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來(lái)源： 發(fā)布時(shí)間：2024-06-06

免疫沉淀技術(shù)的實(shí)驗(yàn)方法通常包括以下步驟：
1. 樣本準(zhǔn)備
2. 細(xì)胞裂解：使用裂解緩沖液（含有蛋白酶抑制劑以防止蛋白質(zhì)降解）裂解細(xì)胞，釋放蛋白質(zhì)。
3. 蛋白質(zhì)濃度測(cè)定：使用BCA、Bradford或Lowry等方法測(cè)定裂解液中蛋白質(zhì)的濃度。
4. 抗體預(yù)處理：如果使用預(yù)固定的抗體，需先將抗體固定在固相支持物上，如瓊脂糖珠或磁性微珠。
5. 免疫沉淀反應(yīng)：將裂解液與特異性抗體（固定或未固定）混合，并在4°C下緩慢搖晃孵育過(guò)夜，以允許抗體與目標(biāo)蛋白質(zhì)充分結(jié)合。
6. 固相支持物的回收：對(duì)于未固定的抗體，加入與抗體特異性結(jié)合的蛋白A或蛋白G結(jié)合的固相支持物。
7. 洗滌：去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)和雜質(zhì)，通常需要多次洗滌固相支持物。
8. 洗脫：使用適當(dāng)?shù)南疵摼彌_液（如加熱的SDS加載緩沖液或酸性緩沖液）從固相支持物上洗脫免疫復(fù)合物。
9. 后續(xù)分析：對(duì)洗脫的蛋白質(zhì)進(jìn)行SDS-PAGE電泳、Western Blot、質(zhì)譜分析等，以進(jìn)一步分析目標(biāo)蛋白質(zhì)。
10. 對(duì)照實(shí)驗(yàn)：包括正對(duì)照（已知能沉淀目標(biāo)蛋白的抗體）和負(fù)對(duì)照（非特異性抗體或無(wú)抗體）以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的特異性。
免疫沉淀技術(shù)IP實(shí)驗(yàn)步驟。深圳anti Flag免疫沉淀磁珠多少錢

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免疫沉淀純化所得抗原量低有多種原因，
A. 純化所得抗原量低
1. 抗原結(jié)合水平低
IP 應(yīng)用中出現(xiàn)低抗原結(jié)合水平的可能原因有很多，結(jié)合反應(yīng)所使用的溶液是重要原因之一。必須使用適合的緩沖液，有特定的pH和鹽濃度，可能還需要添加互作所需的輔助因子。IP 或Co-IP 中用于純化的抗體是影響得率的另一個(gè)重要因素。如果抗體本身易失活或與抗原結(jié)合微弱，則可能很難找到足夠溫和的條件，即能產(chǎn)生結(jié)合，又能保證在孵育和洗滌過(guò)程中結(jié)合可以穩(wěn)定保持。
2. 抗原洗脫水平低
在某些情況下，抗原與抗體或結(jié)合蛋白結(jié)合之間可能會(huì)發(fā)生極強(qiáng)的相互作用，傳統(tǒng)的洗脫緩沖液無(wú)法將其破壞。如果需要使用溫和洗脫緩沖液收集功能性抗原，則上述矛盾尤為突出。

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    免疫沉淀（immunoprecipitation）是指利用抗體可與抗原特異性結(jié)合的特性，將抗原（常為靶蛋白）從混合體系沉淀下來(lái)，初步分離靶蛋白的一種方法。免疫共沉淀（coimmunoprecipitation）是一種在體外探測(cè)兩個(gè)蛋白分子間是否存在特異性相互作用的一種方法。其原理非常簡(jiǎn)單，如果兩個(gè)蛋白在體外體系能夠發(fā)生特異性相互作用的話，那么當(dāng)用一種蛋白的抗體進(jìn)行免疫沉淀時(shí)，另一個(gè)蛋白也會(huì)被同時(shí)沉淀下來(lái)。與酵母雙雜交技術(shù)不同，免疫共沉淀技術(shù)所利用的是抗原和抗體間的免疫反應(yīng)，是一種基于體外非細(xì)胞的環(huán)境中研究蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)的相互作用的方法。

染色質(zhì)免疫共沉淀（Chromatinimmunoprecipitation，ChIP）技術(shù)是目前公認(rèn)的研究此相互作用的選擇，是真核生物基因表達(dá)機(jī)制研究中不可或缺的技術(shù)之一。
它的基本原理是在活細(xì)胞狀態(tài)下，固定蛋白質(zhì)-DNA（染色質(zhì)）復(fù)合物，并將其切斷為一定長(zhǎng)度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段，然后通過(guò)免疫學(xué)方法（抗體親和）沉淀此復(fù)合體，特異性地富集目的蛋白結(jié)合的 DNA，通過(guò)對(duì)目的片段的純化與后期檢測(cè)，從而獲得蛋白質(zhì)與 DNA 相互作用的信息。
這項(xiàng)技術(shù)通過(guò)蛋白質(zhì)與DNA互作來(lái)分析目標(biāo)基因活性以及已知蛋白質(zhì)的靶基因，被廣泛應(yīng)用于體內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子與靶基因啟動(dòng)子上特異核苷酸序列結(jié)合方面的研究。該技術(shù)常與DNA芯片和分子克隆技術(shù)相結(jié)合。
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免疫沉淀（Co-IP）實(shí)驗(yàn)中抗體的選擇非常關(guān)鍵，因?yàn)榭贵w的特異性和親和力直接影響到實(shí)驗(yàn)的成功與否。
1. 特異性：抗體應(yīng)當(dāng)對(duì)目標(biāo)蛋白具有高度的特異性，以避免與其他蛋白發(fā)生非特異性結(jié)合，導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。
2. 親和力：抗體對(duì)目標(biāo)蛋白的親和力要足夠高，以確保在免疫沉淀過(guò)程中能夠有效地捕獲目標(biāo)蛋白。
3. 抗體類型：?jiǎn)慰寺】贵w和多克隆抗體都可以用于IP實(shí)驗(yàn)。單克隆抗體提供更高的特異性和批間一致性，而多克隆抗體可能提供更強(qiáng)的結(jié)合能力和更廣的表位覆蓋。
4. 應(yīng)用驗(yàn)證：選擇已經(jīng)過(guò)免疫沉淀（Co-IP）或相關(guān)應(yīng)用（如Western blot, IHC）驗(yàn)證的抗體，這增加了實(shí)驗(yàn)成功的可能性。
5. 供應(yīng)商信息：選擇信譽(yù)良好的抗體供應(yīng)商，并查看供應(yīng)商提供的技術(shù)數(shù)據(jù)和客戶評(píng)價(jià)，以幫助做出決策。
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免疫沉淀和免疫共沉淀的區(qū)別？深圳anti Flag免疫沉淀磁珠多少錢

真核生物的基因組 DNA 以染色質(zhì)（Chromatin）的形式存在。因此，研究蛋白質(zhì)與 DNA 在染色質(zhì)環(huán)境中的相互作用是闡明真核生物基因表達(dá)機(jī)制的基本途徑，而染色質(zhì)免疫共沉淀（Chromatinimmunoprecipitation，ChIP）技術(shù)是目前公認(rèn)的研究此相互作用的選擇，是真核生物基因表達(dá)機(jī)制研究中不可或缺的技術(shù)之一。
它的基本原理是在活細(xì)胞狀態(tài)下，固定蛋白質(zhì)-DNA（染色質(zhì)）復(fù)合物，并將其切斷為一定長(zhǎng)度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段，然后通過(guò)免疫學(xué)方法（抗體親和）沉淀此復(fù)合體，特異性地富集目的蛋白結(jié)合的 DNA，通過(guò)對(duì)目的片段的純化與后期檢測(cè)，從而獲得蛋白質(zhì)與 DNA 相互作用的信息。
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世途科生物簡(jiǎn)介：

上海世途科生物科技有限公司是一家集研發(fā)、生產(chǎn)、銷售于一體的，為全球用戶提供生物試劑的生命科學(xué)企業(yè)。世途科生物（CYTOCH）匯集了一支由海內(nèi)外KOL組成的研發(fā)團(tuán)隊(duì)，他們?cè)谏锖突瘜W(xué)領(lǐng)域擁有相當(dāng)豐富的研發(fā)經(jīng)驗(yàn)，通過(guò)將化學(xué)與生物技術(shù)相結(jié)合，致力于現(xiàn)有技術(shù)難點(diǎn)突破、新技術(shù)研究，為相關(guān)科學(xué)研究者提供思路和解決辦法。

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標(biāo)簽： 支原體 免疫沉淀