外泌體研究的主要應(yīng)用:外泌體的功能取決于其所來源的細胞類型,其可參與到機體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細胞遷移、細胞分化、一些病癥侵襲等方方面面。有研究表明一些病癥來源的外泌體參與到一些病癥細胞與基底細胞的遺傳信息的交換,從而導(dǎo)致大量新生血管的生成,促進了一些病癥的生長與侵襲。一些病癥。一些病癥轉(zhuǎn)移。來自白血病干細胞的外泌體促進急性骨髓性白血病(AML)細胞的增殖、遷移和壓制細胞凋亡。治病靶標。利用外泌體遞送小干擾RNA來沉默KRASG12D,從而特異性高效靶向至胰腺病細胞,以明顯降低RAS活化、病細胞增殖和轉(zhuǎn)移過程。免疫。β細胞將含有蛋白質(zhì)和miRNA的外泌體釋放到細胞外,并可轉(zhuǎn)移到其他代謝部位或免疫內(nèi)皮細胞,有利于維持葡萄糖體內(nèi)平衡或造成胰島素抵抗。心血管。外泌體介導(dǎo)miR-155從平滑肌細胞轉(zhuǎn)移到內(nèi)皮細胞導(dǎo)致了內(nèi)皮細胞的損傷促進動脈硬化。分子標記。疾病診斷。在酒精性肝病、NASH、菌類性肝炎、藥物性肝損傷和肝細胞病中發(fā)現(xiàn)循環(huán)EVs的水平上升。預(yù)后標志不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標志物。南京正規(guī)外泌體提取試劑廠家
外泌體與免疫系統(tǒng):不同的細胞來源的外泌體,包括免疫細胞(B細胞和樹突狀細胞)、病細胞、上皮細胞和間充質(zhì)細胞,釋放出帶有載體的外泌體,可影響先天免疫系統(tǒng)和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)中受體細胞的增殖和各自的活性。CD4+和CD8+T細胞可直接或間接地受到外泌體的影響,刺激或壓制其增殖和功能。外泌體與代謝性和心血管疾病:外泌體可以通過攜帶miRNA或代謝物分子在代謝性疾病和心血管疾病的發(fā)生的發(fā)展過程中起作用。體外培養(yǎng)心血管疾病的細胞收集的外泌體與疾病相關(guān)的代謝適應(yīng)有關(guān);體外培養(yǎng)的間充質(zhì)干細胞和胚胎干細胞的外泌體具有保護心血管的作用。這些發(fā)現(xiàn)表明不同來源的外泌體可以通過傳遞miRNA,蛋白等物質(zhì)改變受體細胞的代謝狀態(tài)。外泌體檢測作為一種新型的液體活檢熱點技術(shù)已被許多臨床科研機構(gòu)普遍地應(yīng)用于一些病癥和疾病的無創(chuàng)診斷昆明外泌體提取試劑哪家便宜多聚物沉淀法早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒,現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體。
外泌體(exosomes,Exos)是細胞分泌的一種膜囊泡,因其可以將供體細胞的信息通過其攜帶的蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA等傳遞到受體細胞,實現(xiàn)細胞之間的信息交流及物質(zhì)交換,并且可以作為藥物載體轉(zhuǎn)運藥物而引起科學(xué)家的普遍關(guān)注(Fig1)。外泌體作為內(nèi)源性的天然藥物載體有著獨特的優(yōu)勢,表面由脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成,使其可以穿透許多生物膜,提高藥物的運輸效率和靶向性,可以穩(wěn)定存在于血液中,納米級尺寸明顯增強藥物在瘤部位的滲透滯留效應(yīng)(permeabilityandretentioneffect,EPR)。目前,許多抗藥物、基因藥物及藥物均被成功載入外泌體。但是由于沒有較好的外泌體分離純化和載藥的方法,使得其作為藥物載體的應(yīng)用受到限制。
外泌體與神經(jīng)退行性疾?。和饷隗w可能促進或限制大腦中未折疊和異常折疊的蛋白質(zhì)的聚集。AD病人腦脊液外泌體中均可檢測到Tau和Aβ蛋白。類似的現(xiàn)象也在PD和ALS疾病中發(fā)現(xiàn)。PD病人腦脊液外泌體可檢測到α-synuclein,ALS病人外泌體中也可以檢測到SOD1或TDP-43。外泌體與疾病診斷(應(yīng)用潛能):外泌體生成機制表明,通過分析外泌體的組分,可以幫助識別其來源的細胞類型。這一特性已被應(yīng)用于開發(fā)心血管疾病,神經(jīng)系統(tǒng)疾病和一些病癥的分子診斷方法,也在肝腎肺相關(guān)疾病中進行研發(fā)測試。將沉淀物用PBS緩沖液進行懸浮,使外泌體懸浮于液體上層。用于外泌體提取的體液收集注意事項:選擇血清還是血漿?推薦大多數(shù)研究選擇血漿。
外泌體(exosome),特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。其主要來源于細胞內(nèi)內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。現(xiàn)已證實可以分泌外泌體的細胞有:肥大細胞、淋巴細胞、樹突狀細胞、瘤細胞、間充質(zhì)干細胞等。外泌體在免疫中抗原呈遞、瘤的生長與遷移、組織損傷的修復(fù)等生理病理上起著重要的作用。同時,不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標志物。細胞外囊泡是蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA和脂質(zhì)運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介,根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類,包括外泌體、微泡和凋亡小體。其中,外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡,由多種細胞分泌,內(nèi)含有特定的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、細胞因子或遺傳物質(zhì)。來源于不同的組織的外泌體不光具有其特異性蛋白分子,而且還包含其行使功能的關(guān)鍵分子外泌體提取:使用抗體包被珠子的分離不適合從大量樣本中獲得外泌體。開封外泌體提取試劑
靜置10~15分鐘,留取沉淀物備用。南京正規(guī)外泌體提取試劑廠家
外泌體(Exosomes)是細胞分泌到胞外的一種囊泡(ExtracellularVesicles,EVs),其大小為30-150nm,具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài),含有豐富的內(nèi)含物(包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等),參與細胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,包括血液、唾液、尿液、乳汁等,同時也存在于組織樣本中,如腦組織、肌肉組織、脂肪組織等。腦組織分離方法簡述:將腦組織剪成薄片,放入離心管中加上消化液進行消化,經(jīng)水浴、反復(fù)輕輕上下顛倒,再用移液間斷緩慢吹吸至消化結(jié)束。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中,混勻,置于冰上。再進行一系列的差速超速離心過程,包括除雜、濾膜過濾、超離等。較后用PBS重懸外泌體,用重懸后的外泌體進行下面的透射電鏡(TEM)、納米粒徑追蹤分子(NTA)和markerWB鑒定。來源于細胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中南京正規(guī)外泌體提取試劑廠家