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上海免疫沉淀磁珠價(jià)格

來源： 發(fā)布時(shí)間：2024-07-26

RIP技術(shù)的優(yōu)勢(shì)在于：
1. 特異性：利用特異性抗體，可以精確地捕獲目標(biāo)RNA結(jié)合蛋白及其相互作用的RNA。
2. 應(yīng)用場(chǎng)景多：適用于研究RNA結(jié)合蛋白、miRNA、lncRNA等非編碼RNA與蛋白質(zhì)的相互作用。
3. 技術(shù)結(jié)合：RIP后的RNA可以用于多種下游分析，如qPCR、測(cè)序等，為研究RNA的功能和調(diào)控提供了重要信息。
RIP技術(shù)的限制包括：
1. 抗體質(zhì)量：需要高質(zhì)量的特異性抗體，否則可能得到假陽性或假陰性結(jié)果。
2. 非特異性結(jié)合：可能存在非特異性結(jié)合問題，需要仔細(xì)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和對(duì)照來控制。
免疫沉淀Co-IP技術(shù)選瓊脂糖珠還是磁珠？上海免疫沉淀磁珠價(jià)格

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免疫沉淀實(shí)驗(yàn)不同于WB實(shí)驗(yàn)的樣品制備，對(duì)實(shí)驗(yàn)樣品制備要求更高，除了要控制所有操作盡量在冰上完成外，關(guān)鍵的是裂解液的成分，裂解液成分直接決定了樣品質(zhì)量。
主要影響：
1. 蛋白的釋放：許多目的蛋白定位在細(xì)胞器，質(zhì)膜，細(xì)胞核，細(xì)胞骨架中，但通常這些亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)很難被裂解液有效溶解，所以很難將這些蛋白釋放出來。
2. 蛋白相互作用：不同去垢劑對(duì)不同性質(zhì)的蛋白質(zhì)間相互作用影響程度不同，一些互作較弱的蛋白對(duì)盡管在比較溫和的裂解液配方中仍然會(huì)被破壞。
杭州免疫沉淀實(shí)驗(yàn)原理免疫沉淀技術(shù)IP是什么？

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免疫沉淀技術(shù)的實(shí)驗(yàn)方法通常包括以下步驟：
1. 樣本準(zhǔn)備
2. 細(xì)胞裂解：使用裂解緩沖液（含有蛋白酶抑制劑以防止蛋白質(zhì)降解）裂解細(xì)胞，釋放蛋白質(zhì)。
3. 蛋白質(zhì)濃度測(cè)定：使用BCA、Bradford或Lowry等方法測(cè)定裂解液中蛋白質(zhì)的濃度。
4. 抗體預(yù)處理：如果使用預(yù)固定的抗體，需先將抗體固定在固相支持物上，如瓊脂糖珠或磁性微珠。
5. 免疫沉淀反應(yīng)：將裂解液與特異性抗體（固定或未固定）混合，并在4°C下緩慢搖晃孵育過夜，以允許抗體與目標(biāo)蛋白質(zhì)充分結(jié)合。
6. 固相支持物的回收：對(duì)于未固定的抗體，加入與抗體特異性結(jié)合的蛋白A或蛋白G結(jié)合的固相支持物。
7. 洗滌：去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)和雜質(zhì)，通常需要多次洗滌固相支持物。
8. 洗脫：使用適當(dāng)?shù)南疵摼彌_液（如加熱的SDS加載緩沖液或酸性緩沖液）從固相支持物上洗脫免疫復(fù)合物。
9. 后續(xù)分析：對(duì)洗脫的蛋白質(zhì)進(jìn)行SDS-PAGE電泳、Western Blot、質(zhì)譜分析等，以進(jìn)一步分析目標(biāo)蛋白質(zhì)。
10. 對(duì)照實(shí)驗(yàn)：包括正對(duì)照（已知能沉淀目標(biāo)蛋白的抗體）和負(fù)對(duì)照（非特異性抗體或無抗體）以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的特異性。

RIP（RNA Immunoprecipitation，RNA免疫沉淀）的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)需要考慮多個(gè)方面，以確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。
1. 目標(biāo)蛋白的選擇：確定你想要研究的目標(biāo)RNA結(jié)合蛋白（RBP）。
2. 陽性和陰性對(duì)照：設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要包括陽性對(duì)照和陰性對(duì)照。
3. 細(xì)胞培養(yǎng)與裂解：選擇合適的細(xì)胞類型進(jìn)行培養(yǎng)。
4. 抗體孵育：將特異性抗體與細(xì)胞裂解液孵育，以形成抗體-蛋白質(zhì)-RNA復(fù)合物。
5. 免疫沉淀：使用蛋白A或蛋白G結(jié)合的珠子進(jìn)行免疫沉淀，捕獲抗體-蛋白質(zhì)-RNA復(fù)合物。
6. 洗滌和分離：洗滌珠子以去除未特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)和RNA。從珠子上分離RNA，可能需要使用低pH緩沖液或蛋白酶K處理。
7. RNA分析：使用qPCR、Northern blot或RNA-Seq等方法分析沉淀下來的RNA。
8. 數(shù)據(jù)分析：對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行定量分析，比較不同樣品之間的RNA水平。

9. 實(shí)驗(yàn)重復(fù)：為了確保結(jié)果的可靠性，實(shí)驗(yàn)應(yīng)該進(jìn)行至少三次重復(fù)。 免疫沉淀和免疫共沉淀的區(qū)別？

10. 技術(shù)驗(yàn)證：使用其他技術(shù)（如RNA-pull down或FISH）驗(yàn)證RIP實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
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免疫沉淀技術(shù)（Immunoprecipitation, IP）是一種用于研究蛋白質(zhì)相互作用、蛋白質(zhì)復(fù)合物組成以及特定蛋白質(zhì)的表達(dá)和純化的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。
基本原理
免疫沉淀技術(shù)基于抗體與特定蛋白質(zhì)（抗原）之間的特異性相互作用。通過使用針對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)的特異性抗體，可以從含有多種蛋白質(zhì)的復(fù)雜樣本中捕獲并富集目標(biāo)蛋白質(zhì)。
免疫沉淀技術(shù)有多種類型，包括：
1. 個(gè)別免疫沉淀法（Individual IP）
2. 免疫共沉淀法（Co-IP）
3. 染色質(zhì)免疫沉淀法（ChIP）
4. RNA免疫沉淀法（RIP）
近年來，免疫沉淀技術(shù)在固相支持物的選擇上有了很大進(jìn)步。磁性微珠因其操作簡(jiǎn)便、快速和自動(dòng)化程度高而逐漸取代了傳統(tǒng)的瓊脂糖樹脂。
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免疫沉淀技術(shù)（Immunoprecipitation, IP）的實(shí)驗(yàn)方法通常包括以下步驟：
1. 樣本準(zhǔn)備
2. 蛋白質(zhì)濃度測(cè)定：使用BCA、Bradford或Lowry等方法測(cè)定裂解液中蛋白質(zhì)的濃度。
3. 抗體預(yù)處理：如果使用預(yù)固定的抗體，需先將抗體固定在固相支持物上，如瓊脂糖珠或磁性微珠。
4. 免疫沉淀反應(yīng)：將裂解液與特異性抗體（固定或未固定）混合，并在4°C下緩慢搖晃孵育過夜，以允許抗體與目標(biāo)蛋白質(zhì)充分結(jié)合。
5. 固相支持物的回收：對(duì)于未固定的抗體，加入與抗體特異性結(jié)合的蛋白A或蛋白G結(jié)合的固相支持物。
6. 洗滌：去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)和雜質(zhì)，通常需要多次洗滌固相支持物。
7. 洗脫：使用適當(dāng)?shù)南疵摼彌_液（如加熱的SDS加載緩沖液或酸性緩沖液）從固相支持物上洗脫免疫復(fù)合物。
8. 后續(xù)分析：對(duì)洗脫的蛋白質(zhì)進(jìn)行SDS-PAGE電泳、Western Blot、質(zhì)譜分析等，以進(jìn)一步分析目標(biāo)蛋白質(zhì)。
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標(biāo)簽： 支原體 免疫沉淀