達。質(zhì)粒DNA可以以線性和超螺旋DNA的形式轉(zhuǎn)染。與線性DNA相比，使用超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染通常會產(chǎn)生更高的效率，線性DNA更容易被外切酶降解。然而，線性化的DNA更具重組性，因此可以更容易地整合到宿主基因組中以實現(xiàn)穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染。與DNA轉(zhuǎn)染類似，RNA可以通過基于RNA的病毒或非病毒載體導(dǎo)入真核細胞。干細胞...

為了在體外和體內(nèi)可重復(fù)地傳遞基因和siRNA，含有核酸的脂質(zhì)體、脂叢和多叢的配方需要精確組成轉(zhuǎn)染試劑。雖然有幾項研究已經(jīng)調(diào)查了血液成分如何使脂質(zhì)和聚合物納米顆粒不穩(wěn)定，對于介導(dǎo)細胞中基因傳遞或沉默的傳遞系統(tǒng)的**終組成知之甚少。多叢和脂叢的組成在系統(tǒng)給藥進入血液后會發(fā)生不斷的變化。過多的聚合物鏈或脂質(zhì)體成分不強烈附著于復(fù)合物將從顆粒中脫落，而新的成分，如脂蛋白，可以粘附在復(fù)合物的表面。這不僅會導(dǎo)致顆粒的不穩(wěn)定，還會改變生物分布或促進體內(nèi)***。了解在體內(nèi)遞送的每個階段(在給藥部位，在血液循環(huán)過程中，在***和組織的細胞外基質(zhì)中，以及**終進入靶細胞時)，多聚物和脂聚物的組成如何變化，可能有助于...

RNA轉(zhuǎn)染試劑是一類能夠?qū)NA分子導(dǎo)入細胞內(nèi)的物質(zhì)，其作用原理主要涉及以下幾個方面。利用電荷相互作用：許多RNA轉(zhuǎn)染試劑是陽離子性的，它們可以與帶負電荷的RNA分子通過靜電相互作用結(jié)合形成復(fù)合物。例如，魚精蛋白是一種天然陽離子肽混合物，由于相反電荷驅(qū)動的耦合作用，被用于細胞內(nèi)核酸的遞送8。魚精蛋白不僅可以保護RNA免受生物系統(tǒng)中的降解，還能增強其對細胞的穿透能力。陽離子脂質(zhì)體也是常見的轉(zhuǎn)染試劑之一。以LipofectamineTM2000為例，它可以介導(dǎo)攜帶綠色熒光蛋白基因的真核表達載體轉(zhuǎn)染至雞成骨細胞9。陽離子脂質(zhì)體通過其陽離子頭部與RNA的負電荷相互作用，形成脂質(zhì)體-RNA復(fù)合物，然后通...

質(zhì)子泵抑制劑可以通過基于從一個供體蛋白到受體蛋白的能量轉(zhuǎn)移的物理測量來評估，也可以通過化學(xué)測量來評估，在化學(xué)測量中，表達的蛋白質(zhì)與另一種蛋白質(zhì)之間的相互作用活性可以在刺激時通過適當?shù)膱蟾嫦到y(tǒng)來檢測。后一種基于熒光素酶的方法被稱為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移(BRET)，它是熒光共振能量轉(zhuǎn)移研究質(zhì)子泵抑制劑的替代方法。多個質(zhì)粒的共轉(zhuǎn)染也可以應(yīng)用于轉(zhuǎn)染，其中包括將編碼Cas9蛋白和引導(dǎo)RNA的質(zhì)粒遞送到宿主細胞，使用CRISPR/Cas9基因組工程系統(tǒng)進行基因組編輯。除了使用多個質(zhì)粒外，雙鏈載體是另一種將不同基因傳遞到宿主細胞的方法。雙鏈載體是一種能夠表達兩種不同基因的載體，通過一個內(nèi)部核糖體進入位點連接...

轉(zhuǎn)染時通常推薦使用血清減少或無血清培養(yǎng)基，包括陽離子轉(zhuǎn)染試劑，如Lipofectamine、HiperFect 和EndofectinMax。這種轉(zhuǎn)染活動需要形成陽離子脂質(zhì)體-DNA復(fù)合物，這需要帶正電的脂質(zhì)體分子和帶負電的核酸之間的相互作用。因此，血清中負電荷分子的存在可能會影響這種復(fù)雜的相互作用，從而影響轉(zhuǎn)染效率。然而，發(fā)現(xiàn)10%血清的存在導(dǎo)致FuGENE HD、jetPEI、Lipofectamine 2000和Arrest-In轉(zhuǎn)染MCF-7、HeLa、C2C12和MC3T3的轉(zhuǎn)染效率更高。研究表明，轉(zhuǎn)染中少量的血清可以通過調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)染復(fù)合物的zeta電位來改善轉(zhuǎn)染復(fù)合物與其宿主細胞表面之...

PLL(聚L -賴氨酸)是生理條件下帶正電的多氨基酸,當鏈長超過20個殘基時，它可以與質(zhì)粒DNA結(jié)合并凝聚成致密顆粒。研究人員發(fā)現(xiàn)，配體在PLL上的共價附著可通過受體介導(dǎo)的途徑***增強內(nèi)吞作用。例如，涎腺樣體(ASOR)是涎腺糖蛋白受體的配體，在肝細胞上表達。當ASOR共價附著在PLL上時，受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用和質(zhì)粒的細胞攝取***增加。此外，與葉酸或轉(zhuǎn)鐵蛋白相關(guān)的PLL已被開發(fā)出來，并在將pDNAs轉(zhuǎn)染到*細胞中取得了實質(zhì)性進展。另一種重要的聚氨基酸是PLO(聚L-鳥氨酸)。PLO具有PLL的特性，但轉(zhuǎn)染效率比PLL提高了10倍。Ramsay和Gumbleton證明，與PLL相比，PLO以更...