原代細(xì)胞與細(xì)胞系該如何選:原代細(xì)胞生長緩慢,一般認(rèn)為,原代細(xì)胞培養(yǎng)的第1代和傳代到第10代以內(nèi)統(tǒng)稱為原代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代左右就不容易傳下去了,細(xì)胞的生長會(huì)出現(xiàn)停滯,大部分細(xì)胞衰老死亡。但是有極少數(shù)的細(xì)胞能夠度過“危機(jī)”而繼續(xù)傳下去,這些存活的細(xì)胞一般能夠傳到40-50代,這種傳代細(xì)胞叫做細(xì)胞株。當(dāng)細(xì)胞傳至50代以后又會(huì)出現(xiàn)“危機(jī)”,這時(shí)有部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в凶兊奶攸c(diǎn),從而可能無限制地傳代下去,這種傳代細(xì)胞稱為細(xì)胞系。會(huì)極大提高原代培養(yǎng)的細(xì)胞在體外存活率。天津正規(guī)原代細(xì)胞分離試劑盒報(bào)價(jià)
選擇原代細(xì)胞的原因:長期以來,科學(xué)家多依賴永生化的細(xì)胞系來進(jìn)行各種研究,但在過去十年,隨著細(xì)胞生物學(xué)的發(fā)展,細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域發(fā)生了巨大變化,新型的技術(shù)和培養(yǎng)試劑讓使用原代細(xì)胞作為研究對象成為可能。相比于細(xì)胞系,原代細(xì)胞更多保留了體內(nèi)原始組織的生物學(xué)特征,如生長和衰老,因此通過原代細(xì)胞可建立更好的細(xì)胞疾病模型。原代細(xì)胞(Primarycells)是指來源組織,經(jīng)過特定分離方法制備而成的初始細(xì)胞。原代細(xì)胞離體時(shí)間短且不經(jīng)過永生化過程,其生物學(xué)特性未發(fā)生很大變化,仍保持原有的遺傳特征,可更好地反映細(xì)胞在體內(nèi)的生長狀態(tài),從而獲得與體內(nèi)生理功能更接近的數(shù)據(jù),很適合用于藥物測試、細(xì)胞分化和轉(zhuǎn)化等實(shí)驗(yàn)研究。武漢原代細(xì)胞分離試劑盒平均價(jià)格用70%的酒精沖洗凍存管,然后擦去多余酒精。
原代細(xì)胞的小知識:1.解凍原代細(xì)胞對解凍過程非常敏感,因此將小瓶置于37℃水浴鍋中,保持并輕輕旋轉(zhuǎn)直到內(nèi)容物剛剛解凍是很重要的。然后應(yīng)立即從水浴中取出小瓶,并轉(zhuǎn)移到無菌操作臺。確保您的培養(yǎng)瓶在解凍前已經(jīng)準(zhǔn)備就緒,以便可以立即用于接種細(xì)胞,并置于培養(yǎng)箱中,我們在使用cellsystems的原代視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞時(shí),復(fù)蘇的時(shí)候沒有去離心,第二天換個(gè)液就可以。2.傳代原代細(xì)胞有間隙克制接觸不良反應(yīng),所以細(xì)胞不能到達(dá)100%的密度的時(shí)候傳代,一般較有效的建議觀察細(xì)胞的生長周期,CellSystems的原代細(xì)胞在細(xì)胞密度達(dá)到85%左右的時(shí)候傳代較佳,當(dāng)生長至100%匯合時(shí),它就會(huì)衰老。記住,所有的原代細(xì)胞不是100%純,因此我們要盡量減少污染細(xì)胞的生長。當(dāng)細(xì)胞傳代時(shí),使用低濃度的胰蛋白酶,也可以嘗試下cellsystems的整體消化套裝哦(品牌:cellsystems,貨號:4Z0-800)并在顯微鏡下密切監(jiān)測細(xì)胞。此外,記得在胰蛋白酶消化后完全中和細(xì)胞中的胰酶,因?yàn)槿魏位钚缘囊鹊鞍酌付紝p傷細(xì)胞。
原代細(xì)胞與細(xì)胞系:永生化細(xì)胞系通常具有更快的倍增時(shí)間并可持續(xù)地分裂,為實(shí)驗(yàn)提供一致的研究工具。然而,每次分裂都會(huì)引起遺傳漂移,降低了它們的生物學(xué)相關(guān)性。其優(yōu)點(diǎn)在于,當(dāng)需要相同的遺傳背景時(shí),可以從一個(gè)細(xì)胞系產(chǎn)生整個(gè)克隆群體以具有相同的基因型。但是,哺乳動(dòng)物原代細(xì)胞是生命科學(xué)研究中不可或缺的一環(huán),因?yàn)樗鼈冊谏砩项愃朴诠w組織并保留其天然異質(zhì)的基因組成。它們具有體內(nèi)組織特異性特征并且純度高,因此,除了應(yīng)用于大規(guī)模藥物篩選,越來越多地用于更可靠地研究生命科學(xué),例如細(xì)胞代謝,信號傳導(dǎo),和衰老等。相關(guān)研究工作已經(jīng)揭示了生長培養(yǎng)基必須包含的基本成分。
原代細(xì)胞的培養(yǎng)與建系細(xì)胞的來源多樣,培養(yǎng)方法也各不相同,凡是來源于胚胎、組織部位及外周血,經(jīng)特殊分離方法制備而來的原初培養(yǎng)的細(xì)胞稱之為原代細(xì)胞。原代細(xì)胞經(jīng)分散接種之手段稱為傳代。凡能經(jīng)傳代方式進(jìn)行再次培養(yǎng)的細(xì)胞稱為傳代細(xì)胞。若能穩(wěn)定生長傳至10~20代以上的細(xì)胞可確立為細(xì)胞系。若有條件能開展單細(xì)胞克隆、純化,經(jīng)大量擴(kuò)增后所形成的生物學(xué)特性穩(wěn)定的克隆化細(xì)胞群,稱之為細(xì)胞株或克隆細(xì)胞。此過程稱為細(xì)胞的純化或細(xì)胞克隆。這些基本技術(shù)是從事細(xì)胞培養(yǎng)工作的基礎(chǔ),只有熟悉和掌握了基本技術(shù),才可能更快捷地學(xué)習(xí)和掌握其他方法,本章重點(diǎn)敘述常用的基本技術(shù)??壳肮?jié)原代細(xì)胞的取材人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件,是進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)的靠前步,若取材不當(dāng),將會(huì)直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)多數(shù)細(xì)胞推薦的接種密度為每平方厘米5000個(gè)細(xì)胞。上海原代細(xì)胞分離試劑盒直銷價(jià)
如果培養(yǎng)液的量在5ml以下,可以采用旋轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)。天津正規(guī)原代細(xì)胞分離試劑盒報(bào)價(jià)
細(xì)胞凍存:通常我們不推薦重新凍存原代細(xì)胞,因?yàn)檫@可以促進(jìn)細(xì)胞衰老和/或?qū)е鹿δ茏兓?。原代?xì)胞非常敏感,重新凍結(jié)可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡或損傷。與細(xì)胞系不同,原代細(xì)胞增殖有限,我們建議盡早使用原代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以防止遺傳漂移,如果你正在使用一個(gè)增殖困難的細(xì)胞類型,你應(yīng)該密切監(jiān)測細(xì)胞形態(tài),因?yàn)樯倭炕祀s的細(xì)胞(如成纖維細(xì)胞)可能隨著時(shí)間的推移,大量生長從而成為主要細(xì)胞。正常的原代細(xì)胞培養(yǎng),在無污染的情況下,建議培養(yǎng)基中不加抗體,抗體會(huì)影響細(xì)胞的某些基因變異從而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)有差異,所以cellsystems的細(xì)胞在分離提取時(shí)就考慮到這點(diǎn),他們不會(huì)采用任何抗體去分離和純化的同時(shí),通過酶消化或者離心洗滌的方法讓細(xì)胞達(dá)到95%以上的純度,這樣得到的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)更為準(zhǔn)確天津正規(guī)原代細(xì)胞分離試劑盒報(bào)價(jià)