瞬時轉染和轉染效率的監(jiān)測：基因的瞬時表達在24-72小時內就結束了。這種快速的瞬時表達非常適用于驗證質粒表達和監(jiān)測轉染步驟的效率。可以使用報告基因來確定優(yōu)化條件，其表達蛋白易檢測，在目的細胞中不含此蛋白或水平很低。常用的報告基因包括氯霉素乙酰轉移酶（CAT），綠色熒光蛋白（GFP），熒光素酶（Lux或Luc）以及b-半乳糖苷酶（b-gal）。可以使用簡單的非同位素方法檢測b-gal的表達以測定轉染效率和活性。pCMVSPORT-bgal質粒包含CMV啟動子調控下的LacZ基因，轉染入真核細胞內后可以直接表達bgal。結合簡單的檢測步驟，可以做為監(jiān)測轉染條件的一種方便靈敏的方法在一般實驗室中很難普及。其它物理和化學介導的轉染方法，則各有其特點。蘇州細胞高效轉染試劑報價

細胞轉染之PEI轉染法：1.細胞分盤：通過胰酶消化收集細胞，用適當?shù)耐耆囵B(yǎng)基以1×105至4×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于35mm培養(yǎng)皿上（根據(jù)實驗需要選擇培養(yǎng)皿，使細胞貼壁后所占面積達到培養(yǎng)皿總面積的70－90％）。將細胞置于含5％CO2的37℃溫箱中孵育8-24h，當細胞貼壁完全后即可開始轉染。轉染前2h換液（用1.5ml無血清培養(yǎng)基置換舊的培養(yǎng)基）。注：PEI轉染法對細胞生長有克制作用，在換液前細胞幾乎不生長，所以需要密度比較大時做轉染。2.制備PEI-DNA混合物以35mm組織培養(yǎng)皿用240μl反應總體積為例。先在無菌EP管中加入120μl1×HBS,再加入質粒DNA（總量1-3μg為佳），混勻后加入等體積PEI工作液，充分混勻后室溫靜置20-30min，較后將這240μl的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細胞的細胞培養(yǎng)基中，輕輕搖動平皿混勻后置于含5％CO2的37℃溫箱孵育。蕪湖細胞高效轉染試劑哪家便宜瞬時表達分析檢測未重組質粒DNA上基因的表達。

細胞轉染方法：1.脂質體轉染法陽離子脂質體表面帶正電荷，能與核酸的磷酸根通過靜電作用，將DNA分子包裹入內，形成DNA脂復合物，也能被表面帶負電的細胞膜吸附，再通過融合或細胞內吞進入細胞。脂質體轉染適用于把DNA轉染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細胞中，是目前實驗室較方便的轉染方法之一，其轉染率較高，優(yōu)于磷酸鈣法。由于脂質體對細胞有一定的毒性，所以轉染時間一般不超過24小時。常用細胞類型：cos-7、BHK、NIH3T3、Hela等2.電穿孔轉染法電流能夠可逆地擊穿細胞膜形成瞬時的水通路或膜上小孔促使DNA分子進入胞內，這種方法就是電穿孔。當遇到某些脂質體轉染效率很低或幾乎無法轉入時建議用電穿孔法轉染。一般情況下，高電場強度會殺死50%-70%的細胞。現(xiàn)在針對細胞死亡開發(fā)出了一種電轉保護劑，可以較大的降低細胞的死亡率，同時提高電穿孔轉染效率

細胞轉染，你至少要掌握以下幾點：胞轉染是指將外源分子如DNA，RNA等導入真核細胞的技術。隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發(fā)展，轉染已經成為研究和控制真核細胞基因功能的常規(guī)工具。在研究基因功能、調控基因表達、突變分析和蛋白質生產等生物學試驗中，其應用越來越普遍?？煞譃樗矔r轉染，穩(wěn)定轉染等。瞬時轉染是指外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此一個宿主細胞可存在多個拷貝數(shù)，產生高水平的表達，但通常只持續(xù)幾天，多用于啟動子和其他調控元件的分析。一般來說，超螺旋質粒DNA轉染效率較高，在轉染后24-72h內分析結果，常常用到一些報告系統(tǒng)如熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來幫助檢測。穩(wěn)定轉染是指外源DNA既可以整合到宿主染色體中，也可能作為一種游離體存在。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體中概率很小，通常需要一些選擇性標記反復篩選得到穩(wěn)定轉染的同源細胞系。瞬時轉染后，可在48h-72h細胞長滿之后，提取細胞蛋白或者RNA。

細胞電轉染實驗的幾點建議：1.電場強度要合適合適的電場強度對于電轉染實驗非常重要，電場強度不能過高，過高會增加細胞的死亡率；也不能過低，過低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同細胞系具有不同的較佳場強值，實驗前應測定所轉染細胞系的較佳電場強度。2.細胞狀態(tài)要好用于電轉的細胞一般選取處于對數(shù)生長期的細胞（15代以內，傳代后2d）。因為處于對數(shù)生長期的細胞分裂旺盛，表面結構致密比穩(wěn)定期的細胞差，電轉后，細胞膜的恢復能力強，而且處于有絲分裂期的細胞更容易接受外源DNA形成DNA脂復合物，也能被表面帶負電的細胞膜吸附。鄭州正規(guī)細胞高效轉染試劑直銷廠家

選擇傳代次數(shù)較低并處于對數(shù)生長期的細胞進行轉染。蘇州細胞高效轉染試劑報價

細胞轉染為什么不能加血清：不同的細胞及轉染試劑要求轉染的條件是不同的。較好是在靠前次實驗前做一個預實驗，比如：HeLa，293，CHO，COS7，MCF－7，HepG2等細胞，是否加血清，對不同的細胞是有不同的影響的，有些細胞是可以有血清的，有些加血清就會受影響。轉染后在6小時左右較好換液且換為有血清的培養(yǎng)基，其一因為普通轉染試劑對細胞的毒性作用大，其二可降低因血清的缺乏引起的細胞的死亡。轉染時不加血清是防止血清的干擾作用，轉染后可適時加入。加入過早會引起未轉染細胞的優(yōu)勢生長，過晚會引起較多細胞死亡?？蓪崟r觀察1/5細胞變圓的時候加入血清。蘇州細胞高效轉染試劑報價