細胞轉(zhuǎn)染的注意事項：物品(PS)物品，比如青霉素和鏈霉素，是影響轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)基添加物。這些物品一般對于真核細胞無毒，但陽離子脂質(zhì)體試劑增加了細胞的通透性，使物品可以進入細胞。這降低了細胞的活性，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低。所以，在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中不能使用物品，甚至在準備轉(zhuǎn)染前進行細胞鋪板時也要避免使用物品。這樣，在轉(zhuǎn)染前也不必潤洗細胞。對于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，不要在選擇性培養(yǎng)基中使用青霉素和鏈霉素，ICIN選擇性物品的競爭性克制劑。另外，為了保證無血清培養(yǎng)基中細胞的健康生長，使用比含血清培養(yǎng)基更少的物品量。當復(fù)合物接近細胞膜時，通過內(nèi)吞作用形成內(nèi)體進入細胞。南昌正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家批發(fā)價

細胞轉(zhuǎn)染那些事兒：1. 選擇傳代次數(shù)較低并處于對數(shù)生長期的細胞進行轉(zhuǎn)染。對大多數(shù)細胞而言，均需要在轉(zhuǎn)染當天或前現(xiàn)在鋪板，第二天上午進行轉(zhuǎn)染，48h后收集細胞進行功能檢測。對于原代細胞，可用促有絲分裂刺激物進行細胞活化。2.對于貼壁細胞，一般要求在轉(zhuǎn)染前一日，用胰酶處理為單細胞懸液，重新接種于培養(yǎng)皿或瓶，較好在轉(zhuǎn)染前4小時換一次新鮮培養(yǎng)液。3.支原體污染會嚴重降低細胞轉(zhuǎn)染的效率，且支原體不會像細菌污染那么明顯，因而轉(zhuǎn)染前可用環(huán)丙沙星處理細胞以除去支原體。4.細胞轉(zhuǎn)染時需要一定的細胞密度，以70-90%（貼壁細胞）或2×106-4×106細胞/ml（懸浮細胞）為宜。重慶細胞高效轉(zhuǎn)染試劑單價使用基質(zhì)珠做為固相支持可以使貼壁細胞懸浮生長。

細胞轉(zhuǎn)染的注意事項：1.細胞鋪板密度用于轉(zhuǎn)染的較佳細胞密度根據(jù)不同的細胞類型或應(yīng)用而異。因轉(zhuǎn)染試劑對細胞有毒害作用，細胞太少，容易死。一般轉(zhuǎn)染時，貼壁細胞密度為70%-90%，懸浮細胞密度為2-4×106細胞/ml，確保轉(zhuǎn)染時細胞沒有長滿或處于靜止期。因為轉(zhuǎn)染效率對細胞密度很敏感，所以在不同實驗間保持一個基本的傳代步驟很重要。鋪板細胞數(shù)目的增加可以增加轉(zhuǎn)染活性和細胞產(chǎn)量。細胞的融合度必須要達到90%才能做啟動子的選擇獲得高轉(zhuǎn)染活性所需選擇的啟動子依賴于選用的細胞系和要表達的蛋白。CMV啟動子在大多數(shù)細胞類型中可以獲得高表達活性。同其他啟動子，如SV40和RSV(勞斯肉瘤細菌)相比，在BHK-21中其活性較高。這三種細菌啟動子在T細胞來源的細胞系，如Jurkat中組成表達水平較低。轉(zhuǎn)染后在培養(yǎng)基中加入PHA-L和PMA可以啟動Jurkat細胞中CMV啟動子，而單PMA就足以啟動KG1和K562(人骨髓瘤白細胞)中的CMV啟動子。SV40啟動子的表達在含有大T抗原(存在于COS-1和COS-7)時會提高，因為大T抗原可以刺激染色體外的合成。

細胞轉(zhuǎn)染：(1)轉(zhuǎn)染試劑的準備A.將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物。B.震蕩后將試劑放在-20攝氏度保存，使用前還需震蕩，。(2)選擇合適的混合比例(1：1-1：2/脂質(zhì)體體積：DNA質(zhì)量)來轉(zhuǎn)染細胞。在一個轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的MyoD或者EGFP的DNA，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次震蕩。(3)將混合液在室溫放置10—15分鐘。(4)吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基，用PBS或者無血清培養(yǎng)基清洗一次。(5)加入混合液，將細胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個小時。(6)到時后，根據(jù)細胞種類決定是否移除混合液，之后加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24-48小時。對于真核生物，轉(zhuǎn)染就是原核生物中轉(zhuǎn)化的同義詞。

細胞轉(zhuǎn)染實驗簡介實驗步驟：1、細胞傳代(1)試驗準備：200ul/1mlTip頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌)，酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號筆，培養(yǎng)皿，離心管。(2)棄掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，用1ml的PBS溶液洗滌兩次。(3)用Tip頭加入1mlTrypsin液，消化1分鐘(37。C，5%CO2)。用手輕拍培養(yǎng)瓶壁，觀察到細胞完全從壁上脫落下來為止。(4)加入1ml的含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng)。(5)用頭多次吹吸，使細胞完全分散開。(6)將培養(yǎng)液裝入離心管中，1000rpm離心5min。(7)用培養(yǎng)液重懸細胞，細胞計數(shù)后選擇0.8X106個細胞加入一個35mm培養(yǎng)皿。(8)將合適體積完全培養(yǎng)液加入離心管中，混勻細胞后輕輕加入培養(yǎng)皿中，使其均勻分布。(9)將培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)入CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第二天轉(zhuǎn)染。在一般實驗室中很難普及。其它物理和化學(xué)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法，則各有其特點。上海細胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家推薦

通過實驗優(yōu)化合適的轉(zhuǎn)染條件對于轉(zhuǎn)染效率的提高很重要。南昌正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家批發(fā)價

細胞轉(zhuǎn)染的常用方法：人工脂質(zhì)體法 原理：帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負電的磷酸基團形成復(fù)合物，進而可被細胞內(nèi)吞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染/瞬時性轉(zhuǎn)染。這種方法幾乎適用于所有細胞，轉(zhuǎn)染效率高、重復(fù)型好，但轉(zhuǎn)染時需要去除血清，轉(zhuǎn)染效果隨細胞類型變化大。實驗步驟：在單獨試管中分別稀釋核酸及轉(zhuǎn)染試劑 → 脂質(zhì)體與核酸的磷酸骨架結(jié)合，形成復(fù)合物 → 脂質(zhì)體上的正電荷有助于復(fù)合物與細胞膜結(jié)合 → 復(fù)合物通過內(nèi)吞作用進入胞漿 → 分析細胞瞬時基因表達或沉默情況。南昌正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家批發(fā)價