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anti Flag免疫沉淀

來源： 發(fā)布時(shí)間：2024-06-29

Co-IP（Co-Immunoprecipitation，共免疫沉淀）的實(shí)驗(yàn)方法通常包括以下步驟：
1. 細(xì)胞培養(yǎng)與裂解：細(xì)胞在適宜的培養(yǎng)條件下生長(zhǎng)到適當(dāng)?shù)拿芏取?/span>
蛋白質(zhì)分離：裂解后的細(xì)胞混合物通過離心去除未破碎的細(xì)胞碎片和未裂解的細(xì)胞。收集上清液
2. 抗體的添加：將特異性抗體（針對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)的抗體）加入到裂解物中。
3. 免疫復(fù)合物的形成：抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合后，形成免疫復(fù)合物。
4. 親和介質(zhì)的使用：向混合物中添加蛋白A或蛋白G結(jié)合的珠子（如瓊脂糖或磁性珠子）。
5. 免疫復(fù)合物的捕獲：將混合物與珠子孵育一段時(shí)間后，使用磁鐵或離心的方法將珠子收集起來，同時(shí)捕獲了與之結(jié)合的免疫復(fù)合物。
6. 洗滌：洗滌珠子以去除未特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)和其他分子。
7. 洗脫：使用適當(dāng)?shù)木彌_液將免疫復(fù)合物從珠子上洗脫下來，常用的緩沖液包括SDS樣品緩沖液，用于后續(xù)的電泳分析。
8. 蛋白質(zhì)分析：洗脫的蛋白質(zhì)可以通過SDS-PAGE凝膠電泳、Western blot、質(zhì)譜分析等方法進(jìn)行進(jìn)一步分析。
9. 實(shí)驗(yàn)對(duì)照：實(shí)驗(yàn)中應(yīng)包括陽性對(duì)照和陰性對(duì)照，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。
10. 數(shù)據(jù)分析：對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析，確認(rèn)目標(biāo)蛋白是否成功沉淀，并鑒定任何可能的相互作用蛋白。
免疫沉淀Co-IP技術(shù)選瓊脂糖珠還是磁珠？anti Flag免疫沉淀

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免疫共沉淀分析（Co-IP）與IP十分類似，基本的技術(shù)都是采用目標(biāo)抗原特異性的固相化抗體；但I(xiàn)P的目標(biāo)是純化單一抗原，而Co-IP旨在分離抗原及與抗原結(jié)合的蛋白質(zhì)或配體。

在Co-IP實(shí)驗(yàn)中，已知抗原稱為誘餌蛋白，與之結(jié)合的蛋白則稱為靶蛋白。靶蛋白可能是一些復(fù)雜的伴侶蛋白、信號(hào)分子、結(jié)構(gòu)蛋白、輔助因子等，蛋白間相互作用強(qiáng)度范圍可能介于高度瞬時(shí)和十分穩(wěn)定之間。
基本的Co-IP實(shí)驗(yàn)方案與IP相同，實(shí)際上任何IP系統(tǒng)均可用于Co-IP。但是，還有許多其他因素需要考慮，例如，結(jié)合和洗滌條件的優(yōu)化，優(yōu)化時(shí)，需要考慮到誘餌蛋白-靶蛋白的相互作用強(qiáng)度以及抗體-誘餌蛋白的親和力。
anti DYKDDDDK免疫沉淀磁珠應(yīng)用免疫沉淀和免疫共沉淀的區(qū)別？

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免疫沉淀是利用抗體特異性反應(yīng)純化富集目的蛋白的一種方法?？贵w與細(xì)胞裂解液或表達(dá)上清中相應(yīng)的蛋白結(jié)合后，再與蛋白A/G（ProteinA/G）或二抗偶聯(lián)的珠子（agarose或Sepharose）孵育，通過離心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗體-目的蛋白復(fù)合物，沉淀經(jīng)過洗滌后，重懸于電泳上樣緩沖液，煮沸5-10min，在高溫及還原劑的作用下，抗原與抗體解離，離心收集上清，上清中包括抗體、目的蛋白和少量的雜蛋白。免疫沉淀是一種生物學(xué)技術(shù)，它利用抗體的特異性結(jié)合特性來富集和分離混合物中的特定蛋白質(zhì)。這種技術(shù)是研究蛋白質(zhì)表達(dá)、蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用、蛋白質(zhì)修飾和蛋白質(zhì)功能的強(qiáng)大工具。

免疫沉淀技術(shù)（Immunoprecipitation，簡(jiǎn)稱IP）是一種生物化學(xué)方法，它利用特異性抗體對(duì)抗原進(jìn)行親和純化。在含有目的抗原的細(xì)胞裂解液中加入特定的抗體以及Protein A/G-Beads（預(yù)先將Protein A/G固定結(jié)合在磁珠上），根據(jù)抗原與抗體、Protein A/G與抗體的Fc的特異性，形成“抗原-抗體-Protein A/G-Beads”復(fù)合物，清洗離心后去除溶液中未結(jié)合的雜蛋白，檢測(cè)是否存在目的蛋白。
免疫沉淀技術(shù)常用于從細(xì)胞或組織裂解物中分離用于免疫印跡檢測(cè)或其他檢測(cè)技術(shù)的蛋白和其他生物分子。它的目標(biāo)是分離足夠用于Western Blot或其他檢測(cè)方法檢測(cè)的蛋白質(zhì)。
免疫沉淀Co-IP抗體的選擇？

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免疫共沉淀分析（Co-IP）實(shí)驗(yàn)原理與IP十分類似，基本的技術(shù)都是采用目標(biāo)抗原特異性的固相化抗體；但I(xiàn)P的目標(biāo)是純化單一抗原，而Co-IP旨在分離抗原及與抗原結(jié)合的蛋白質(zhì)或配體。

在Co-IP實(shí)驗(yàn)中，已知抗原稱為誘餌蛋白，與之結(jié)合的蛋白則稱為靶蛋白。靶蛋白可能是一些復(fù)雜的伴侶蛋白、信號(hào)分子、結(jié)構(gòu)蛋白、輔助因子等，蛋白間相互作用強(qiáng)度范圍可能介于高度瞬時(shí)和十分穩(wěn)定之間。基本的Co-IP實(shí)驗(yàn)方案與IP相同，實(shí)際上任何IP系統(tǒng)均可用于Co-IP。但是，還有許多其他因素需要考慮，例如，結(jié)合和洗滌條件的優(yōu)化，優(yōu)化時(shí)，需要考慮到誘餌蛋白-靶蛋白的相互作用強(qiáng)度以及抗體-誘餌蛋白的親和力。
免疫沉淀技術(shù)是什么？廣州蛋白免疫沉淀實(shí)驗(yàn)視頻

免疫沉淀技術(shù)RIP的實(shí)驗(yàn)方法。anti Flag免疫沉淀

免疫沉淀技術(shù)的實(shí)驗(yàn)方法通常包括以下步驟：
1. 樣本準(zhǔn)備
2. 細(xì)胞裂解：使用裂解緩沖液（含有蛋白酶抑制劑以防止蛋白質(zhì)降解）裂解細(xì)胞，釋放蛋白質(zhì)。
3. 蛋白質(zhì)濃度測(cè)定：使用BCA、Bradford或Lowry等方法測(cè)定裂解液中蛋白質(zhì)的濃度。
4. 抗體預(yù)處理：如果使用預(yù)固定的抗體，需先將抗體固定在固相支持物上，如瓊脂糖珠或磁性微珠。
5. 免疫沉淀反應(yīng)：將裂解液與特異性抗體（固定或未固定）混合，并在4°C下緩慢搖晃孵育過夜，以允許抗體與目標(biāo)蛋白質(zhì)充分結(jié)合。
6. 固相支持物的回收：對(duì)于未固定的抗體，加入與抗體特異性結(jié)合的蛋白A或蛋白G結(jié)合的固相支持物。
7. 洗滌：去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)和雜質(zhì)，通常需要多次洗滌固相支持物。
8. 洗脫：使用適當(dāng)?shù)南疵摼彌_液（如加熱的SDS加載緩沖液或酸性緩沖液）從固相支持物上洗脫免疫復(fù)合物。
9. 后續(xù)分析：對(duì)洗脫的蛋白質(zhì)進(jìn)行SDS-PAGE電泳、Western Blot、質(zhì)譜分析等，以進(jìn)一步分析目標(biāo)蛋白質(zhì)。
10. 對(duì)照實(shí)驗(yàn)：包括正對(duì)照（已知能沉淀目標(biāo)蛋白的抗體）和負(fù)對(duì)照（非特異性抗體或無抗體）以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的特異性。
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標(biāo)簽： 支原體 免疫沉淀