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湖北褐藻寡糖技術(shù)要求

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2023-06-27

   從植物生長(zhǎng)與抵抗逆境的特性出發(fā),利用外源性寡糖對(duì)其進(jìn)行作用,通過(guò)檢測(cè)植物生長(zhǎng)指標(biāo)和抗逆指標(biāo)變化,來(lái)研究寡糖在植物促生長(zhǎng)與誘導(dǎo)抗逆過(guò)程中的作用機(jī)制。一方面對(duì)褐藻寡糖在植物促生長(zhǎng)與抗逆領(lǐng)域的作用機(jī)理進(jìn)行表征,另一方面,也希望能夠通過(guò)此研究獲得具有優(yōu)良生物功能活性的寡糖制劑,為農(nóng)業(yè)生產(chǎn)抗災(zāi)減災(zāi)做出貢獻(xiàn)。選擇三種來(lái)源(褐藻膠、果膠、殼聚糖)的不同分子量大小的九種寡糖片段進(jìn)行研究。利用植物的促生長(zhǎng)和抗逆指標(biāo)進(jìn)行篩選,獲得了一種既具有明顯的促生長(zhǎng)作用,又具有抗逆作用的寡糖片段,為褐藻寡糖HZ3,經(jīng)過(guò)質(zhì)譜分析,其組分是以二、三糖為主的含有少量四糖和五糖的寡糖混合物。第二部分是利用植物的植株、愈傷組織和懸浮細(xì)胞為材料,建立起寡糖促生長(zhǎng)的綜合性的驗(yàn)證方法。對(duì)植株分別選擇了雙子葉植物豌豆和單子葉植物玉米,利用寡糖浸種,分別考察在種子萌發(fā)與幼苗生長(zhǎng)初期其體內(nèi)蛋白酶、淀粉酶和激S含量的變化,結(jié)合種子與植株的生長(zhǎng)指標(biāo),探討寡糖的促生長(zhǎng)作用機(jī)理。褐藻寡糖能夠與植物的細(xì)胞壁進(jìn)行結(jié)合,又可以穿過(guò)細(xì)胞壁進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部與細(xì)胞膜進(jìn)行結(jié)合。湖北褐藻寡糖技術(shù)要求

    褐藻膠寡糖對(duì)植物來(lái)說(shuō)也是一種重要的信號(hào)分子,能夠參與植物的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)和誘導(dǎo)抗病過(guò)程。研究發(fā)現(xiàn),褐藻寡糖對(duì)植物具有促生長(zhǎng)作用。Guyen等2000年發(fā)現(xiàn),利用γ-射線照射褐藻膠得到降解組分,分子量小于104Da的褐藻膠降解產(chǎn)物的混合物顯示出對(duì)水稻和花生的促生長(zhǎng)作用,適當(dāng)控制混合物濃度可提高作用效果。Natsume等(1994)報(bào)道酶解褐藻膠獲得的降解產(chǎn)物對(duì)多種植物具有延長(zhǎng)生命周期的作用;進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)酶解產(chǎn)物中分離得到的三糖(M或G)具有明顯的促大麥根生長(zhǎng)活性(Quocetal.,2000);Tomoda等(1994)則報(bào)道了聚合度為4的褐藻膠寡糖(M或G)對(duì)大麥根促生長(zhǎng)作用明顯。Iwasaki&Matsubara等(2000b)對(duì)酶解褐藻膠寡糖對(duì)萵苣的促根生長(zhǎng)活性研究表明,聚合度為2-8糖的混合物在濃度200-3000ug/ml的范圍內(nèi)使萵苣根生長(zhǎng)長(zhǎng)度為空白組的2倍;利用凝膠色譜等方法分離各種聚合度的寡糖,發(fā)現(xiàn)三糖、四糖、五糖及六糖(M或G)具有很高的促根生長(zhǎng)活性。褐藻寡糖能夠作為信號(hào)調(diào)節(jié)分子作用于植物,促進(jìn)植物的生長(zhǎng),此領(lǐng)域的研究為海洋活性寡糖的開(kāi)發(fā)開(kāi)辟了新的途徑。廣西褐藻寡糖檢測(cè)方法褐藻寡糖是由褐藻中的褐藻膠通過(guò)氧化降解、酸水解或者裂合酶降解而得到的小分子量片段。

    對(duì)初步純化的褐藻膠裂解酶進(jìn)行了酶學(xué)性質(zhì)研究,酶的適反應(yīng)條件為50℃、pH8,在4~40℃、pH6~8范圍內(nèi)酶活力較穩(wěn)定;Ca2+、Mg2+和Fe2+等離子對(duì)該酶有促進(jìn)作用,EDTA、Ba2+、Zn2+等有抑制作用。通過(guò)優(yōu)化獲得褐藻膠的好酶解條件,在底物濃度、加酶量、體系、45℃條件下反應(yīng)32h時(shí),還原糖生成量為。以提取的褐藻多糖為原材料,按照此酶解工藝大量制備褐藻寡糖,通過(guò)Bio-GelP2凝膠色譜柱分離純化,得到不同聚合度的7個(gè)寡糖組分F1-F7,TLC分析結(jié)果顯示,其聚合度在1-7之間。去除自由基結(jié)果表明,褐藻多糖和寡糖都具有較強(qiáng)的抗氧化活性。自由基去除率隨著糖濃度的增加而增強(qiáng),在寡糖濃度、多糖濃度±±。多糖、寡糖濃度為±±。在相對(duì)濕度為85%和62%的環(huán)境下,褐藻多糖和褐藻寡糖都表現(xiàn)出較強(qiáng)的吸濕能力,褐藻寡糖更佳。在干燥環(huán)境下,褐藻多糖和寡糖都表現(xiàn)出很強(qiáng)的保濕效果,36h時(shí)褐藻寡糖的保濕率達(dá)到。抑菌結(jié)果顯示,褐藻寡糖對(duì)白色念珠菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌均具有較好的抑菌作用,褐藻多糖對(duì)白色念珠菌具有抑菌效果,對(duì)另3種細(xì)菌無(wú)抑制。

    褐藻寡糖對(duì)煙C細(xì)胞內(nèi)游離脯氨酸含量的影響研究發(fā)現(xiàn),幾乎所有逆境脅迫都能夠造成植物體內(nèi)游離脯氨酸積累。在植物體內(nèi),脯氨酸是作為1種滲透保護(hù)劑參與植物抗逆過(guò)程,緩解植物因低溫傷害造成的滲透脅迫,因此檢測(cè)植物體內(nèi)游離內(nèi)脯氨酸含量,可以在一定程度上判斷植物遭受逆境脅迫危害程度。圖5是煙C葉片游離脯氨酸含量變化。由圖可知,水處理組經(jīng)低溫脅迫后,游離脯氨酸含量短時(shí)間內(nèi)劇烈增加,6h時(shí)為空白對(duì)照的4倍,隨著低溫處理時(shí)間延長(zhǎng),游離脯氨酸積累加劇,48h后是空白對(duì)照的11.8倍。噴施寡糖后進(jìn)行低溫脅迫,0.05%~0.30%褐藻寡糖能夠明顯降低煙草體內(nèi)游離脯氨酸積累,0.10%褐藻寡糖在24h以?xún)?nèi)效果比較好,但48h時(shí)游離脯氨酸含量明顯升高。1.00%褐藻寡糖短時(shí)間內(nèi)使煙C葉片內(nèi)游離脯氨酸含量劇烈增加,隨著時(shí)間延長(zhǎng)積累不斷加劇,表明較高濃度褐藻寡糖溶液會(huì)對(duì)煙C細(xì)胞產(chǎn)生毒副作用,低溫下更加劇了細(xì)胞損傷破壞。褐藻寡糖與作物細(xì)胞作用后還可以在細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中,對(duì)細(xì)胞的生物活性進(jìn)行調(diào)節(jié),增強(qiáng)植物抗病能力。

   利用高效安全無(wú)污染的生物制劑褐藻寡糖外源噴施黃瓜幼苗,將黃瓜幼 苗分為噴施組和未噴施組;再配制不同濃度(0.05%、0.1%、0.2%、0.3%、0.5%、) 的褐藻寡糖溶液噴施黃瓜幼苗。對(duì)黃瓜幼苗的生長(zhǎng)指標(biāo),抗氧化酶活性及抗氧化 酶相關(guān)基因、WRKY 基因家族對(duì)褐藻寡糖應(yīng)答情況進(jìn)行測(cè)定。旨在探究不同濃 度褐藻寡糖對(duì)黃瓜的生長(zhǎng)、產(chǎn)量及品質(zhì)的影響,對(duì)褐藻寡糖對(duì)作物促進(jìn)作用的機(jī) 理進(jìn)行了初步研究,探索 WRKY 轉(zhuǎn)錄因子和褐藻寡糖在黃瓜生長(zhǎng)中的重要功能 及作用機(jī)制。褐藻寡糖促進(jìn)黃瓜幼苗生長(zhǎng)發(fā)育,主要表現(xiàn)為生物量(株高、莖粗)隨 著濃度的升高呈增長(zhǎng)趨勢(shì),葉片數(shù)增多。與未噴施組相比,噴施組生物量均有所 改善。對(duì)果期產(chǎn)量也有所提高。褐藻寡糖對(duì)植物的抗逆機(jī)制是通過(guò)誘導(dǎo)作用實(shí)現(xiàn)的。上海褐藻寡糖 精耕

褐藻寡糖在植物誘導(dǎo)抗病中有重要作用,因?yàn)楹衷骞烟羌ぐl(fā)植物體內(nèi)相關(guān)抗病信號(hào)通路,從而引起植物抗病。湖北褐藻寡糖技術(shù)要求

    美國(guó)復(fù)雜碳水化合物研究中心的主任Albersheim等提出了寡糖素這個(gè)概念,他認(rèn)為低濃度的寡糖是一種信號(hào)分子,可以與作物相互作用,對(duì)作物的生長(zhǎng)、發(fā)育和繁殖等起調(diào)控作用,抵Z病原微生物的侵染通過(guò)在調(diào)節(jié)過(guò)程中積累抗病物質(zhì)。褐藻寡糖是從植物和病菌中提取的低聚糖,對(duì)植物種子萌發(fā)、根系生長(zhǎng)和枝條伸長(zhǎng)有促進(jìn)作用,來(lái)源也非常普遍,開(kāi)發(fā)應(yīng)用的潛在可能性大,可以改善現(xiàn)階段設(shè)施內(nèi)作物生產(chǎn)過(guò)程中化肥等的過(guò)度使用給人類(lèi)和環(huán)境帶來(lái)的巨大危害。植物生長(zhǎng)表現(xiàn)為,植物細(xì)胞體積的增加、植物細(xì)胞分裂以及組織特性的發(fā)育過(guò)程。細(xì)胞分裂過(guò)程中的動(dòng)力和擴(kuò)張的分子機(jī)制主要依賴(lài)糖類(lèi)等碳水化合物來(lái)提供能量。糖信號(hào)是決定植物生長(zhǎng)發(fā)育的中心,與其他信號(hào)網(wǎng)絡(luò)連接,控制細(xì)胞增殖和擴(kuò)張。植物的生長(zhǎng)發(fā)育還依賴(lài)于蛋白質(zhì)的合成,而糖和環(huán)境信號(hào)對(duì)mRNA翻譯的調(diào)控至關(guān)重要。 湖北褐藻寡糖技術(shù)要求

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