所有的細(xì)胞都能分泌外泌體,但是不同細(xì)胞分泌的外泌體不管在數(shù)量上還是在內(nèi)含物中都具有很大的差異性,這也決定了每種外泌體所行使的功能不一樣。外泌體普遍參與細(xì)胞間物質(zhì)運(yùn)輸與信息傳遞,調(diào)控細(xì)胞生理活動(dòng)。同時(shí),外泌體具有抗原提呈、免疫逃逸、誘導(dǎo)正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化、促進(jìn)一些病癥發(fā)生和轉(zhuǎn)移等作用;此外,外泌體還可以作為“天然的納米粒子”來進(jìn)行藥物遞送。外泌體相關(guān)數(shù)據(jù)庫有哪些?lexoRBase數(shù)據(jù)庫收集和描述人類血液外泌體中所有長的RNA,包括circRNA、lncRNA和mRNA。lEVpedia和Vesiclepedia數(shù)據(jù)庫匯總了不同囊泡研究中發(fā)現(xiàn)的蛋白、mRNA、miRNA、脂類等信息。lExoCarta數(shù)據(jù)庫主要收錄了包括人、大鼠、小鼠、綿羊等幾個(gè)物種的286個(gè)研究結(jié)果,涉及蛋白、mRNA、miRNA、脂類等信息。近幾年來,市場(chǎng)上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒。寧波正規(guī)外泌體提取試劑廠家直銷
外泌體是細(xì)胞間進(jìn)行物質(zhì)運(yùn)輸和信息交流的重要工具,可以通過調(diào)節(jié)免疫功能促進(jìn)一些病癥的增殖,血管新生和一些病癥轉(zhuǎn)移。與細(xì)菌傳染,幫助細(xì)菌逃避免疫關(guān)系很大,并與心血管疾病,老年癡呆等疾病具有密切關(guān)系。外泌體可通過流式、WB(檢測(cè)指標(biāo)有CD9,CD63,CD81)、電鏡觀察、NTA粒徑追蹤等手段檢測(cè),普遍應(yīng)用于藥物載體、疾病診斷marker、精細(xì)醫(yī)療、一些病癥治病等方面研究。由于外泌體直徑小,樣本含量低,提取十分困難。已有的外泌體分離方式有密度梯度離心、超濾離心法、免疫磁珠抗體捕獲、商用試劑盒等。但到目前為止,仍沒有一種提取方法能同時(shí)保證外泌體的含量、純度以及生物活性。天津正規(guī)外泌體提取試劑廠家供應(yīng)由于國內(nèi)有關(guān)外泌體提取試劑的缺乏,我國對(duì)外泌體的研究還基本依賴于過程繁瑣的超速離心和進(jìn)口提取試劑盒。
外泌體提?。撼叽缗抛枭V。尺寸排阻色譜(Size-exclusionchromatography,SEC)是基于大小而非分子量實(shí)現(xiàn)分離大分子。該技術(shù)應(yīng)用填充多孔聚合物微球的柱子,分子根據(jù)其直徑通過微球,半徑小的分子需要更長的時(shí)間才能通過色譜柱的孔隙遷移,而大分子則從色譜柱中更早地洗脫。尺寸排阻色譜可以精確分離大小分子。此外,可以將不同的洗脫溶液應(yīng)用于該方法。與離心方法相比,色譜分離已被證明具有更多優(yōu)勢(shì),因?yàn)橥ㄟ^色譜分離的外泌體不受剪切力的影響,這可能會(huì)改變囊泡的結(jié)構(gòu)。目前,SEC是一種普遍接受的分離血液和尿液中外泌體的技術(shù)。不過,該方法耗時(shí)較長,不適合大量樣本處理。
外泌體的功能取決于其所來源的細(xì)胞類型,其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化、一些病癥侵襲等方方面面。有研究表明一些病癥來源的外泌體參與到一些病癥細(xì)胞與基底細(xì)胞的遺傳信息的交換,從而導(dǎo)致大量新生血管的生成,促進(jìn)了一些病癥的生長與侵襲。功能:當(dāng)外泌體在1980年初次被發(fā)現(xiàn)后,其被認(rèn)為是細(xì)胞排泄廢物的一種方式,如今隨著大量對(duì)其生物來源、其物質(zhì)構(gòu)成及運(yùn)輸、細(xì)胞間信號(hào)的傳導(dǎo)以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能。外泌體提純?cè)噭┖械奶厣c優(yōu)勢(shì):無需蛋白酶處理。
在這項(xiàng)新的研究中,經(jīng)過基因修飾的外泌體(被稱作iExosome)能夠運(yùn)送特異性地靶向KRAS突變基因的小RNA分子,從而導(dǎo)致胰腺病模式小鼠病情緩解,增加它們的總存活率。這些研究人員采用了一種被稱作RNA干擾(RNAi)的靶向方法:利用這些天然的納米顆粒(即外泌體)運(yùn)送小干擾RNA(siRNA)或短發(fā)夾RNA(shRNA)分子來靶向胰腺病細(xì)胞中的KRAS突變基因,從而影響多種胰腺病模型的一些病癥負(fù)荷和存活。他們證實(shí)外泌體能夠作為一種高效的RNAi載體發(fā)揮作用,這是因?yàn)檫@些納米大小的囊泡(即外泌體)輕松地在體內(nèi)遷移和進(jìn)入靶細(xì)胞(包括病細(xì)胞)中。使用可截留100KD分子量的膜,通過離心截留上清中的外泌體,截留完成后。寧波正規(guī)外泌體提取試劑廠家直銷
外泌體提取:差速離心。差速離心仍然是較常見的外泌體分離技術(shù)之一。寧波正規(guī)外泌體提取試劑廠家直銷
外泌體的提取分離:1、超速離心法(差速離心)。超離法是常用的外泌體純化手段,采用低速離心、高速離心交替進(jìn)行(如圖所示),可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡(jiǎn)單,獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎,但過程比較費(fèi)時(shí),且回收率不穩(wěn)定(可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)),純度也受到質(zhì)疑;此外,重復(fù)離心操作還有可能對(duì)囊泡造成損害,從而降低其質(zhì)量。2、密度梯度離心。在超速離心力作用下,使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,是一種區(qū)帶分離法。通過密度梯度離心,樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高,但步驟繁瑣,耗時(shí)。寧波正規(guī)外泌體提取試劑廠家直銷