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廣州Protein AG免疫沉淀磁珠的選擇

來源： 發(fā)布時間：2024-06-28

免疫沉淀技術（Immunoprecipitation, IP）的實驗設計通常包括以下幾個關鍵步驟：

1. 目標蛋白質(zhì)的選擇：
2. 抗體的選擇：選擇特異性強、親和力高的抗體來捕獲目標蛋白質(zhì)
3. 樣本的準備：收集和準備細胞或組織樣本。
4. 蛋白質(zhì)的裂解和釋放：選擇合適的裂解條件，如pH值、離子強度、去污劑等。
5. 蛋白質(zhì)濃度的測定：確定裂解液中蛋白質(zhì)的濃度，以便于后續(xù)步驟的標準化。
6. 免疫沉淀的操作：將特異性抗體與裂解液混合，并在適宜的條件下孵育，以形成抗體-抗原復合物。
7. 非特異性結(jié)合的減少：通過預純化步驟去除可能的非特異性結(jié)合蛋白。
8. 洗滌：多次洗滌以去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)和雜質(zhì)。
9. 目標蛋白質(zhì)的洗脫：使用適當?shù)木彌_液洗脫抗體-抗原復合物。
10. 后續(xù)分析：對洗脫的蛋白質(zhì)進行進一步分析，如Western Blot.
11. 對照實驗：設計適當?shù)恼龑φ蘸拓搶φ?，以評估實驗的特異性和敏感性。
免疫沉淀技術ChIP的實驗設計。廣州Protein AG免疫沉淀磁珠的選擇

廣州Protein AG免疫沉淀磁珠的選擇,免疫沉淀

免疫沉淀技術（Immunoprecipitation, IP）的實驗方法通常包括以下步驟：
1. 樣本準備
2. 蛋白質(zhì)濃度測定：使用BCA、Bradford或Lowry等方法測定裂解液中蛋白質(zhì)的濃度。
3. 抗體預處理：如果使用預固定的抗體，需先將抗體固定在固相支持物上，如瓊脂糖珠或磁性微珠。
4. 免疫沉淀反應：將裂解液與特異性抗體（固定或未固定）混合，并在4°C下緩慢搖晃孵育過夜，以允許抗體與目標蛋白質(zhì)充分結(jié)合。
5. 固相支持物的回收：對于未固定的抗體，加入與抗體特異性結(jié)合的蛋白A或蛋白G結(jié)合的固相支持物。
6. 洗滌：去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)和雜質(zhì)，通常需要多次洗滌固相支持物。
7. 洗脫：使用適當?shù)南疵摼彌_液（如加熱的SDS加載緩沖液或酸性緩沖液）從固相支持物上洗脫免疫復合物。
8. 后續(xù)分析：對洗脫的蛋白質(zhì)進行SDS-PAGE電泳、Western Blot、質(zhì)譜分析等，以進一步分析目標蛋白質(zhì)。
anti Flag免疫沉淀磁珠原理免疫沉淀技術RIP的應用有哪些？

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免疫沉淀技術RIP（RNA Immunoprecipitation，RNA免疫沉淀）是一種用于研究細胞內(nèi)RNA與蛋白質(zhì)相互作用的技術。RIP技術可以幫助我們了解轉(zhuǎn)錄后調(diào)控網(wǎng)絡的動態(tài)過程，并發(fā)現(xiàn)miRNA等非編碼RNA的調(diào)節(jié)靶點。
RIP技術的原理是利用針對特定RNA結(jié)合蛋白的抗體，將細胞內(nèi)的RNA-蛋白質(zhì)復合物沉淀下來。然后，可以通過分離純化，對這些復合物中的RNA進行檢測，如qPCR驗證或測序分析。
表觀遺傳學和RNA生物學領域?qū)Σ煌琑NA作用和功能的關注增加。RNA-蛋白質(zhì)相互作用能夠調(diào)控mRNA和非編碼RNA的功能。對RNA潛能的這一新認識帶動了新方法的發(fā)展，使研究人員能夠定位 RNA-蛋白質(zhì)相互作用。

ChIP（染色質(zhì)免疫沉淀）實驗是一種用于研究蛋白質(zhì)與DNA相互作用的技術。以下是ChIP實驗的實驗方法概述：
1. 交聯(lián)：將細胞與交聯(lián)劑（如1%甲醛）孵育，通常在室溫下進行10-15分鐘。
2. 終止交聯(lián)：添加甘氨酸以終止交聯(lián)反應，孵育5分鐘。
3. 收集細胞：通過離心收集細胞，并用PBS洗滌以去除交聯(lián)劑。
4. 細胞裂解：使用裂解緩沖液裂解細胞，釋放染色質(zhì)。
5. 染色質(zhì)剪切：使用超聲波或酶消化將染色質(zhì)剪切成適當大小的片段。
6. 免疫沉淀：將剪切后的染色質(zhì)與特異性抗體孵育，然后添加蛋白A/G磁珠。
7. 洗滌：用低鹽、高鹽和LiCl洗滌液洗滌磁珠，去除非特異性結(jié)合物。
8. 洗脫：用洗脫緩沖液洗脫DNA。
9. 逆轉(zhuǎn)交聯(lián)：用蛋白酶K處理，然后在65°C下加熱過夜以逆轉(zhuǎn)交聯(lián)。
10. DNA純化：使用商業(yè)試劑盒或標準酚/氯仿方法純化DNA。
11. 分析：使用qPCR分析富集的DNA，或進行測序以確定蛋白質(zhì)結(jié)合位點。
免疫沉淀RIP技術選瓊脂糖珠還是磁珠？

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免疫沉淀是利用抗體特異性反應純化富集目的蛋白的一種方法?？贵w與細胞裂解液或表達上清中相應的蛋白結(jié)合后，再與蛋白A/G（ProteinA/G）或二抗偶聯(lián)的珠子（agarose或Sepharose）孵育，通過離心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗體-目的蛋白復合物，沉淀經(jīng)過洗滌后，重懸于電泳上樣緩沖液，煮沸5-10min，在高溫及還原劑的作用下，抗原與抗體解離，離心收集上清，上清中包括抗體、目的蛋白和少量的雜蛋白。免疫沉淀是一種生物學技術，它利用抗體的特異性結(jié)合特性來富集和分離混合物中的特定蛋白質(zhì)。這種技術是研究蛋白質(zhì)表達、蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用、蛋白質(zhì)修飾和蛋白質(zhì)功能的強大工具。免疫沉淀和免疫共沉淀的區(qū)別？廣州Protein AG免疫沉淀磁珠的選擇

免疫沉淀純化所得抗原量低是什么原因？廣州Protein AG免疫沉淀磁珠的選擇

ChIP技術的應用：
1. 轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點的鑒定：研究特定轉(zhuǎn)錄因子在基因組上的結(jié)合模式。
2. 組蛋白修飾的分布：分析不同組蛋白修飾在基因組上的分布情況，這些修飾與基因的活躍或沉默有關。
3. DNA甲基化研究：結(jié)合ChIP技術可以研究DNA甲基化對基因表達的影響。
4. 染色質(zhì)結(jié)構和功能：研究染色質(zhì)重塑對基因表達和細胞功能的影響。
5. 疾病相關基因的調(diào)控：研究疾病狀態(tài)下基因調(diào)控網(wǎng)絡的變化。
ChIP技術是表觀遺傳學研究中的一個重要工具，它可以幫助科學家們理解基因表達是如何在分子水平上被精確調(diào)控的。
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