支原體檢測的樣本既可以是細胞,也可以是培養(yǎng)基。在細胞培養(yǎng)中,支原體污染是常見的問題,因此需要對細胞和培養(yǎng)基進行檢測。細胞庫、病毒種子批、對照細胞以及臨床用細胞等都需要進行支原體檢查,這通常包括培養(yǎng)法和指示細胞培養(yǎng)法(DNA染色法)。同時,病毒類疫苗的病毒收獲液、原液也采用培養(yǎng)法檢查支原體,必要時,也可以采用指示細胞培養(yǎng)法篩選培養(yǎng)基。
此外,支原體檢測的培養(yǎng)基推薦使用支原體肉湯培養(yǎng)基和精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基等,這些培養(yǎng)基可用于檢測藥品和生物制品中的支原體。在進行支原體檢測時,需要取培養(yǎng)物樣品接種到適宜支原體生長的微生物培養(yǎng)基或瓊脂平板上。
因此,支原體檢測的樣本既可以是細胞,也可以是培養(yǎng)基,具體取決于檢測的目的和方法。
支原體去除之后對細胞轉(zhuǎn)染有無影響?支原體去除多少錢
支原體的預(yù)防可通過以下方式:
1. 控制污染源:通過定期檢測和去除細胞培養(yǎng)中的支原體污染,確保細胞培養(yǎng)體系內(nèi)無支原體存在,從而獲得準確有效的實驗數(shù)據(jù)。
2. 改善無菌操作技術(shù):通過提高實驗人員的操作技術(shù)和意識,避免在細胞培養(yǎng)過程中引入支原體污染。
3. 使用無菌設(shè)備和耗材:使用無菌的細胞培養(yǎng)設(shè)備和耗材,如無菌培養(yǎng)基、血清等,減少支原體污染的風(fēng)險。
4. 定期消毒和清潔:對實驗室環(huán)境進行定期的消毒和清潔,包括工作臺、培養(yǎng)箱等,以減少支原體的潛在污染。
5. 使用預(yù)防性試劑:使用專門針對支原體的預(yù)防性試劑,如加入細胞培養(yǎng)基中的預(yù)防劑、超凈臺噴霧、水浴鍋預(yù)防和細胞培養(yǎng)箱水盤預(yù)防等,以預(yù)防支原體污染。
6. 提高實驗室人員對支原體污染的認識:通過科普教育和培訓(xùn),提高實驗室人員對支原體污染的認識和預(yù)防意識。
7. 建立嚴格的實驗室管理規(guī)程:制定并執(zhí)行嚴格的實驗室管理規(guī)程,包括樣本處理、廢物處理、設(shè)備維護等,以降低支原體污染的風(fēng)險。
蘇州支原體預(yù)防試劑貨期細胞培養(yǎng)中支原體為什么難以徹底消滅?
細胞培養(yǎng)過程中如果發(fā)現(xiàn)支原體污染,可以采取以下一些方法嘗試去除污染:
1. 抗*素治*:使用針對支原體有效的抗*素,如四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類、氟喹諾酮類等。根據(jù)搜索結(jié)果,可以加入高濃度抗*素進行沖擊治*,例如慶大霉素 200ug/ml,四環(huán)素10ug/ml,卡那霉素50ug/ml,并維持24-48小時后再換入常規(guī)培養(yǎng)液。
2. 加溫處理:支原體不耐熱,可以將細胞置于41°C中處理5-10小時以殺滅支原體。但需注意,高溫也可能對細胞造成傷害,因此需要預(yù)先確定對細胞影響較小的處理時間。
3. 使用支原體清除劑:市場上有專門的支原體清除劑,按照產(chǎn)品說明使用。
4. 使用支原體清*培養(yǎng)基:如Procell支原體清*培養(yǎng)基,這類產(chǎn)品含有清*支原體的特殊成分,可以抑制支原體生長并挽救珍貴細胞。
5. 物理方法:一些實驗室采用過濾的方法,使用0.22μm或更小孔徑的濾膜過濾培養(yǎng)基和試劑,以阻止支原體的侵入。
6. 細胞傳代:在一些情況下,通過細胞傳代可能有助于減少支原體的污染程度。
細胞培養(yǎng)中支原體難以徹底消滅的原因主要包括以下幾點:
1. 無細胞壁結(jié)構(gòu):支原體是沒有細胞壁的微生物,這使得許多作用于細胞壁的抗*素對支原體無效。
2. 微小體積:支原體體積小,能夠穿過常規(guī)的除菌濾膜,例如0.20微米甚至0.10微米的濾膜。
3. 隱匿性:支原體污染初期很難被察覺,它們在普通光學(xué)顯微鏡下幾乎不可見,因此細胞被支原體污染后,前期很難被發(fā)現(xiàn)。
4. 傳播途徑多樣:支原體可以通過細胞培養(yǎng)物、細胞懸液、細胞培養(yǎng)用具等途徑迅速傳播。
5. 污染源 :支原體污染源包括細胞間的交叉污染、操作人員的口腔、皮膚,以及細胞培養(yǎng)用的組分如血清、培養(yǎng)液等。
6. 環(huán)境因素:實驗室環(huán)境、試驗臺、超凈臺、培養(yǎng)箱等可能被支原體污染,引起細胞的污染。
7. 抗*素耐藥性:支原體可能對某些抗*素產(chǎn)生耐藥性,使得治*效果變差。
8. 檢測和清理方法的局限性:一些傳統(tǒng)的支原體檢測和清理方法可能不夠靈敏或有效,導(dǎo)致難以徹底清理支原體
支原體污染源和主要類型?
細胞被支原體污染后可能會出現(xiàn)以下幾種情況:
1. 生長速度變慢:支原體污染的細胞生長速度可能會減慢,甚至停止生長。
2. 形態(tài)改變:部分細胞可能會變圓,從培養(yǎng)瓶壁脫落。有些細胞在支原體污染后,形態(tài)變化可能不明顯,但有些細胞可能會出現(xiàn)體積增大、細胞碎片增多等現(xiàn)象。
3. 培養(yǎng)液pH變化:支原體污染的細胞可能導(dǎo)致培養(yǎng)液pH值變化明顯,更換培養(yǎng)液后幾小時內(nèi)變酸(顏色變黃)。
4. 細胞間隙出現(xiàn)膜狀沉積:在某些情況下,細胞與細胞間隙可能出現(xiàn)膜狀沉積,影響細胞的正常生長和傳代。
5. 細胞功能受損:支原體污染可能會影響細胞的代謝和功能,如影響細胞蛋白質(zhì)、DNA、RNA的合成。
6. 染色體畸變:支原體污染可能會導(dǎo)致細胞染色體斷裂、數(shù)目減少,出現(xiàn)雙著絲點染色體、環(huán)狀染色體等異常。
7. 免疫細胞產(chǎn)量受影響:對于巨噬細胞等免疫細胞的培養(yǎng),支原體污染可能會抑制干擾素的合成和降低其活性。
8. 細胞培養(yǎng)環(huán)境的污染:污染的細胞可能成為實驗室的污染源,影響工作區(qū)域、培養(yǎng)箱和液氮罐等。
9. 實驗結(jié)果的不確定性:使用被支原體污染的細胞進行實驗可能會得到不準確的結(jié)果,影響科研的可靠性。
支原體檢測實驗的方法?杭州細胞支原體污染檢測試劑
支原體檢測假陽性的原因?支原體去除多少錢
支原體去除的實驗步驟通常包括以下幾個階段:
1. 支原體檢測:在進行去除之前,首先要確認細胞培養(yǎng)物是否受到支原體污染。這可以通過多種方法實現(xiàn),如PCR法、LAMP法或支原體培養(yǎng)法。
2. 選擇合適的去除試劑:一旦確認存在支原體污染,需要選擇一種有效的去除試劑。
3. 去除試劑的添加:根據(jù)去除試劑的說明書,將試劑添加到受污染的細胞培養(yǎng)基中。通常,這涉及到將一定比例的去除試劑加入到細胞培養(yǎng)液中。
4. 孵育:添加去除試劑后,將細胞培養(yǎng)物放回培養(yǎng)箱中孵育。孵育時間和條件(如溫度、CO2濃度)應(yīng)根據(jù)試劑的推薦進行調(diào)整。
5. 監(jiān)測去除效果:在孵育過程中,定期監(jiān)測細胞的狀態(tài)和去除效果。這可能包括觀察細胞形態(tài)、生長速率的變化,以及通過顯微鏡檢查是否有支原體存在的跡象。
6. 后續(xù)檢測:去除過程完成后,再次使用支原體檢測方法確認污染是否已被成功。
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