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廣州細胞培養(yǎng)支原體檢測要多久

來源： 發(fā)布時間：2024-06-29

細胞培養(yǎng)中如果污染了支原體，會有以下幾種影響：

1. 細胞生長受影響：支原體污染會導(dǎo)致細胞生長速度減慢，甚至停止生長。細胞可能會變圓，從培養(yǎng)瓶壁脫落。
2. 細胞形態(tài)變化：雖然某些細胞在支原體污染后形態(tài)變化不明顯，但有些細胞會出現(xiàn)體積增大，細胞碎片增多，培養(yǎng)瓶中細胞間隙出現(xiàn)膜狀沉積等現(xiàn)象。
3. 代謝和功能改變：支原體污染會影響細胞的代謝和功能，例如培養(yǎng)液中的精氨酸被大量消耗，引起細胞蛋白質(zhì)、DNA、rRNA、mRNA的合成障礙。支原體活動還可能引起培養(yǎng)液成分和pH值的變化。
4. 實驗結(jié)果受影響：使用被支原體污染的細胞進行實驗會嚴重影響實驗結(jié)果，因為支原體會抑制細胞生長，導(dǎo)致染色體畸變，細胞膜抗原性改變，細胞復(fù)蘇后存活率降低等。
5. 細胞培養(yǎng)環(huán)境的污染：一株污染的細胞可能成為實驗室的污染源，對工作區(qū)域以及培養(yǎng)箱和液氮罐造成污染，進而污染其他細胞，導(dǎo)致其他細胞繼發(fā)性污染。
6. 科研結(jié)果的重復(fù)性問題：由于支原體污染，某些實驗結(jié)果可能能在支原體陽性的細胞中得到，導(dǎo)致科研結(jié)果的重復(fù)性受到影響
支原體檢測的樣本用什么合適？廣州細胞培養(yǎng)支原體檢測要多久

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在科研中，支原體檢測是確保細胞培養(yǎng)純凈性的重要環(huán)節(jié)。以下是一些在科研中常見的支原體檢測方法：
1. 支原體培養(yǎng)法：這是一種傳統(tǒng)的檢測方法，通過將細胞培養(yǎng)物接種到特定的培養(yǎng)基中，觀察是否有支原體生長。這是直接的檢測方法，但耗時較長，通常需要數(shù)周時間。
2. DNA染色法：使用熒光染料（如Hoechst或DAPI）染色細胞核，然后通過熒光顯微鏡觀察。這種方法操作簡便，可以快速得到結(jié)果，但特異性不高，可能會有假陽性。
3. 聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）法：這是一種分子生物學(xué)技術(shù)，通過設(shè)計特異性的引物，擴增支原體DNA，從而檢測支原體的存在。PCR法具有高靈敏度和特異性，已成為日常細胞培養(yǎng)維護的可靠方法。
4. 核酸擴增技術(shù)（NAT）：NAT技術(shù)通過擴增并檢測特定的支原體基因組保守序列來進行支原體污染檢測，具有快速、簡便的特點。
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細胞庫支原體檢測的必要性主要體現(xiàn)在以下幾個方面：
1. 確保細胞庫的質(zhì)量與安全性：細胞庫的建立需要為生物制品的生產(chǎn)提供檢定合格、質(zhì)量相同、能持續(xù)穩(wěn)定傳代的細胞。支原體檢測是確保細胞庫中細胞質(zhì)量的重要環(huán)節(jié)。
2. 符合監(jiān)管要求：支原體檢測是生物制品安全性監(jiān)管的一部分，全球范圍內(nèi)的藥典、法規(guī)和指導(dǎo)文件中都有支原體檢測的相關(guān)說明。
3. 避免對生物制品的影響：支原體污染可能會影響生物制品的安全性和有效性，因此需要通過檢測來避免這種風(fēng)險。
4. 維護細胞培養(yǎng)的穩(wěn)定性：支原體是真核細胞和干細胞培養(yǎng)中最常見的問題之一，它們可以改變細胞的代謝、減緩增殖速度，甚至引起染色體畸變。
5. 預(yù)防交叉污染：由于支原體可以通過氣溶膠和微粒污染實驗室其他區(qū)域，支原體檢測有助于預(yù)防交叉污染的發(fā)生。
6. 保障數(shù)據(jù)的可靠性：支原體污染可能會影響實驗結(jié)果的準確性，因此定期進行支原體檢測有助于保障研究數(shù)據(jù)的可靠性。
7. 常規(guī)監(jiān)測的重要性：支原體應(yīng)成為細胞培養(yǎng)實驗室的常規(guī)監(jiān)測項目，以確保細胞培養(yǎng)的質(zhì)量和安全。
8. 遵守藥典規(guī)定：根據(jù)中國藥典的規(guī)定，每8~12代細胞培養(yǎng)物應(yīng)進行支原體檢查，以符合規(guī)定。

細胞培養(yǎng)中，需要去除支原體的污染：支原體污染是細胞培養(yǎng)中 普遍的問題之一，細胞庫中或正在使用的細胞中，支原體的污染率約為15%-35%。并對培養(yǎng)細胞的生理和代謝造成諸多影響：
01/ 爭奪營養(yǎng) – 阻礙細胞生長和增殖 
02/ 改變蛋白質(zhì)、RNA 或 DNA 合成的水平 
03/ 改變基因表達、細胞信號傳導(dǎo)和形態(tài) 
04/ 損害膜和細胞器 
05/ 導(dǎo)致突變和染色體變化 
06/ 時間、金錢和有價值的細胞丟失，耽誤研究時間
07/ 實驗結(jié)果的不可靠性，實驗結(jié)果的重復(fù)性 降低
08/ 生物安全問題
為什么要去除支原體？

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支原體的預(yù)防可通過以下方式：
1. 控制污染源：通過定期檢測和去除細胞培養(yǎng)中的支原體污染，確保細胞培養(yǎng)體系內(nèi)無支原體存在，從而獲得準確有效的實驗數(shù)據(jù)。
2. 改善無菌操作技術(shù)：通過提高實驗人員的操作技術(shù)和意識，避免在細胞培養(yǎng)過程中引入支原體污染。
3. 使用無菌設(shè)備和耗材：使用無菌的細胞培養(yǎng)設(shè)備和耗材，如無菌培養(yǎng)基、血清等，減少支原體污染的風(fēng)險。
4. 定期消毒和清潔：對實驗室環(huán)境進行定期的消毒和清潔，包括工作臺、培養(yǎng)箱等，以減少支原體的潛在污染。
5. 使用預(yù)防性試劑：使用專門針對支原體的預(yù)防性試劑，如加入細胞培養(yǎng)基中的預(yù)防劑、超凈臺噴霧、水浴鍋預(yù)防和細胞培養(yǎng)箱水盤預(yù)防等，以預(yù)防支原體污染。
6. 提高實驗室人員對支原體污染的認識：通過科普教育和培訓(xùn)，提高實驗室人員對支原體污染的認識和預(yù)防意識。
7. 建立嚴格的實驗室管理規(guī)程：制定并執(zhí)行嚴格的實驗室管理規(guī)程，包括樣本處理、廢物處理、設(shè)備維護等，以降低支原體污染的風(fēng)險。
支原體檢測方法qPCR法的應(yīng)用。廣州細胞培養(yǎng)支原體檢測要多久

支原體檢測實驗的方法？廣州細胞培養(yǎng)支原體檢測要多久

qPCR法，即定量聚合酶鏈式反應(yīng)（QuantitativePolymeraseChainReaction）法，在支原體檢測中的應(yīng)用主要體現(xiàn)在以下幾個方面：

1. 快速定性檢測：qPCR法可以快速檢測生產(chǎn)原料、細胞庫、病毒種子、病毒或細胞收獲液、治*用細胞中潛在的支原體污染。
2. 臨床樣本檢測：qPCR法可用于檢測實驗室樣本及臨床樣本中的支原體，具有快速、特異性強、靈敏度高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點。
3. 監(jiān)管要求：基于TaqMan的qPCR測定專門針對檢測細胞治*和復(fù)雜生物生產(chǎn)樣本中的支原體而開發(fā)，其性能滿足或超出監(jiān)管要求，如10CFU/mL。
4. 藥物質(zhì)量控制：qPCR法提供早期檢測支原體污染的方法，適用于藥物質(zhì)量控制，具有快速、高度特異性、靈敏性，并符合國際準則。
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