LAMP法,即環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增法(Loop-mediated isothermal amplification),在支原體檢測中的應(yīng)用具有以下特點和應(yīng)用場景:
1. 日常監(jiān)測:由于LAMP法的快速和簡便性,它適用于生物實驗室的日常監(jiān)測,可以及時檢測出支原體的存在,確保實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。
2. 疾病診斷:LAMP法已被成功應(yīng)用于SARS、禽流感、HIV等疾病的檢測中,并在2009年甲型H1N1流感事件中發(fā)揮了重要作用。
3. 臨床應(yīng)用:LAMP法在臨床樣本的檢測中顯示出了快速、高靈敏度和穩(wěn)定性,可以用于檢測實驗室樣本及臨床樣本中的支原體。
4. 多病原體檢測:LAMP法可以同時檢測多種病原體,包括肺炎支原體在內(nèi)的多種下呼吸道感*的病原體,為臨床診療提供詢證依據(jù)。
5. 與其他技術(shù)結(jié)合:LAMP法可以與CRISPR-Cas12a等其他技術(shù)結(jié)合,建立新的檢測方法,提高檢測的效率和準(zhǔn)確性。
支原體去除之后對細(xì)胞檢測有無影響?杭州細(xì)胞支原體預(yù)防試劑現(xiàn)貨
qPCR法,即定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Quantitative Polymerase Chain Reaction)法,是一種高度靈敏和特異的分子生物學(xué)技術(shù),用于檢測和定量DNA序列。在支原體檢測中,qPCR法的原理主要包括以下幾個步驟:
1. DNA提?。菏紫葟拇郎y樣本中提取DNA,這可能包括細(xì)胞培養(yǎng)上清液或組織樣本中的支原體DNA。
2. 設(shè)計特異性引物:針對支原體的保守DNA序列,如16S rRNA基因,設(shè)計特異性的DNA引物。
3. 熒光標(biāo)記探針:使用熒光標(biāo)記的探針,該探針與目標(biāo)DNA序列互補,能夠在PCR擴(kuò)增過程中與擴(kuò)增的DNA結(jié)合。
4. Ct值確定:Ct值(閾值循環(huán)數(shù))是指在PCR反應(yīng)中,熒光信號強(qiáng)度超過預(yù)定閾值的循環(huán)次數(shù)。Ct值越低,表示樣本中支原體DNA的量越多。
5. 定量分析:通過標(biāo)準(zhǔn)曲線法或相對定量法,將Ct值轉(zhuǎn)換為支原體DNA的定量結(jié)果。
qPCR法的優(yōu)勢在于其高靈敏度和特異性,能夠檢測到非常低水平的支原體污染,并且可以在短時間內(nèi)提供結(jié)果,這對于需要快速檢測的生物制品生產(chǎn)和細(xì)胞培養(yǎng)質(zhì)量控制非常重要
深圳支原體預(yù)防試劑多少錢支原體預(yù)防主要是什么成分?
細(xì)胞培養(yǎng)中支原體難以徹底消滅的原因主要包括以下幾點:
1. 無細(xì)胞壁結(jié)構(gòu):支原體是沒有細(xì)胞壁的微生物,這使得許多作用于細(xì)胞壁的抗*素對支原體無效。
2. 微小體積:支原體體積小,能夠穿過常規(guī)的除菌濾膜,例如0.20微米甚至0.10微米的濾膜。
3. 隱匿性:支原體污染初期很難被察覺,它們在普通光學(xué)顯微鏡下幾乎不可見,因此細(xì)胞被支原體污染后,前期很難被發(fā)現(xiàn)。
4. 傳播途徑多樣:支原體可以通過細(xì)胞培養(yǎng)物、細(xì)胞懸液、細(xì)胞培養(yǎng)用具等途徑迅速傳播。
5. 污染源 :支原體污染源包括細(xì)胞間的交叉污染、操作人員的口腔、皮膚,以及細(xì)胞培養(yǎng)用的組分如血清、培養(yǎng)液等。
6. 環(huán)境因素:實驗室環(huán)境、試驗臺、超凈臺、培養(yǎng)箱等可能被支原體污染,引起細(xì)胞的污染。
7. 抗*素耐藥性:支原體可能對某些抗*素產(chǎn)生耐藥性,使得治*效果變差。
8. 檢測和清理方法的局限性:一些傳統(tǒng)的支原體檢測和清理方法可能不夠靈敏或有效,導(dǎo)致難以徹底清理支原體
對于同一個樣品,如果一步法恒溫試劑盒檢測結(jié)果為陽性,而PCR檢測為陰性,可能的原因包括:
1. 檢測的支原體種類不同:一步法恒溫試劑盒可能檢測的支原體種類更多,例如可以涵蓋27種支原體,而PCR檢測可能只針對常見的12種支原體進(jìn)行檢測。因此,如果樣品中污染的支原體種類不在PCR檢測的范圍內(nèi),就可能出現(xiàn)一步法檢測為陽性而PCR檢測為陰性的情況。
2. 靈敏度的差異:PCR方法的靈敏度可能高于一步法恒溫檢測法。PCR可以檢測到低至單個拷貝的支原體,而一步法恒溫檢測可能需要更高的支原體拷貝數(shù),例如10^3^個拷貝。如果樣品中支原體的數(shù)量低于一步法檢測的靈敏度閾值,PCR檢測可能無法檢測到,導(dǎo)致陰性結(jié)果。
3. 樣品中可能含有抑制PCR反應(yīng)的物質(zhì):如果樣品中存在PCR反應(yīng)的抑制物,可能會影響PCR的擴(kuò)增效率,導(dǎo)致即使存在支原體,PCR檢測也可能呈現(xiàn)陰性結(jié)果。
4. 試劑盒的特異性和交叉反應(yīng):一步法恒溫試劑盒可能具有更高的特異性,減少了與其他微生物的交叉反應(yīng),從而在PCR檢測為陰性時仍能準(zhǔn)確檢測到支原體的存在。
支原體檢測假陰性的原因?
方法
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靈敏度
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優(yōu)勢
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劣勢
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培養(yǎng)法
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☆☆☆
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ü 便捷
ü 便宜
ü 金標(biāo)準(zhǔn)
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ü 費勞力
ü 耗時長
ü 需要特定的培養(yǎng)基
ü 特定支原體種類需要特定的培養(yǎng)基
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DNA染色
(DAPI or Hoescht)
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☆
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ü 迅速
ü 便捷
ü 便宜
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ü 可能難以判讀結(jié)果
ü 無法鑒別支原體種屬
ü 可能假陽性可能性
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間接染色
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☆☆☆
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ü 迅速
ü 便宜
ü 易檢測
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ü 費時
ü 需要細(xì)胞系指示
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ELISA
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☆☆
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ü 迅速
ü 客觀,易判讀結(jié)果
ü 可以鑒別支原體種屬
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ü 受抗體限制
ü 價格高
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免疫染色
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☆☆
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ü 迅速
ü 可檢測支原體種屬
ü 價格略高
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ü 可檢測的支原體種屬有限
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放射自顯影
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☆☆
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ü 迅速
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ü 難以判讀結(jié)果
ü 無法鑒別支原體種屬
ü 費勞力
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生物發(fā)光
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☆☆
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ü 迅速
ü 便捷
ü 便宜
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ü 難以判讀結(jié)果
ü 無法鑒別支原體種屬
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PCR
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☆☆☆
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ü 便宜
ü 迅速
ü 具有特異性
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ü 可能假陽性可能性
ü 檢測特異性依賴引物特異性
ü 需要提取DNA
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Real-Time PCR
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☆☆☆
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ü 便捷
ü 迅速
ü 具有特異性
ü 結(jié)果可靠
ü 高通量
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ü 可能假陽性可能性
ü 檢測特異性依賴引物特異性
ü 需要提取DNA
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LAMP
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☆☆
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ü 便捷
ü 無需DNA提取
ü *需10min左右的實驗操作時間
ü 具有特異性
ü 高通量
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ü 可能假陽性可能性
ü 檢測特異性依賴引物特異性
細(xì)胞培養(yǎng)中污染了支原體會怎么樣?廣州支原體預(yù)防試劑貨期
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支原體去除的原理是什么?杭州細(xì)胞支原體預(yù)防試劑現(xiàn)貨
細(xì)胞培養(yǎng)過程中如果發(fā)現(xiàn)支原體污染,可以采取以下一些方法嘗試去除污染:
1. 抗*素治*:使用針對支原體有效的抗*素,如四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類、氟喹諾酮類等。根據(jù)搜索結(jié)果,可以加入高濃度抗*素進(jìn)行沖擊治*,例如慶大霉素 200ug/ml,四環(huán)素10ug/ml,卡那霉素50ug/ml,并維持24-48小時后再換入常規(guī)培養(yǎng)液。
2. 加溫處理:支原體不耐熱,可以將細(xì)胞置于41°C中處理5-10小時以殺滅支原體。但需注意,高溫也可能對細(xì)胞造成傷害,因此需要預(yù)先確定對細(xì)胞影響較小的處理時間。
3. 使用支原體清除劑:市場上有專門的支原體清除劑,按照產(chǎn)品說明使用。
4. 使用支原體清*培養(yǎng)基:如Procell支原體清*培養(yǎng)基,這類產(chǎn)品含有清*支原體的特殊成分,可以抑制支原體生長并挽救珍貴細(xì)胞。
5. 物理方法:一些實驗室采用過濾的方法,使用0.22μm或更小孔徑的濾膜過濾培養(yǎng)基和試劑,以阻止支原體的侵入。
6. 細(xì)胞傳代:在一些情況下,通過細(xì)胞傳代可能有助于減少支原體的污染程度。
杭州細(xì)胞支原體預(yù)防試劑現(xiàn)貨
上海世途科生物(CYTOCH)是一家生命科學(xué)上游工具類企業(yè)。聚焦于細(xì)胞生物學(xué)相關(guān)的化學(xué)技術(shù)及相關(guān)產(chǎn)品的開發(fā)與生產(chǎn),產(chǎn)品覆蓋細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品如胎牛血清,支原體檢測,支原體去除試劑等,細(xì)胞轉(zhuǎn)染產(chǎn)品如轉(zhuǎn)染試劑,及細(xì)胞檢測產(chǎn)品如增殖凋亡檢測,報告基因等多個科研場景,給終端客戶提供良好的產(chǎn)品以及服務(wù)。
CYTOCH世途科生物正穩(wěn)步前行,致力于將自己打造成為全球客戶信賴的中國生命科學(xué)工具品牌,助力全球科研工作者在生命科學(xué)的探索之旅中不斷取得突破。