膜分離技術(shù)發(fā)明的目的在于提供一種水溶性殼寡糖提純和濃縮的方法，過(guò)程無(wú)相變，能耗低，易于工業(yè)化生產(chǎn)，提高殼寡糖的得率，且得到的殼寡糖高純度、分子量分布窄，適用于制備符合醫(yī)藥級(jí)的殼寡糖產(chǎn)品，提高殼寡糖產(chǎn)品附加值。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的一種水溶性殼寡糖提純和濃縮的方法，具有以下步驟：(1)將殼寡糖降解液通過(guò)陶瓷膜進(jìn)行預(yù)處理，去除降解液中的不溶雜質(zhì)(包括殼寡糖和其它不溶雜質(zhì))，得到陶瓷膜透過(guò)液；(2)采用超濾膜將陶瓷膜透過(guò)液進(jìn)一步提純，去除大分子蛋白質(zhì)和大分子多糖，得到超濾透過(guò)液；(3)采用納濾膜對(duì)超濾透過(guò)液進(jìn)行濃縮-加水的四級(jí)分離濃縮，去除無(wú)機(jī)鹽和單糖，得到殼寡糖納濾濃縮液；(4)對(duì)終濃縮的殼寡糖濃縮液進(jìn)行噴霧干燥，得到高純度的殼寡糖粉末；所述步驟(3)中，采用納濾膜進(jìn)行的四級(jí)分離和濃縮的每級(jí)的濃縮比例為2-5倍，每級(jí)的加水比例1-4倍。殼寡糖又叫殼聚寡糖、低聚殼聚糖，是將殼聚糖經(jīng)特殊的生物酶技術(shù)。山東氨基寡糖素預(yù)防霜凍

植物誘導(dǎo)抗病性是指植物受外界物理因素，化學(xué)因素或生物因素誘導(dǎo)后，產(chǎn)生的一種能抵抗病原微生物的抗病性，屬獲得性免疫的范疇。植物誘導(dǎo)抗病性分為兩類(lèi)，一類(lèi)是系統(tǒng)誘導(dǎo)抗病性，指植物體在小范圍內(nèi)受到外界誘導(dǎo)后，啟發(fā)植物體產(chǎn)生全方面的抗病性，在非誘導(dǎo)部位產(chǎn)生抗病性，激發(fā)機(jī)體系統(tǒng)的防御機(jī)能的現(xiàn)象。另一類(lèi)是局部抗病性，指植物受外源因子作用后，在被誘導(dǎo)的地方產(chǎn)生快速局部反應(yīng)產(chǎn)生抗病性的現(xiàn)象。植物遭受病原菌侵染后系統(tǒng)抗病性和局部抗病性經(jīng)常同時(shí)出現(xiàn)。山東氨基寡糖素包裝殼寡糖分子量在600-1500，殼寡糖純度高、分子量分布窄，適用于制備醫(yī)藥級(jí)的殼寡糖產(chǎn)品，提高產(chǎn)品附加值。

干旱脅迫可誘導(dǎo)植物產(chǎn)生逆境應(yīng)答蛋白:一類(lèi)是參與水分脅迫的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)或功能基因表達(dá)過(guò)程中起調(diào)節(jié)作用的調(diào)節(jié)蛋白，主要包括蛋白激酶、磷脂酶C、磷脂酶D、G蛋白、轉(zhuǎn)錄因子和一些信號(hào)因子等;另一類(lèi)是直接在植物的各種抗旱機(jī)制中發(fā)揮作用的功能蛋白，主要包括離子通道蛋白、胚胎晚期豐富蛋白、滲透調(diào)節(jié)蛋白、抗氧化酶、質(zhì)膜功能蛋白等。馮斌等通過(guò)mＲNA差別顯示技術(shù)分析了經(jīng)殼寡糖處理的煙c葉片，發(fā)現(xiàn)熱激蛋白90(Hsp90)基因高度表達(dá)，可能參與到殼寡糖誘導(dǎo)的抗性信號(hào)傳導(dǎo)通路中。本研究中，處理12h、24h和48h后，噴施10mg/L和100mg/L的殼寡糖明顯增加了PEG脅迫下小麥幼苗葉片中的可溶性蛋白含量(處理24h噴施10mg/L殼寡糖除外)，可能是由于殼寡糖能進(jìn)一步誘導(dǎo)SOD、POD、CAT和Hsp90等功能蛋白和調(diào)節(jié)蛋白的合成，從而提高小麥的抗旱性。

    水溶性殼寡糖提純和濃縮的方法，具有以下步驟：(1)將殼寡糖降解液通過(guò)陶瓷膜進(jìn)行預(yù)處理，去除降解液中的殼寡糖和其它不溶雜質(zhì)，得到陶瓷膜透過(guò)液；(2)采用超濾膜將陶瓷膜透過(guò)液進(jìn)一步提純，去除大分子蛋白質(zhì)和大分子多糖，得到超濾透過(guò)液；(3)采用納濾膜對(duì)超濾透過(guò)液進(jìn)行濃縮-加水的四級(jí)分離濃縮(即濃縮-加水-濃縮-加水-濃縮-加水-濃縮)，去除無(wú)機(jī)鹽和單糖，得到殼寡糖納濾濃縮液；(4)對(duì)濃縮的殼寡糖濃縮液進(jìn)行噴霧干燥，得到高純度的殼寡糖粉末。殼寡糖降解液可以是化學(xué)制備法(酸解、氧化降解等)或物理制備法(酶解、微波法、復(fù)合降解法等)中的任何一種殼寡糖降解液。所使用的陶瓷膜為管式、平板和多通道陶瓷膜中的一種。所使用的陶瓷膜材料為無(wú)機(jī)材料氧化鋁、氧化鋯、氧化鈦、碳化硅等中的一種或兩種及以上復(fù)合材料。所使用的陶瓷膜的孔徑在20～200nm。所使用的超濾膜為中空纖維、平板、卷式、管式超濾膜中的一種。所使用的超濾膜材料為無(wú)機(jī)、有機(jī)材料的一種。所使用的超濾膜的截留分子量在5000～20000da。納濾膜為中空纖維、平板、卷式、碟管式納濾膜中的一種，為有機(jī)材料、無(wú)機(jī)材料材料和有機(jī)-無(wú)機(jī)雜化材料中的一種，截留分子量在150～800da。 殼寡糖能通過(guò)刺激植物根系，進(jìn)而促進(jìn)植物谷氨酸代謝的合成，從而達(dá)到抵御寒害的效果。

為明確殼寡糖對(duì)小麥幼苗干旱脅迫的緩解機(jī)制，采用水培試驗(yàn)，研究了噴施不同濃度殼寡糖溶液(10mg/L、100mg/L和200mg/L)對(duì)20%PEG模擬干旱脅迫下小麥幼苗生長(zhǎng)、葉片超氧陰離子(O·－2)和MDA含量、抗氧化酶活性以及滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量的影響。結(jié)果顯示:噴施3種濃度殼寡糖可明顯促進(jìn)PEG脅迫下小麥幼苗的生長(zhǎng)，處理48h后幼苗株高、根長(zhǎng)、地上部和根部干重均明顯增加(200mg/L殼寡糖對(duì)根部干重影響除外);處理24h和48h后，噴施100mg/L殼寡糖可明顯降低PEG脅迫下小麥葉片的O·－2含量，而3種濃度殼寡糖均可明顯降低MDA含量;相比10mg/L和200mg/L濃度，噴施100mg/L殼寡糖可明顯增強(qiáng)PEG脅迫下小麥葉片的抗氧化系統(tǒng)活性，SOD、POD和CAT活性及可溶性蛋白、可溶性糖和脯氨酸含量均顯著提高(48h時(shí)脯氨酸含量變化除外)。上述結(jié)果表明，100mg/L是較適宜的噴施濃度。PEG脅迫下，噴施適宜濃度的殼寡糖能明顯促進(jìn)小麥地上部和根部的生長(zhǎng)，降低葉片的活性氧含量和膜脂過(guò)氧化程度，提高抗氧化酶活性和滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量，增強(qiáng)小麥對(duì)干旱脅迫的抵抗能力。小麥殼寡糖處理株體內(nèi)丙二醛含量降低，可溶性糖、可溶性蛋白以及脯氨酸含量增加。山東0.5%氨基寡糖素 淄博

誘導(dǎo)抗性、抑菌抗病毒、改良作物土壤、改善作物品質(zhì)。山東氨基寡糖素預(yù)防霜凍

水溶性殼寡糖提純和濃縮的方法，具有以下步驟：(1)將100l殼寡糖降解液(殼聚糖含量約3.0％)通過(guò)孔徑為50nm的多孔道氧化鋁陶瓷膜進(jìn)行過(guò)濾預(yù)處理，去除未降解殼聚糖和其它不溶物雜質(zhì)，得到95.0l透過(guò)液；(2)采用截留分子量為8000da的聚砜卷式超濾膜進(jìn)一步對(duì)陶瓷膜透過(guò)液提純，去除大分子多糖和其它雜質(zhì)，得到90.0l超濾透過(guò)液；(3)采用截留分子量為500da聚酰胺卷式納濾膜對(duì)超濾透過(guò)液進(jìn)行濃縮-加水四級(jí)分離濃縮(即濃縮-加水-濃縮-加水-濃縮-加水-濃縮)，濃縮比例為3倍，加水比例為2倍，去除無(wú)機(jī)鹽和單糖，結(jié)果得到30.0l殼寡糖納濾濃縮液；(4)對(duì)**終濃縮的殼寡糖濃縮液進(jìn)行噴霧干燥，得到2.21kg高純度的殼寡糖粉末，得率為70.7％。山東氨基寡糖素預(yù)防霜凍

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