細(xì)胞凍存,我們應(yīng)該注意哪些事項(xiàng):凍存細(xì)胞的效果好壞要看細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)的存活率。細(xì)胞凍存時(shí),細(xì)胞內(nèi)部會(huì)產(chǎn)生晶體,水凝固形成的高濃度溶質(zhì)會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生損傷,所以在凍存過(guò)程中要盡可能降低晶體的產(chǎn)生。為了提高復(fù)蘇存活率,可通過(guò)以下方法完成:a)降溫的速度不能太快,讓細(xì)胞內(nèi)的水分緩慢離開(kāi)細(xì)胞;b)在低溫環(huán)境下凍存細(xì)胞可以降低高濃度鹽對(duì)細(xì)胞中蛋白質(zhì)的影響;c)凍存試劑要采用親水的低溫保護(hù)劑;d)復(fù)蘇時(shí)的速度要快,這樣可以減少細(xì)胞內(nèi)部冰晶溶解時(shí)產(chǎn)生的某些可溶性成分。凍存液中使用的所有原料均應(yīng)符合臨床或藥物需求。唐山無(wú)血清細(xì)胞凍存液廠(chǎng)家現(xiàn)貨
凍存細(xì)胞注意事項(xiàng):冷凍保護(hù)劑可降低培養(yǎng)基的冰點(diǎn),并可減緩冷卻速度,較大降低冰晶形成的危險(xiǎn)(冰晶可損傷細(xì)胞,導(dǎo)致細(xì)胞死亡)。注:DMSO可促進(jìn)有機(jī)分子進(jìn)入組織。操作含DMSO的試劑時(shí),應(yīng)采用與此類(lèi)物質(zhì)安全危害相適應(yīng)的設(shè)備和操作規(guī)范,并應(yīng)按照當(dāng)?shù)胤ㄒ?guī)處置此類(lèi)試劑。建議可使用廠(chǎng)商生產(chǎn)的無(wú)血清細(xì)胞凍存液,使用方便,復(fù)蘇率高。注意冷凍保護(hù)劑DMSO的品質(zhì):DMSO應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí),無(wú)菌且無(wú)色,以5-10ml小體積分裝,4℃避光保存,勿作多次解凍。徐州無(wú)血清細(xì)胞凍存液生產(chǎn)廠(chǎng)家無(wú)血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品性能:特別配方(主要成分為DMSO和氨基酸)有效提高細(xì)胞凍存活率和復(fù)蘇活力。
無(wú)血清細(xì)胞凍存液與傳統(tǒng)細(xì)胞凍存液比較及優(yōu)勢(shì):1.傳統(tǒng)細(xì)胞凍存液只適用于含血清細(xì)胞的凍存,但并不適用于無(wú)血清培養(yǎng)的細(xì)胞,例如一些CIK細(xì)胞等,而無(wú)血清細(xì)胞凍存液即適用于含血清細(xì)胞的凍存,又適用于無(wú)血清細(xì)胞的凍存,是一種通用型細(xì)胞凍存液,通用于各種動(dòng)物細(xì)胞株;2.傳統(tǒng)細(xì)胞凍存液含10%胎牛血清,因血清是動(dòng)物源性成份,因此病毒、霉菌和支原體等污染的風(fēng)險(xiǎn)很高,而無(wú)血清細(xì)胞凍存液因不含血清,只含DMSO、葡萄糖等營(yíng)養(yǎng)成份,較大降低了動(dòng)物血清來(lái)源病毒、霉菌和支原體等污染的風(fēng)險(xiǎn),確保凍存細(xì)胞的安全;3.傳統(tǒng)細(xì)胞凍存液含血清,但動(dòng)物血清成分復(fù)雜,個(gè)體差異大,且生產(chǎn)來(lái)源不穩(wěn)定,因此批次間質(zhì)量常常不穩(wěn)定,這導(dǎo)致培養(yǎng)細(xì)胞的狀態(tài)也會(huì)受到影響,而無(wú)血清細(xì)胞凍存液成分和配比明確,批次間差異很小,能夠保證生長(zhǎng)細(xì)胞狀態(tài)的穩(wěn)定性,細(xì)胞存活率高。
細(xì)胞凍存中的注意事項(xiàng):細(xì)胞凍存開(kāi)始時(shí),要溫好相應(yīng)的培養(yǎng)基和相應(yīng)的試劑,以及計(jì)數(shù)耗材,避免操作過(guò)程中手忙腳亂。用移液管吹打相應(yīng)的胞液時(shí),要保證移液管在液面以下吹打,管內(nèi)要有液體,防止產(chǎn)生相應(yīng)的氣泡,氣泡的張力會(huì)影響細(xì)胞的活率和生存狀態(tài)。計(jì)數(shù)細(xì)胞時(shí)要保證取胞液時(shí)也要混勻,這個(gè)過(guò)程比較重要,細(xì)胞不混勻,計(jì)數(shù)不準(zhǔn),此外吹打應(yīng)該輕柔,避免細(xì)胞在吹打的過(guò)程中出現(xiàn)了相應(yīng)的死亡。凍存離心用50ml離心管比較好,加凍存液吹打混勻比較方便,離心后不能過(guò)多地晃動(dòng)離心管。當(dāng)離心管液體較多的時(shí)候,可以直接傾倒,不要磕,多余的液體較好用泵吸出比較好。凍存支數(shù)少的情況,用泵頭輕柔吹打,避免出現(xiàn)氣泡,凍存支數(shù)多用移液管吹打。將分裝好的細(xì)胞凍存管,直接置于-80 度冰箱過(guò)夜保存。
細(xì)胞凍存液是如何保護(hù)細(xì)胞的:當(dāng)溫度進(jìn)一步下降,細(xì)胞內(nèi)外都結(jié)冰,產(chǎn)生冰晶損傷。但是如果在溶液中加入冷凍保護(hù)劑,則可保護(hù)細(xì)胞免受溶質(zhì)損傷和冰晶損傷。因?yàn)槔鋬霰Wo(hù)劑容易同溶液中的水分子結(jié)合,從而降低冰點(diǎn),減少冰晶的形成,并且通過(guò)其摩爾濃度降低未結(jié)冰溶液中電解質(zhì)的濃度,使細(xì)胞免受溶質(zhì)損傷,細(xì)胞得以在較低溫條件下保存。在復(fù)蘇時(shí),一般以很快的速度升溫,1-2分鐘內(nèi)即恢復(fù)到常溫,細(xì)胞內(nèi)外不會(huì)重新形成較大的冰晶,也不會(huì)暴露在高濃度的電解質(zhì)溶液中過(guò)長(zhǎng)的時(shí)間,從而無(wú)冰晶損傷和溶質(zhì)損傷產(chǎn)生,凍存的細(xì)胞經(jīng)復(fù)蘇后仍保持其正常的結(jié)構(gòu)和功能。冷凍保護(hù)劑對(duì)細(xì)胞的冷凍保護(hù)效果還與冷凍速率、冷凍溫度和復(fù)溫速率有關(guān)。而且不同的冷凍保護(hù)劑其冷凍保護(hù)效果也不一樣。無(wú)任何外源蛋白和血清,適用于各類(lèi)動(dòng)物細(xì)胞株凍存。唐山無(wú)血清細(xì)胞凍存液廠(chǎng)家現(xiàn)貨
同時(shí)另一些保護(hù)劑不能穿透細(xì)胞。唐山無(wú)血清細(xì)胞凍存液廠(chǎng)家現(xiàn)貨
無(wú)血清快速細(xì)胞凍存液,通用于各種動(dòng)物細(xì)胞株。特別配方具有有效提高細(xì)胞凍存活率和復(fù)蘇活力。不含動(dòng)物來(lái)源性蛋白,能減少各類(lèi)病毒、霉菌和支原體等的污染,確保凍存細(xì)胞安全。既適用于一般培養(yǎng)細(xì)胞的凍存,也適用于無(wú)血清培養(yǎng)細(xì)胞和蛋白表達(dá)細(xì)胞的凍存。產(chǎn)品特色:1.高安全性,完全使用醫(yī)藥品等級(jí)原料進(jìn)行生產(chǎn),不含動(dòng)物成分,病毒、霉菌和支原體等污染可能性低,各批產(chǎn)品之間有更高的產(chǎn)品質(zhì)量一致性。2.細(xì)胞存活率高,無(wú)批次差異。3.完全凍存液配方,可直接使用,方便簡(jiǎn)捷,可直接存放于-80℃冰箱凍存,無(wú)需經(jīng)過(guò)費(fèi)時(shí)的程序降溫過(guò)程(省時(shí)、省力、省錢(qián))。唐山無(wú)血清細(xì)胞凍存液廠(chǎng)家現(xiàn)貨