細胞凍存：細胞培養(yǎng)的傳代及日常維持過程中，在培養(yǎng)器具、培養(yǎng)液及各種準備工作方面都需大量的耗費，而且細胞一旦離開活的開始原代培養(yǎng)，它的各種生物特性都將逐漸發(fā)生變化并隨著傳代次數(shù)的增加和體外環(huán)境條件的變化而不斷有新的變化。因此及時進行細胞凍存十分必要。細胞冷凍儲存在-70℃冰箱中可以保存一年之久；細胞儲存在液氮中，溫度達-196℃，理論上儲存時間是無限的。原理：細胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以較大限度的保存細胞活力。如今細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外，減少細胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復(fù)蘇細胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細胞造成損傷。無血清凍存液用途：無血清細胞凍存液用于免疫細胞及干細胞的存儲。金華昆明無血清細胞凍存液

細胞凍存時間和操作步驟：1、首先我們需要凍存培養(yǎng)液，通常細胞凍存液含10%的DMSO，或者是甘油、10-20%的小牛血清；、取對數(shù)生長期細胞，并且還需要用PBS進行清洗，需要注意在這里要丟棄掉舊的細胞凍存液；3.去除PBS，加入適量的胰蛋白酶，以覆蓋住培養(yǎng)皿表面為宜，然后把單層生長的細胞消化掉；然后離心1000rpm5min時間；4、去除胰蛋白酶，加入凍存培養(yǎng)液，輕輕吹打使細胞的分布變得均勻，調(diào)節(jié)細胞較終的密度為5×106/ml-1×107/ml，需要注意這是較佳的細胞密度；5、將細胞裝入凍存管之中，每管的含量應(yīng)該保持在1～1.5ml之間。在凍存管上標明細名稱、時間、操作者；6、較后要說的就是細胞凍存的時間了，對于標準的凍存程序來說，需要進行梯度降溫，降溫速率-1～-2℃/min，一旦溫度達到-25℃以下時，那么就可增至-5℃～-10℃/min；等到-100℃的時候，可迅速的放入到液氮之中。合肥貴陽無血清細胞凍存液凍存要求發(fā)生改變，因為凍存細胞要進行臨床應(yīng)用。

無血清細胞凍存液的用途：無血清細胞凍存液，含多種保護劑成分。一些保護劑，易于穿透細胞，避免細胞內(nèi)部水分子形成冰晶損傷細胞，同時另一些保護劑不能穿透細胞，但可以在冰晶形成之前，優(yōu)先結(jié)合細胞外的水分子，降低細胞外溶液的電解質(zhì)濃度，減少陽離子進入細胞的數(shù)量，為多種保護劑組合，在細胞內(nèi)外進行雙重保護，較大提高了細胞復(fù)蘇存活率。無血清細胞凍存液不含牛血清，無動物源組份。2-8℃即可穩(wěn)定保存，無需冷凍，即取即用。凍存細胞，無需程序降溫。凍存細胞復(fù)蘇率在90%以上。

如何提高細胞凍存成功率：1.沒有控制好細胞的生長密度細胞的密度對細胞的生存質(zhì)量有著重要的影響，畢竟它們是一群又不能擠著了也不能孤獨的嬌貴寶寶。密度過高會讓細胞沒有足夠的生存空間，密度過低會讓細胞無法互相連接健康生長。建議大家在細胞接種前，一定要調(diào)整好適合細胞生長的濃度，提高細胞的存活率。2.溫度控制不達標慢凍快融是細胞凍存復(fù)蘇的中心關(guān)鍵詞之一。常規(guī)的凍存操作中，都會要求嚴格的梯度降溫，常見的是-4℃→-20℃至-40℃→-80℃→液氮，一定要避免溫度原因?qū)е录毎匀∠麥?；除非使用了成分?jīng)過優(yōu)化、經(jīng)過嚴格測試的凍存液，才能免去程序降溫這個繁瑣的步驟。保存的時候也要保證整個細胞都是處于液氮的液面下方，避免溫度對細胞存活的影響。加入適量細胞凍存液于離心管中，使細胞濃度為1x106～1x107 cells/mL。

血清血液成分（加入抗凝劑）血液凝固析出的淡黃色透明液體。如將血液自血管內(nèi)抽出，放入試管中，不加抗凝劑，則凝血反應(yīng)，血液迅速凝固，形成膠凍。凝血塊收縮，其周圍所析出之淡黃色透明液體即為血清，也可于凝血后經(jīng)離心取得。在凝血過程中，纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白塊，所以血清中無纖維蛋白原，這一點是與血漿比較大的區(qū)別。而在凝血反應(yīng)中，血小板釋放出許多物質(zhì)，各凝血因子也都發(fā)生了變化。這些成分都留在血清中并繼續(xù)發(fā)生變化，如凝血酶原變成凝血酶，并隨血清存放時間逐漸減少以至消失。這些也都是與血漿區(qū)別之處。但大量未參加凝血反應(yīng)的物質(zhì)則與血漿基本相同。為避免抗凝劑的干擾，血液中許多化學(xué)成分的分析，都以血清為樣品。無血清細胞凍存液產(chǎn)品性能：胎牛血清取自牛，因此，難以應(yīng)用到需要避免接觸動物源的應(yīng)用領(lǐng)域。廈門昆明無血清細胞凍存液

無血清凍存液用途：本產(chǎn)品請于保質(zhì)期內(nèi)使用，超過保質(zhì)期，必須放棄使用。金華昆明無血清細胞凍存液

細胞凍存的注意事項：1.為保持細胞較大存活率，一般都采用慢凍存融的方法。2.凍存物距液氮面越近溫度越低。標準的低凍速度為－1℃~12℃/分鐘，當(dāng)溫度下降達－25℃時，下降速度可增至－5~－10℃/分鐘，到－100℃時則可迅速凍入液氮中。因此要適當(dāng)掌握凍存物下降入液氮中的速度，過快能影響細胞內(nèi)水分透出，太慢則促冰晶形成。3.初次凍存者在下降凍存時，宜先用細木棒伸入罐中探測液面位置，然后需用溫度計與凍存物并行的辦法，以觀測下降凍存物的速度、凍存物與液氮液面距離和溫度三者關(guān)系，當(dāng)已掌握以上各參數(shù)和凍存技術(shù)熟練后，光按下降時間和下降距離便可獲理想凍存效果。金華昆明無血清細胞凍存液