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深圳細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑哪家好

來源: 發(fā)布時間:2022-06-18

細(xì)胞轉(zhuǎn)染簡介:轉(zhuǎn)染,是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入,轉(zhuǎn)染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因?qū)儆谕ㄟ^物理方法將基因?qū)爰?xì)胞的范例;化學(xué)介導(dǎo)方法很多,如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù);生物介導(dǎo)方法,有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染,和現(xiàn)在比較多見的各種細(xì)菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。理想細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法,應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高、細(xì)胞毒性小等優(yōu)點。細(xì)菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù),是目前轉(zhuǎn)染效率較高的方法,同時具有細(xì)胞毒性很低的優(yōu)勢。但是,細(xì)菌轉(zhuǎn)染方法的準(zhǔn)備程序復(fù)雜,常常對細(xì)胞類型有很強的選擇性,在一般實驗室中很難普及。其它物理和化學(xué)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法,則各有其特點。因為DNA攝入效率和表達水平在不同實驗中差異較大,實驗必須很小心。深圳細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑哪家好

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轉(zhuǎn)染技術(shù):國際上推出了一些陽離子聚合物基因轉(zhuǎn)染技術(shù),以其適用宿主范圍廣,操作簡便,對細(xì)胞毒性小,轉(zhuǎn)染效率高受到研究者們的青睞。其中樹枝狀聚合物(Dendrimers)和聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)的轉(zhuǎn)染性能較佳,但樹枝狀聚合物的結(jié)構(gòu)不易于進一步改性,且其合成工藝復(fù)雜。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子,每相隔二個碳個原子,即每“第三個原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子,使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何pH下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿”(protonsponge)體。這種聚陽離子能將各種報告基因轉(zhuǎn)入各種種屬細(xì)胞,其效果好于脂質(zhì)聚酰胺,經(jīng)進一步的改性后,其轉(zhuǎn)染性能好于樹枝狀聚合物,而且它的細(xì)胞毒性低。大量實驗證明,PEI是非常有希望的基因治好載體。目前在設(shè)計更復(fù)雜的基因載體時,PEI經(jīng)常做為中心組成成分。蕪湖正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑供應(yīng)商對于真核生物,轉(zhuǎn)染就是原核生物中轉(zhuǎn)化的同義詞。

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細(xì)胞轉(zhuǎn)染為什么不能加血清:不同的細(xì)胞及轉(zhuǎn)染試劑要求轉(zhuǎn)染的條件是不同的。較好是在靠前次實驗前做一個預(yù)實驗,比如:HeLa,293,CHO,COS7,MCF-7,HepG2等細(xì)胞,是否加血清,對不同的細(xì)胞是有不同的影響的,有些細(xì)胞是可以有血清的,有些加血清就會受影響。轉(zhuǎn)染后在6小時左右較好換液且換為有血清的培養(yǎng)基,其一因為普通轉(zhuǎn)染試劑對細(xì)胞的毒性作用大,其二可降低因血清的缺乏引起的細(xì)胞的死亡。轉(zhuǎn)染時不加血清是防止血清的干擾作用,轉(zhuǎn)染后可適時加入。加入過早會引起未轉(zhuǎn)染細(xì)胞的優(yōu)勢生長,過晚會引起較多細(xì)胞死亡。可實時觀察1/5細(xì)胞變圓的時候加入血清。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個大坑:1.試劑過期有時候轉(zhuǎn)染效率低下,還要考慮會不會存在試劑過期的情況。毛博當(dāng)年做轉(zhuǎn)染整整半年,百思不得其解。較后發(fā)現(xiàn),原來是Lipofectamine2000過期了。換了之后,立馬成功。根據(jù)我的經(jīng)驗,盡量使用開封半年內(nèi)的,因為過了半年后,就算沒有過失效期,但是細(xì)胞毒性較大增加,而轉(zhuǎn)染效率卻較大下降。千萬不要為了省錢,影響實驗進度哈。2.未加血清轉(zhuǎn)染后未及時加入血清,會導(dǎo)致細(xì)胞大量死亡。一般要在轉(zhuǎn)染后的4-6小時換液且換為有血清的培養(yǎng)基。根據(jù)毛博的經(jīng)驗,其實也可以在原來的無血清培養(yǎng)基里面滴加血清。這個時候,較好不要換液,不要打擾細(xì)胞,讓它安安靜靜地休息。但是也不能過早加入血清。過早的話,會引起未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞瘋狂生長。那么,什么是較佳時機呢?在20%的細(xì)胞變圓的時候,就是加血清的較佳時機。選擇傳代次數(shù)較低并處于對數(shù)生長期的細(xì)胞進行轉(zhuǎn)染。

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細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗簡介實驗步驟:1、細(xì)胞傳代(1)試驗準(zhǔn)備:200ul/1mlTip頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌),酒精棉球,廢液缸,試管架,微量移液器,記號筆,培養(yǎng)皿,離心管。(2)棄掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基,用1ml的PBS溶液洗滌兩次。(3)用Tip頭加入1mlTrypsin液,消化1分鐘(37。C,5%CO2)。用手輕拍培養(yǎng)瓶壁,觀察到細(xì)胞完全從壁上脫落下來為止。(4)加入1ml的含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng)。(5)用頭多次吹吸,使細(xì)胞完全分散開。(6)將培養(yǎng)液裝入離心管中,1000rpm離心5min。(7)用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,細(xì)胞計數(shù)后選擇0.8X106個細(xì)胞加入一個35mm培養(yǎng)皿。(8)將合適體積完全培養(yǎng)液加入離心管中,混勻細(xì)胞后輕輕加入培養(yǎng)皿中,使其均勻分布。(9)將培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)入CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),第二天轉(zhuǎn)染。能與核酸的磷酸根通過靜電作用,將DNA分子包裹入內(nèi)。珠海正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)品介紹

重新接種于培養(yǎng)皿或瓶,較好在轉(zhuǎn)染前4小時換一次新鮮培養(yǎng)液。深圳細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑哪家好

瞬時轉(zhuǎn)染和轉(zhuǎn)染效率的監(jiān)測:基因的瞬時表達在24-72小時內(nèi)就結(jié)束了。這種快速的瞬時表達非常適用于驗證質(zhì)粒表達和監(jiān)測轉(zhuǎn)染步驟的效率??梢允褂脠蟾婊騺泶_定優(yōu)化條件,其表達蛋白易檢測,在目的細(xì)胞中不含此蛋白或水平很低。常用的報告基因包括氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶(CAT),綠色熒光蛋白(GFP),熒光素酶(Lux或Luc)以及b-半乳糖苷酶(b-gal)。可以使用簡單的非同位素方法檢測b-gal的表達以測定轉(zhuǎn)染效率和活性。pCMVSPORT-bgal質(zhì)粒包含CMV啟動子調(diào)控下的LacZ基因,轉(zhuǎn)染入真核細(xì)胞內(nèi)后可以直接表達bgal。結(jié)合簡單的檢測步驟,可以做為監(jiān)測轉(zhuǎn)染條件的一種方便靈敏的方法深圳細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑哪家好