支原體檢測(cè)的樣本既可以是細(xì)胞,也可以是培養(yǎng)基。在細(xì)胞培養(yǎng)中,支原體污染是常見的問(wèn)題,因此需要對(duì)細(xì)胞和培養(yǎng)基進(jìn)行檢測(cè)。細(xì)胞庫(kù)、病毒種子批、對(duì)照細(xì)胞以及臨床用細(xì)胞等都需要進(jìn)行支原體檢查,這通常包括培養(yǎng)法和指示細(xì)胞培養(yǎng)法(DNA染色法)。同時(shí),病毒類疫苗的病毒收獲液、原液也采用培養(yǎng)法檢查支原體,必要時(shí),也可以采用指示細(xì)胞培養(yǎng)法篩選培養(yǎng)基。
此外,支原體檢測(cè)的培養(yǎng)基推薦使用支原體肉湯培養(yǎng)基和精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基等,這些培養(yǎng)基可用于檢測(cè)藥品和生物制品中的支原體。在進(jìn)行支原體檢測(cè)時(shí),需要取培養(yǎng)物樣品接種到適宜支原體生長(zhǎng)的微生物培養(yǎng)基或瓊脂平板上。
因此,支原體檢測(cè)的樣本既可以是細(xì)胞,也可以是培養(yǎng)基,具體取決于檢測(cè)的目的和方法。
支原體去除的實(shí)驗(yàn)步驟?上海支原體預(yù)防試劑價(jià)格
支原體是細(xì)胞外生存的 小微生物,是一類缺乏細(xì)胞壁的原核細(xì)胞型微生物,大小一般在0.2~0.5um之間,呈高度多形性,有球形、桿形、絲形、分枝狀等多種態(tài)。
1、支原體存在于我們周圍,他可能就如塵埃一樣存在于我們的環(huán)境中
2、可透過(guò)一般的濾膜,所以不要寄希望于過(guò)濾可以清楚支原體污染的液體
支原體對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的污染發(fā)生率高,據(jù)估計(jì)平均發(fā)生率在60%左右。同時(shí)又非常隱秘,早期不容易被發(fā)現(xiàn),除非用特異性和靈敏度都非常高的檢測(cè)試劑盒。支原體因?yàn)閭€(gè)頭小,能穿過(guò)0.22微米濾器,并且在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)會(huì)潛在的擴(kuò)散。支原體污染使得用被污染的細(xì)胞樣本做的實(shí)驗(yàn)完全失去意義和價(jià)值。
蘇州細(xì)胞培養(yǎng)支原體檢測(cè)試劑現(xiàn)貨支原體及污染方式有哪些?
支原體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)方法需要考慮以下幾個(gè)關(guān)鍵點(diǎn):
1. 樣本的采集與處理:確保樣本的采集和處理過(guò)程符合無(wú)菌操作規(guī)范,避免交叉污染。
2. 實(shí)驗(yàn)操作的標(biāo)準(zhǔn)化:制定詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)操作流程,包括樣本接種、培養(yǎng)條件、觀察時(shí)間點(diǎn)等,以保證實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性和準(zhǔn)確性。
3. 使用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基:根據(jù)支原體的特性選擇合適的培養(yǎng)基,如支原體肉湯4. 培養(yǎng)基、精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基等,并確保培養(yǎng)基的靈敏度和特異性。
5. 設(shè)置對(duì)照組:實(shí)驗(yàn)中應(yīng)包括陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照,以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)方法的有效性和排除假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果。
需要定期檢測(cè)支原體污染的客戶主要包括以下幾類:
1. 生物醫(yī)藥企業(yè):生產(chǎn)涉及細(xì)胞培養(yǎng)的生物制品的公司,包括疫苗、生物藥物、基因產(chǎn)品等。
2. 細(xì)胞公司:進(jìn)行細(xì)胞產(chǎn)品的研發(fā)和生產(chǎn)的企業(yè),需要確保所用細(xì)胞的安全性和有效性。
3. 科研機(jī)構(gòu):從事細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、遺傳學(xué)等研究的學(xué)術(shù)機(jī)構(gòu),需要保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
4. 臨床單位:使用細(xì)胞技術(shù)進(jìn)行的醫(yī)院或診所,需要確保用細(xì)胞的質(zhì)量。
5. 細(xì)胞庫(kù):保存和供應(yīng)細(xì)胞株的細(xì)胞庫(kù),需要對(duì)細(xì)胞資源進(jìn)行定期檢測(cè)以保證其無(wú)污染。
6. 生物技術(shù)公司:提供生物技術(shù)服務(wù)的公司,如細(xì)胞培養(yǎng)、基因編輯等,需要確保服務(wù)過(guò)程中細(xì)胞的質(zhì)量。
支原體污染如何預(yù)防?
對(duì)于同一個(gè)樣品,如果PCR檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性而一步法恒溫檢測(cè)試劑盒結(jié)果為陰性,可能的原因包括:
1. 靈敏度差異:PCR方法通常具有較高的靈敏度,可以檢測(cè)到單個(gè)拷貝的支原體DNA。相比之下,一步法恒溫檢測(cè)試劑盒可能需要更高的支原體拷貝數(shù)才能檢測(cè)出陽(yáng)性結(jié)果,例如需要10^3個(gè)拷貝。如果樣品中的支原體數(shù)量低于一步法試劑盒的檢測(cè)閾值,就可能出現(xiàn)PCR陽(yáng)性而一步法陰性的情況。
2. 檢測(cè)范圍:PCR檢測(cè)可以針對(duì)特定的支原體序列設(shè)計(jì)引物,如果樣品中的支原體種類或序列與一步法試劑盒的檢測(cè)范圍不完全匹配,可能導(dǎo)致一步法檢測(cè)不出。
3. 樣品處理和提取:一步法恒溫檢測(cè)試劑盒可能對(duì)樣品的處理和DNA提取有特定的要求。如果樣品處理不當(dāng)或DNA提取效率不高,可能會(huì)影響一步法試劑盒的檢測(cè)結(jié)果。
4. 試劑盒特異性:一步法恒溫檢測(cè)試劑盒可能設(shè)計(jì)用于檢測(cè)特定的支原體種類,如果樣品中的支原體與試劑盒的特異性不匹配,可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果。
5. 抑制物的影響:PCR檢測(cè)可能對(duì)樣品中的某些抑制物不那么敏感,而一步法恒溫檢測(cè)試劑盒可能更容易受到這些抑制物的影響,從而降低檢測(cè)的靈敏度。
細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中支原體污染怎么預(yù)防?蘇州細(xì)胞培養(yǎng)支原體檢測(cè)試劑現(xiàn)貨
支原體檢測(cè)假陰性的原因?上海支原體預(yù)防試劑價(jià)格
支原體去除試劑使用后,對(duì)支原體的檢測(cè)可能會(huì)有影響。一些支原體去除試劑通過(guò)特異性地與支原體膜結(jié)合、改變支原體膜的通透性來(lái)殺死支原體,而對(duì)真核細(xì)胞幾乎沒有影響。然而,某些情況下,去除試劑可能會(huì)對(duì)細(xì)胞的活力和形態(tài)產(chǎn)生一定的影響,尤其是在去除劑作用期間。此外,如果去除劑的效果不徹底,可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞再次被支原體污染。
需要注意的是,某些支原體去除試劑可能會(huì)在去除支原體的過(guò)程中導(dǎo)致支原體膜溶解,從而釋放出支原體的DNA,這可能會(huì)在隨后的支原體核酸檢測(cè)中引起假陽(yáng)性結(jié)果。因此,在去除支原體后,建議在繼續(xù)正常傳代培養(yǎng)幾代細(xì)胞后再進(jìn)行支原體檢測(cè),以確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
上海支原體預(yù)防試劑價(jià)格