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杭州細胞支原體預防

來源： 發(fā)布時間：2024-08-05

細胞培養(yǎng)中如果污染了支原體，會有以下幾種影響：

1. 細胞生長受影響：支原體污染會導致細胞生長速度減慢，甚至停止生長。細胞可能會變圓，從培養(yǎng)瓶壁脫落。
2. 細胞形態(tài)變化：雖然某些細胞在支原體污染后形態(tài)變化不明顯，但有些細胞會出現(xiàn)體積增大，細胞碎片增多，培養(yǎng)瓶中細胞間隙出現(xiàn)膜狀沉積等現(xiàn)象。
3. 代謝和功能改變：支原體污染會影響細胞的代謝和功能，例如培養(yǎng)液中的精氨酸被大量消耗，引起細胞蛋白質(zhì)、DNA、rRNA、mRNA的合成障礙。支原體活動還可能引起培養(yǎng)液成分和pH值的變化。
4. 實驗結(jié)果受影響：使用被支原體污染的細胞進行實驗會嚴重影響實驗結(jié)果，因為支原體會抑制細胞生長，導致染色體畸變，細胞膜抗原性改變，細胞復蘇后存活率降低等。
5. 細胞培養(yǎng)環(huán)境的污染：一株污染的細胞可能成為實驗室的污染源，對工作區(qū)域以及培養(yǎng)箱和液氮罐造成污染，進而污染其他細胞，導致其他細胞繼發(fā)性污染。
6. 科研結(jié)果的重復性問題：由于支原體污染，某些實驗結(jié)果可能能在支原體陽性的細胞中得到，導致科研結(jié)果的重復性受到影響
支原體檢測PCR法和LAMP方法的優(yōu)劣勢比較。杭州細胞支原體預防

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支原體污染和黑膠蟲污染是兩種不同類型的細胞培養(yǎng)污染，它們具有各自的特點和區(qū)別：
支原體污染：在相差顯微鏡下，支原體呈暗色微小顆粒位于細胞表面和細胞之間。
黑膠蟲污染：在高倍鏡下，被黑膠蟲污染的細胞膜會變得模糊不清，邊界不清晰，有粗糙感。

污染的影響：
支原體污染：可能導致細胞增殖緩慢，甚至從培養(yǎng)器皿脫落，影響細胞的DNA、RNA及蛋白表達。
黑膠蟲污染：與細胞競爭性生長，開始時對細胞沒有什么影響，但當數(shù)量多時，細胞生長會受到影響直至死亡。

污染的來源：
支原體污染：可能來源于工作環(huán)境的污染、操作者本身、培養(yǎng)基的污染、交叉污染、實驗器材帶來的污染以及用來制備細胞的原始組織或部位的污染。
黑膠蟲污染：可能來源于細胞本身的污染或從動物取材時的污染，也可能通過培養(yǎng)箱空氣進行污染。
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細胞培養(yǎng)過程中如果發(fā)現(xiàn)支原體污染，可以采取以下一些方法嘗試去除污染：

1. 抗*素治*：使用針對支原體有效的抗*素，如四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類、氟喹諾酮類等。根據(jù)搜索結(jié)果，可以加入高濃度抗*素進行沖擊治*，例如慶大霉素 200ug/ml，四環(huán)素10ug/ml，卡那霉素50ug/ml，并維持24-48小時后再換入常規(guī)培養(yǎng)液。
2. 加溫處理：支原體不耐熱，可以將細胞置于41°C中處理5-10小時以殺滅支原體。但需注意，高溫也可能對細胞造成傷害，因此需要預先確定對細胞影響較小的處理時間。
3. 使用支原體清除劑：市場上有專門的支原體清除劑，按照產(chǎn)品說明使用。
4. 使用支原體清*培養(yǎng)基：如Procell支原體清*培養(yǎng)基，這類產(chǎn)品含有清*支原體的特殊成分，可以抑制支原體生長并挽救珍貴細胞。
5. 物理方法：一些實驗室采用過濾的方法，使用0.22μm或更小孔徑的濾膜過濾培養(yǎng)基和試劑，以阻止支原體的侵入。
6. 細胞傳代：在一些情況下，通過細胞傳代可能有助于減少支原體的污染程度。

支原體是細胞外生存的 小微生物，是一類缺乏細胞壁的原核細胞型微生物，大小一般在0.2~0.5um之間，呈高度多形性，有球形、桿形、絲形、分枝狀等多種態(tài)。
1、支原體存在于我們周圍，他可能就如塵埃一樣存在于我們的環(huán)境中
2、可透過一般的濾膜，所以不要寄希望于過濾可以清楚支原體污染的液體
支原體對培養(yǎng)細胞的污染發(fā)生率高，據(jù)估計平均發(fā)生率在60%左右。同時又非常隱秘，早期不容易被發(fā)現(xiàn)，除非用特異性和靈敏度都非常高的檢測試劑盒。支原體因為個頭小，能穿過0.22微米濾器，并且在實驗室內(nèi)會潛在的擴散。支原體污染使得用被污染的細胞樣本做的實驗完全失去意義和價值。
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細胞培養(yǎng)中支原體難以徹底消滅的原因主要包括以下幾點：
1. 無細胞壁結(jié)構(gòu)：支原體是沒有細胞壁的微生物，這使得許多作用于細胞壁的抗*素對支原體無效。
2. 微小體積：支原體體積小，能夠穿過常規(guī)的除菌濾膜，例如0.20微米甚至0.10微米的濾膜。
3. 隱匿性：支原體污染初期很難被察覺，它們在普通光學顯微鏡下幾乎不可見，因此細胞被支原體污染后，前期很難被發(fā)現(xiàn)。
4. 傳播途徑多樣：支原體可以通過細胞培養(yǎng)物、細胞懸液、細胞培養(yǎng)用具等途徑迅速傳播。
5. 污染源 ：支原體污染源包括細胞間的交叉污染、操作人員的口腔、皮膚，以及細胞培養(yǎng)用的組分如血清、培養(yǎng)液等。
6. 環(huán)境因素：實驗室環(huán)境、試驗臺、超凈臺、培養(yǎng)箱等可能被支原體污染，引起細胞的污染。
7. 抗*素耐藥性：支原體可能對某些抗*素產(chǎn)生耐藥性，使得治*效果變差。
8. 檢測和清理方法的局限性：一些傳統(tǒng)的支原體檢測和清理方法可能不夠靈敏或有效，導致難以徹底清理支原體
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支原體預防的原理是什么？杭州細胞支原體預防

對于同一個樣品，如果一步法恒溫試劑盒檢測結(jié)果為陽性，而PCR檢測為陰性，可能的原因包括：
1. 檢測的支原體種類不同：一步法恒溫試劑盒可能檢測的支原體種類更多，例如可以涵蓋27種支原體，而PCR檢測可能只針對常見的12種支原體進行檢測。因此，如果樣品中污染的支原體種類不在PCR檢測的范圍內(nèi)，就可能出現(xiàn)一步法檢測為陽性而PCR檢測為陰性的情況。
2. 靈敏度的差異：PCR方法的靈敏度可能高于一步法恒溫檢測法。PCR可以檢測到低至單個拷貝的支原體，而一步法恒溫檢測可能需要更高的支原體拷貝數(shù)，例如10^3^個拷貝。如果樣品中支原體的數(shù)量低于一步法檢測的靈敏度閾值，PCR檢測可能無法檢測到，導致陰性結(jié)果。
3. 樣品中可能含有抑制PCR反應的物質(zhì)：如果樣品中存在PCR反應的抑制物，可能會影響PCR的擴增效率，導致即使存在支原體，PCR檢測也可能呈現(xiàn)陰性結(jié)果。
4. 試劑盒的特異性和交叉反應：一步法恒溫試劑盒可能具有更高的特異性，減少了與其他微生物的交叉反應，從而在PCR檢測為陰性時仍能準確檢測到支原體的存在。
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