細(xì)胞培養(yǎng)中支原體檢測(cè)出現(xiàn)假陰性結(jié)果可能由以下原因引起:
1. 樣本質(zhì)量問(wèn)題:如果采集的樣本中含有抑制劑或者樣本在處理、存儲(chǔ)過(guò)程中出現(xiàn)問(wèn)題,可能會(huì)影響PCR反應(yīng),導(dǎo)致假陰性。
2. 技術(shù)或操作問(wèn)題:實(shí)驗(yàn)操作中的誤差,如樣本處理不當(dāng)、試劑配制錯(cuò)誤、儀器設(shè)備問(wèn)題等,都可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果。
3. 檢測(cè)方法的局限性:某些檢測(cè)方法可能存在靈敏度或特異性不足的問(wèn)題,導(dǎo)致無(wú)法準(zhǔn)確檢測(cè)到病原體。
4. 培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的影響:培養(yǎng)法的靈敏度容易受到培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的影響,如果培養(yǎng)條件不適宜,可能導(dǎo)致支原體無(wú)法生長(zhǎng)或生長(zhǎng)緩慢,從而檢測(cè)不到。
5. 支原體種類問(wèn)題:不是所有的支原體種類都能通過(guò)培養(yǎng)法檢測(cè)到,某些特定種類的支原體可能無(wú)法在常用的培養(yǎng)基中生長(zhǎng),導(dǎo)致漏檢。
支原體檢測(cè)有哪些方法?上海細(xì)胞支原體預(yù)防試劑
細(xì)胞庫(kù)支原體檢測(cè)的必要性主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面:
1. 確保細(xì)胞庫(kù)的質(zhì)量與安全性:細(xì)胞庫(kù)的建立需要為生物制品的生產(chǎn)提供檢定合格、質(zhì)量相同、能持續(xù)穩(wěn)定傳代的細(xì)胞。支原體檢測(cè)是確保細(xì)胞庫(kù)中細(xì)胞質(zhì)量的重要環(huán)節(jié)。
2. 符合監(jiān)管要求:支原體檢測(cè)是生物制品安全性監(jiān)管的一部分,全球范圍內(nèi)的藥典、法規(guī)和指導(dǎo)文件中都有支原體檢測(cè)的相關(guān)說(shuō)明。
3. 避免對(duì)生物制品的影響:支原體污染可能會(huì)影響生物制品的安全性和有效性,因此需要通過(guò)檢測(cè)來(lái)避免這種風(fēng)險(xiǎn)。
4. 維護(hù)細(xì)胞培養(yǎng)的穩(wěn)定性:支原體是真核細(xì)胞和干細(xì)胞培養(yǎng)中最常見(jiàn)的問(wèn)題之一,它們可以改變細(xì)胞的代謝、減緩增殖速度,甚至引起染色體畸變。
5. 預(yù)防交叉污染:由于支原體可以通過(guò)氣溶膠和微粒污染實(shí)驗(yàn)室其他區(qū)域,支原體檢測(cè)有助于預(yù)防交叉污染的發(fā)生。
6. 保障數(shù)據(jù)的可靠性:支原體污染可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,因此定期進(jìn)行支原體檢測(cè)有助于保障研究數(shù)據(jù)的可靠性。
7. 常規(guī)監(jiān)測(cè)的重要性:支原體應(yīng)成為細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)監(jiān)測(cè)項(xiàng)目,以確保細(xì)胞培養(yǎng)的質(zhì)量和安全。
8. 遵守藥典規(guī)定:根據(jù)中國(guó)藥典的規(guī)定,每8~12代細(xì)胞培養(yǎng)物應(yīng)進(jìn)行支原體檢查,以符合規(guī)定。
上海細(xì)胞支原體預(yù)防試劑支原體檢測(cè)方法qPCR法的應(yīng)用。
支原體去除試劑在清*支原體的過(guò)程中可能會(huì)對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)產(chǎn)生一定的影響。支原體去除試劑是一種非抗*素類試劑,它通過(guò)與支原體膜特異性結(jié)合,改變支原體膜的通透性,從而導(dǎo)致支原體破裂死亡。盡管該產(chǎn)品在作用期間可能會(huì)對(duì)細(xì)胞的活力和形態(tài)有一定的影響,但由于它不能穿過(guò)真核細(xì)胞的細(xì)胞膜,因此不會(huì)改變細(xì)胞的任何特性。支原體被清*后,細(xì)胞在后續(xù)的傳代過(guò)程中能快速恢復(fù)其正常的生長(zhǎng)和增殖狀態(tài),細(xì)胞后續(xù)的生長(zhǎng)增殖幾乎無(wú)影響。
此外,該產(chǎn)品不含抗*素,不會(huì)使支原體發(fā)生耐藥反應(yīng),細(xì)胞毒性小。然而,需要注意的是,不同細(xì)胞對(duì)支原體去除試劑的耐受程度有所差異,可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果適當(dāng)調(diào)整細(xì)胞量和處理?xiàng)l件。在某些情況下,如果出現(xiàn)細(xì)胞變形、生長(zhǎng)緩慢等現(xiàn)象,可以更換成標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)液終止作用,或者調(diào)整去除試劑的使用濃度和作用時(shí)間。
支原體污染一旦發(fā)生,不僅對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)造成嚴(yán)重影響,甚至可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果失真。而且支原體污染在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中相當(dāng)常見(jiàn)。因此,預(yù)防措施是確保細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境和實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠性的重要手段。
01/ 良好的無(wú)菌技術(shù)及實(shí)驗(yàn)操作,保證操作不會(huì)引入新的污染
02/ 保持實(shí)驗(yàn)空間的清潔
03/ 確保從可靠的來(lái)源獲取細(xì)胞,減少不同細(xì)胞之間的交叉?zhèn)魅?/span>
04/ 防止交叉污染
05/ 減少氣溶膠生成
06/ 謹(jǐn)慎使用抗*素
07/ 定期支原體篩查
08/ 丟棄或處理受到支原體污染的細(xì)胞
09/ 保持良好的記錄
支原體及污染方式有哪些?
在科研中,支原體檢測(cè)是確保細(xì)胞培養(yǎng)純凈性的重要環(huán)節(jié)。以下是一些在科研中常見(jiàn)的支原體檢測(cè)方法:
1. 支原體培養(yǎng)法:這是一種傳統(tǒng)的檢測(cè)方法,通過(guò)將細(xì)胞培養(yǎng)物接種到特定的培養(yǎng)基中,觀察是否有支原體生長(zhǎng)。這是直接的檢測(cè)方法,但耗時(shí)較長(zhǎng),通常需要數(shù)周時(shí)間。
2. DNA染色法:使用熒光染料(如Hoechst或DAPI)染色細(xì)胞核,然后通過(guò)熒光顯微鏡觀察。這種方法操作簡(jiǎn)便,可以快速得到結(jié)果,但特異性不高,可能會(huì)有假陽(yáng)性。
3. 聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)法:這是一種分子生物學(xué)技術(shù),通過(guò)設(shè)計(jì)特異性的引物,擴(kuò)增支原體DNA,從而檢測(cè)支原體的存在。PCR法具有高靈敏度和特異性,已成為日常細(xì)胞培養(yǎng)維護(hù)的可靠方法。
4. 核酸擴(kuò)增技術(shù)(NAT):NAT技術(shù)通過(guò)擴(kuò)增并檢測(cè)特定的支原體基因組保守序列來(lái)進(jìn)行支原體污染檢測(cè),具有快速、簡(jiǎn)便的特點(diǎn)。
細(xì)胞培養(yǎng)中,支原體檢測(cè)的重要性?蘇州支原體去除現(xiàn)貨
支原體污染的來(lái)源有哪些?上海細(xì)胞支原體預(yù)防試劑
支原體去除和支原體預(yù)防是兩種不同的策略,它們?cè)诩?xì)胞培養(yǎng)和生物制品生產(chǎn)中都非常重要。
支原體去除是指在細(xì)胞已經(jīng)被支原體污染后采取的措施。這通常涉及到使用特定的抗*素或化學(xué)試劑來(lái)消滅或抑制支原體的生長(zhǎng)。例如,根據(jù)的描述,支原體去除試劑是一種混合抗*素制劑,它含有三種對(duì)支原體具有抑菌作用的組分,可以取得良好的支原體清*效果。使用這種方法時(shí),細(xì)胞需要在含有去除試劑的培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時(shí)間,然后更換培養(yǎng)基并檢測(cè)支原體是否已被清*。
支原體預(yù)防則是指在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中采取的預(yù)防措施,以避免支原體污染的發(fā)生。這包括保持實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的清潔、使用無(wú)菌技術(shù)、對(duì)所有培養(yǎng)基和器材進(jìn)行適當(dāng)?shù)南咎幚淼?。根?jù)的背景介紹,預(yù)防措施還包括對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)層流柜保持整潔,避免在無(wú)蓋器皿上方舞動(dòng)手掌和手臂,以及立即清理溢出物等。這些措施有助于減少支原體污染的風(fēng)險(xiǎn)。
上海細(xì)胞支原體預(yù)防試劑