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來源: 發(fā)布時間:2022-07-10

外泌體鑒定:外泌體分離之后,需要經(jīng)過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標(biāo)志物,多角度進(jìn)行鑒定。l透射電鏡鑒定法:簡稱TEM,適合外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀察,即通常為茶托型或一側(cè)凹陷的半球形。l納米顆粒追蹤分析法:簡稱NTA,該方法能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測速度快,檢測后能提供外泌體粒徑和濃度信息。lWesternblot分子標(biāo)志物檢測:外泌體標(biāo)志蛋白包括四跨膜蛋白家族,如CD9、CD63和CD81;細(xì)胞質(zhì)蛋白,如肌動蛋白(Actin)和鈣磷脂結(jié)合蛋白(Annexins);外泌體提?。盒》肿涌蛇M(jìn)入凝膠中絕大部分孔洞,在柱中受到更強(qiáng)地滯留,更慢地被洗脫出。石家莊正規(guī)外泌體提取試劑平均價格

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Exosome,中文名外泌體,是一種能被大多數(shù)細(xì)胞分泌的微小膜泡,具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),直徑大約40-100nm。盡管外泌體較初在1983年就被發(fā)現(xiàn),但人們一直認(rèn)為它只是一種細(xì)胞的廢棄物。然而較近幾年,人們發(fā)現(xiàn)這種微小膜泡中含有細(xì)胞特異的蛋白、脂質(zhì)和核酸,能作為信號分子傳遞給其他細(xì)胞從而改變其他細(xì)胞的功能。這些發(fā)現(xiàn)點(diǎn)燃了人們對細(xì)胞分泌膜泡的興趣。較近的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在很多生理病理上起著重要的作用,如免疫中抗原呈遞、一些病癥的生長與遷移、組織損傷的修復(fù)等。不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物。外泌體具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),能很好的保護(hù)其包被的物質(zhì),且能靶向特定細(xì)胞或組織,因此是一種很好靶向給藥系統(tǒng)(targeteddeliverysystem)。深圳外泌體提取試劑價格用無菌針管吸取上層含有外泌體的液體,置于80℃儲存?zhèn)溆谩?/p>

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這一特性已被應(yīng)用于開發(fā)心血管疾病,神經(jīng)系統(tǒng)疾病和一些病癥的分子診斷方法,也在肝腎肺相關(guān)疾病中進(jìn)行研發(fā)測試。將沉淀物用PBS緩沖液進(jìn)行懸浮,使外泌體懸浮于液體上層,外泌體與神經(jīng)退行性疾?。和饷隗w可能促進(jìn)或限制大腦中未折疊和異常折疊的蛋白質(zhì)的聚集。AD病人腦脊液外泌體中均可檢測到Tau和Aβ蛋白。類似的現(xiàn)象也在PD和ALS疾病中發(fā)現(xiàn)。PD病人腦脊液外泌體可檢測到α-synuclein,ALS病人外泌體中也可以檢測到SOD1或TDP-43。外泌體與疾病診斷(應(yīng)用潛能):外泌體生成機(jī)制表明,通過分析外泌體的組分,可以幫助識別其來源的細(xì)胞類型。

在無菌條件下提取人體體液,并用PBS緩沖液進(jìn)行稀釋,然后通過離心篩選初步去除體液中的細(xì)胞成分和細(xì)胞碎片,制成體液樣本備用;體液樣本純化:通過過濾膜對上述體液樣本進(jìn)行過濾,進(jìn)一步去除體液中的細(xì)胞殘片及其他雜質(zhì),靜置10~15分鐘,留取沉淀物備用;外泌體提取:將上述沉淀物用PBS緩沖液進(jìn)行懸浮,使外泌體懸浮于液體上層,然后用無菌針管吸取上層含有外泌體的液體,置于80℃儲存?zhèn)溆谩4颂崛》椒l件復(fù)雜,成本高,專利申請利用靜置不太可能把外泌體沉降下來;根據(jù)外泌體表面的特異生物化學(xué)特性通過提取試劑的特異配方把外泌體從水相中沉降下來。不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物。近幾年來,市場上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒。

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用于外泌體提取的體液收集注意事項(xiàng):1、選擇血清還是血漿?推薦大多數(shù)研究選擇血漿。血液凝固過程中血小板會產(chǎn)生大量外泌體,含量占血清中外泌體的50%以上,選擇血漿可避免不必要的影響。2、注意抗凝劑的選擇。肝素類抗凝劑與PCR假陰性有關(guān),這可能是因?yàn)楦嗡嘏c引物和/或酶有競爭作用。除了克制PCR,肝素可以與外泌體結(jié)合,阻止細(xì)胞攝取外泌體。因此需要記錄肝素類藥物的患者的血液樣本。EDTA和雙嘧達(dá)莫(CTAD),CTAD可以阻止血小板的并克制其釋放外泌體。EDTA可能會干擾PCR反應(yīng)(盡管其程度小于肝素),但是還是優(yōu)于其他選擇。此外,有研究表明鈣螯合劑可在體外促進(jìn)外泌體與血小板的結(jié)合從而降低經(jīng)EDTA、或檸檬酸鹽處理后的血液樣本中外泌體的表觀數(shù)量。外泌體的提取、分離方法:開發(fā)高效、快速、穩(wěn)定,并且保持外泌體結(jié)構(gòu)和生物功能完整性的方法。天津正規(guī)外泌體提取試劑廠家推薦

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外泌體(exosomes)是活細(xì)胞經(jīng)過"內(nèi)吞-融合-外排"等一系列調(diào)控過程而形成的膜性囊泡,來源于晚期核內(nèi)體(也稱為多囊泡體),直徑約為30-150nm,密度在1.13-1.21g/ml,天然存在于血液、唾液、尿液及母乳等體液中,同時外泌體也存在于組織和細(xì)胞間隙中。人體中幾乎所有類型的細(xì)胞均能產(chǎn)生外泌體,人體中大約有1014個外泌體,大約平均每個細(xì)胞產(chǎn)生1000-10000個。外泌體中含有核酸(DNA、miRNA、lncRNA、mRNA、tRF等)、蛋白和脂類,在細(xì)胞間物質(zhì)和信息轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要作用,研究表明其在干細(xì)胞、免疫調(diào)控、瘤轉(zhuǎn)移、血管生成以及生物標(biāo)志物等領(lǐng)域都發(fā)揮著不可替代的作用。石家莊正規(guī)外泌體提取試劑平均價格