細胞轉(zhuǎn)染的常用方法：細菌轉(zhuǎn)染：原理：對于用脂質(zhì)體不能實現(xiàn)轉(zhuǎn)染的細胞，可以采用細菌轉(zhuǎn)染?？捎糜诘鞍踪|(zhì)過表達或克制，是臨床研究中較常用的方法。它通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中，可用于難轉(zhuǎn)染細胞、原代細胞的穩(wěn)定性轉(zhuǎn)染。實驗步驟：通過基因克隆生成重組細菌→采用非細菌法轉(zhuǎn)染包裝細胞系，擴增并分離得到重組細菌顆?！兓⒌味毦骸D(zhuǎn)導(dǎo)目的細胞（含有細菌特異性的受體）→去除培養(yǎng)物中的細菌，并加入新鮮培養(yǎng)基→分析細胞瞬時基因表達或沉默情況。因為DNA攝入效率和表達水平在不同實驗中差異較大，實驗必須很小心。珠海正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家現(xiàn)貨

細胞轉(zhuǎn)染的常用方法：磷酸鈣共沉淀原理：該法可用于瞬時或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。然而因其對pH、溫度和緩沖液鹽濃度的微小變化十分敏感，所得結(jié)果容易出現(xiàn)差異，且對許多類型的細胞培養(yǎng)物(尤其是原代細胞)具有細胞毒性，轉(zhuǎn)染效率較差。實驗步驟：將核酸與氯化鈣在磷酸鹽緩沖液中混合，同時控制好pH、溫度等條件→室溫孵育，生成濃縮DNA的極小不溶性顆粒沉淀→將顆粒型沉淀分散到細胞中，促進DNA粘附在細胞表面→共沉淀通過內(nèi)吞作用進入胞漿→分析細胞瞬時基因表達或者選擇穩(wěn)定性傳染。溫州正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家對于真核生物，轉(zhuǎn)染就是原核生物中轉(zhuǎn)化的同義詞。

細胞轉(zhuǎn)染的原理、操作步驟以及小技巧：脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染操作步驟：(1)細胞培養(yǎng)：取6cm細胞皿，向每孔中加入2mL含1~2×105個細胞培養(yǎng)液，37℃CO2培養(yǎng)密度至40%~60%，密度過大，轉(zhuǎn)染后不利篩選細胞。(2)轉(zhuǎn)染液制備：在EP管中制備以下兩液(為轉(zhuǎn)染每一個孔細胞所用的量)A液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋1ug質(zhì)粒DNA。B液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋2ul脂質(zhì)體。分別將A液與B液輕彈混勻，靜置5分鐘。(3)吸取B液加入至A液中，輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。(4)轉(zhuǎn)染準備：用1mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次，再加入4mL不含血清培養(yǎng)液。(5)轉(zhuǎn)染：把A/B復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)液中，搖勻，37℃溫箱置6~24小時，吸除無血清轉(zhuǎn)染液，換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。(6)瞬時轉(zhuǎn)染后，可在48h-72h細胞長滿之后，提取細胞蛋白或者RNA，驗證敲減/過表達效率。

細胞轉(zhuǎn)染，你至少要掌握以下幾點：主要有下面幾種方法：：化學法：磷酸鈣法、DEAE-右旋糖苷法、陽離子脂質(zhì)體法；物理法：電穿孔法、顯微注射法、顆粒傳遞法；細菌介導(dǎo)法：逆轉(zhuǎn)錄細菌、腺細菌A.陽離子脂質(zhì)體法：帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負電的磷酸基團形成復(fù)合物被細胞內(nèi)吞。特點：簡單通用，適用性廣，轉(zhuǎn)染效率高，重復(fù)性好，但轉(zhuǎn)染時需除血清，轉(zhuǎn)染效率隨細胞類型變化大。由于脂質(zhì)體復(fù)合物與貼壁細胞的接觸機會遠大于懸浮細胞，所以貼壁比懸浮轉(zhuǎn)染效率要高。懸浮細胞建議使用電穿孔法。B.電穿孔法：利用高壓電脈沖對細胞膜的干擾，使其形成利于核酸進入的微孔必須通過對藥物的抗性篩選進行擴增或通過表型變化進行鑒定。

瞬時轉(zhuǎn)染和轉(zhuǎn)染效率的監(jiān)測：基因的瞬時表達在24-72小時內(nèi)就結(jié)束了。這種快速的瞬時表達非常適用于驗證質(zhì)粒表達和監(jiān)測轉(zhuǎn)染步驟的效率?？梢允褂脠蟾婊騺泶_定優(yōu)化條件，其表達蛋白易檢測，在目的細胞中不含此蛋白或水平很低。常用的報告基因包括氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶（CAT），綠色熒光蛋白（GFP），熒光素酶（Lux或Luc）以及b-半乳糖苷酶（b-gal）。可以使用簡單的非同位素方法檢測b-gal的表達以測定轉(zhuǎn)染效率和活性。pCMVSPORT-bgal質(zhì)粒包含CMV啟動子調(diào)控下的LacZ基因，轉(zhuǎn)染入真核細胞內(nèi)后可以直接表達bgal。結(jié)合簡單的檢測步驟，可以做為監(jiān)測轉(zhuǎn)染條件的一種方便靈敏的方法。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法陽離子脂質(zhì)體表面帶正電荷。徐州天津細胞高效轉(zhuǎn)染試劑

細胞密度以及轉(zhuǎn)染的時間長短和培養(yǎng)基中血清的含量都是影響轉(zhuǎn)染效率的重要因素。珠海正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家現(xiàn)貨

細胞轉(zhuǎn)染操作方法：轉(zhuǎn)染，是將外源性基因?qū)爰毎麅?nèi)的一種專門技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo)、化學介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因?qū)儆谕ㄟ^物理方法將基因?qū)爰毎姆独?；化學介導(dǎo)方法很多，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù)；生物介導(dǎo)方法，有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染，和現(xiàn)在比較多見的各種細菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。理想細胞轉(zhuǎn)染方法，應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高、細胞毒性小等優(yōu)點。細菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)，是目前轉(zhuǎn)染效率較高的方法，同時具有細胞毒性很低的優(yōu)勢。但是，細菌轉(zhuǎn)染方法的準備程序復(fù)雜，常常對細胞類型有很強的選擇性，在一般實驗室中很難普及。珠海正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家現(xiàn)貨