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上海支原體預(yù)防貨期

來源： 發(fā)布時間：2024-06-18

支原體污染后的細(xì)胞是否應(yīng)該直接丟棄還是嘗試重新培養(yǎng)，這取決于多種因素，包括細(xì)胞的重要性、污染的程度、以及是否有有效的方法來清*支原體。以下是一些處理支原體污染的常見方法：
1. 直接丟棄：對于非重要的細(xì)胞，如果培養(yǎng)中的細(xì)胞、WCB的細(xì)胞等，可以采取直接將培養(yǎng)物與用過的培養(yǎng)基滅活后丟棄的方式。
2. 使用支原體清除劑：支原體清除劑處理細(xì)胞，作用濃度為25μg/ml，兩周可以清*支原體。
3. 使用支原體清*培養(yǎng)基：每2~3天更換一次新鮮培養(yǎng)液，并用無菌的PBS洗滌細(xì)胞，處理15天后進(jìn)行支原體檢測，以確定支原體是否被完全去除。
4. 支原體去除試劑：這是一種混合制劑，可以通過抑制DNA和支原體生長所必須的相關(guān)蛋白合成來取得良好的支原體清*效果，且對細(xì)胞無傷害
如何檢測新鮮的培養(yǎng)基是否有支原體污染？上海支原體預(yù)防貨期

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支原體檢測的應(yīng)用場景非常廣*，以下是一些主要的應(yīng)用領(lǐng)域：
1. 細(xì)胞培養(yǎng)：在實驗室和生物制品工廠中，細(xì)胞培養(yǎng)過程容易受到支原體污染。支原體污染可能導(dǎo)致細(xì)胞功能改變，影響實驗結(jié)果和生物制品的質(zhì)量。因此，支原體檢測在細(xì)胞培養(yǎng)的質(zhì)量控制中至關(guān)重要?？蒲兄谐Ｓ玫葴財U(kuò)增的方法簡單便捷。
2. 生物制品生產(chǎn)：在生物制品的生產(chǎn)過程中，如疫苗、生物藥物等，需要確保產(chǎn)品無支原體污染，以保證其安全性和有效性。監(jiān)管機(jī)構(gòu)要求在生產(chǎn)的關(guān)鍵階段進(jìn)行支原體檢測。通常采用qPCR的方式進(jìn)行。
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目前有 210 +種不同種類的支原體分布于人類、動物、昆蟲和植物中，其中 20 +種在細(xì)胞培養(yǎng)中被發(fā)現(xiàn)為污染物。支原體在實驗室中的傳播來源多種多樣，主要來源包括實驗室人員、胎牛血清（FBS）或新生牛血清（NBS）、以及由豬來源的胰蛋白酶溶液。此外，來自其他實驗室或商業(yè)供應(yīng)商的細(xì)胞培養(yǎng)物、培養(yǎng)基、污染的試劑；非無菌供應(yīng)品、培養(yǎng)基和溶液；實驗室人員；培養(yǎng)箱；液氮；空氣顆粒和氣溶膠；抗*素的過度使用；細(xì)胞培養(yǎng)器皿的不正確密封；以及其他的支原體細(xì)胞培養(yǎng)物等都可能成為支原體的傳播途徑。

支原體預(yù)防的實驗步驟主要包括以下幾個方面：
1. 無菌操作技術(shù)：在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)程，包括穿戴適當(dāng)?shù)膶嶒灧?、手套，使用無菌工具和耗材。
2. 環(huán)境控制：保持實驗室環(huán)境清潔，定期消毒工作臺和實驗室表面，使用層流罩或生物安全柜進(jìn)行細(xì)胞操作。
3. 細(xì)胞培養(yǎng)基和試劑的無菌過濾：所有加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中的試劑和補(bǔ)充物，如血清、抗*素等，都應(yīng)通過無菌過濾以去除支原體。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)基和試劑的檢測：在添加到細(xì)胞培養(yǎng)物之前，對新的細(xì)胞培養(yǎng)基和試劑進(jìn)行支原體檢測，以確保它們沒有被污染。
5. 定期檢測：即使采取了預(yù)防措施，也應(yīng)定期對細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行支原體檢測，以確保及時發(fā)現(xiàn)并處理潛在的污染。
6. 避免交叉污染：避免從一個細(xì)胞培養(yǎng)物到另一個的交叉污染，使用的移液器和工具，避免在不同細(xì)胞培養(yǎng)物之間重復(fù)使用。
7. 細(xì)胞培養(yǎng)物的篩選：使用已知無支原體污染的細(xì)胞株進(jìn)行實驗，或者在開始實驗前對細(xì)胞株進(jìn)行篩選。
8. 使用預(yù)防性試劑：在某些情況下，可以在細(xì)胞培養(yǎng)過程中添加特定的預(yù)防性試劑，如支原體預(yù)防劑，以降低污染風(fēng)險。
細(xì)胞培養(yǎng)中污染了支原體會怎么樣？

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方法

靈敏度

優(yōu)勢

劣勢

培養(yǎng)法

☆☆☆

ü 便捷

ü 便宜

ü 金標(biāo)準(zhǔn)

ü 費(fèi)勞力

ü 耗時長

ü 需要特定的培養(yǎng)基

ü 特定支原體種類需要特定的培養(yǎng)基

DNA染色

(DAPI or Hoescht)

☆

ü 迅速

ü 便捷

ü 便宜

ü 可能難以判讀結(jié)果

ü 無法鑒別支原體種屬

ü 可能假陽性可能性

間接染色

☆☆☆

ü 迅速

ü 便宜

ü 易檢測

ü 費(fèi)時

ü 需要細(xì)胞系指示

ELISA

☆☆

ü 迅速

ü 客觀，易判讀結(jié)果

ü 可以鑒別支原體種屬

ü 受抗體限制

ü 價格高

免疫染色

☆☆

ü 迅速

ü 可檢測支原體種屬

ü 價格略高

ü 可檢測的支原體種屬有限

放射自顯影

☆☆

ü 迅速

ü 難以判讀結(jié)果

ü 無法鑒別支原體種屬

ü 費(fèi)勞力

生物發(fā)光

☆☆

ü 迅速

ü 便捷

ü 便宜

ü 難以判讀結(jié)果

ü 無法鑒別支原體種屬

PCR

☆☆☆

ü 便宜

ü 迅速

ü 具有特異性

ü 可能假陽性可能性

ü 檢測特異性依賴引物特異性

ü 需要提取DNA

Real-Time PCR

☆☆☆

ü 便捷

ü 迅速

ü 具有特異性

ü 結(jié)果可靠

ü 高通量

ü 可能假陽性可能性

ü 檢測特異性依賴引物特異性

ü 需要提取DNA

LAMP

☆☆

ü 便捷

ü 無需DNA提取

ü *需10min左右的實驗操作時間

ü 具有特異性

ü 高通量

ü 可能假陽性可能性

ü 檢測特異性依賴引物特異性 支原體檢測PCR法和LAMP方法的優(yōu)劣勢比較。上海細(xì)胞支原體檢測時間

支原體檢測方法LAMP法？上海支原體預(yù)防貨期

支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)中普遍的問題之一，細(xì)胞庫中或正在使用的細(xì)胞中，支原體的污染率約為15%-35%。并對培養(yǎng)細(xì)胞的生理和代謝造成諸多影響：
01/ 爭奪營養(yǎng)：支原體的污染會阻礙細(xì)胞生長和增殖 
02/ 改變蛋白質(zhì)、RNA 或 DNA 合成的水平 
03/ 改變基因表達(dá)、細(xì)胞信號傳導(dǎo)和形態(tài) 
04/ 損害膜和細(xì)胞器 
05/ 導(dǎo)致突變和染色體變化 
06/ 時間、金錢和有價值的細(xì)胞丟失：支原體的污染會導(dǎo)致嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失以及研究時間損失
07/ 實驗結(jié)果的不可靠性 
08/ 生物安全問題
上海支原體預(yù)防貨期

標(biāo)簽： 免疫沉淀 支原體