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來源: 發(fā)布時間:2023-01-31

昆蟲RNA柱式提取試劑盒使用方法:將一半的溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中,12000rmp室溫離心半分鐘,棄穿透液。將剩下的一半溶液轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中,12000rmp室溫離心半分鐘,棄穿透液。加0.7mL通用洗柱液,室溫12000rmp離心半分鐘,棄穿透液。加0.3mL通用洗柱液,室溫12000rmp離心半分鐘,棄穿透液。此步可以省略。室溫12000rmp離心半分鐘。此步十分重要,否則殘留的乙醇會影響RNA的使用。將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到RNase-free收集管中,加入50~100μLRNA洗脫液,室溫放置1~2分鐘。12000rmp室溫離心半分鐘,離心管中溶液即為RNA樣品,可以立即使用或存放于-80℃待用~mRNA是合成蛋白質(zhì)的模板,內(nèi)容按照細(xì)胞核中的DNA所轉(zhuǎn)錄。上海正規(guī)RNA提取試劑廠家推薦

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RNA提取試劑的選擇:選擇合適的提取試劑是較重要的一步。好的提取試劑在確保成功的同時,操作方便且經(jīng)濟(jì)實用。對于動物組織、簡單的植物材料、各種微生物、培養(yǎng)細(xì)胞的totalRNA提取,Takara公司的RNAisoPlus具有諸多的成功案例。隨著2013年7月柱型提取試劑TaKaRaMiniBESTUniversalTotalRNAExtractionKit的成功上市,進(jìn)一步豐富了TakaraRNA提取的產(chǎn)品線。該產(chǎn)品采用了獨特的細(xì)胞裂解系統(tǒng),無需苯酚氯仿抽提等步驟,簡單快捷。組織或細(xì)胞裂解后,提取操作光需20分鐘便可完成。太原正規(guī)RNA提取試劑哪里買所提取的RNA完整性好、純度高,可用于分子生物學(xué)后實驗。

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那RNA到底是什么呢?它又和基因有什么關(guān)系呢?基因的表達(dá).其實人體內(nèi)的RNA主要和基因的表達(dá)有關(guān)系。不知道你思考過這么一個問題沒有,基因是我們體內(nèi)的遺傳物質(zhì),它如何來表達(dá)自己呢?事實上,這個過程是需要用到RNA的。具體來說是這樣的,由于染色體是存在于細(xì)胞核當(dāng)中的,而根據(jù)上述的內(nèi)容,我們知道,基因其實是存在于染色體上的。如果一個基因要表達(dá),只有兩種辦法,一個就是它親自到細(xì)胞核外去完成一切的生命活動,另一個辦法就是找個幫手來完成。而我們的基因選擇的是第二條路徑,也就是找一個幫手,這個幫手就是RNA,更準(zhǔn)確地說是信使RNA(mRNA),基因會通過轉(zhuǎn)錄,利用堿基互補原則,合成一條信使RNA,這個過程都是在細(xì)胞核內(nèi)部完成的。

RNA提取試劑的選擇:對于富含多糖多酚的植物類組織提取是個難點,Takara精心研發(fā)的柱型提取試劑TaKaRaMiniBESTPlantRNAExtractionKit可以輕松解決這個問題。TaKaRaMiniBESTPlantRNAExtractionKit可以高效地從各種簡單的植物組織材料(葉片、莖、幼苗等)、富含多糖多酚的植物組織材料(果實、種子等)、菌類提取高純度的TotalRNA,適用范圍普遍。按照標(biāo)準(zhǔn)流程,本試劑盒可以有效地提取分子量大于200nt的RNA,也可以按照可選步驟提取得到包含SmallRNA(<200nt)的TotalRNA。試劑盒中包含了RNA提取所需的全部試劑,無需額外購買其它試劑。RNA的堿基配對規(guī)則基本和DNA相同,不過除了A-U、G-C配對外,G-U也可以配對。

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Trizol是一種總RNA抽提試劑,內(nèi)含異硫氰酸胍等物質(zhì),能迅速裂解細(xì)胞,壓制細(xì)胞釋放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法進(jìn)行提取組織或細(xì)胞中的RNA。原理:在勻質(zhì)化或溶解樣品中,Trizol試劑可保持RNA的完整性,同時能破壞細(xì)胞及溶解細(xì)胞成分。加入氯仿離心后,裂解液分層成水相和有機(jī)相。RNA存在于水相中。水相轉(zhuǎn)移后,RNA通過異丙醇沉淀回收。移去水相后,用乙醇可從中間相沉淀得到DNA,加入異丙醇沉淀可從有機(jī)相得到蛋白質(zhì)。異硫氰酸胍氯化銫超速離心法:原理:使用蛋白質(zhì)變性劑異硫氰酸胍有效壓制RNA酶的活性,經(jīng)過起始密度為1.78g/ml的氯化銫介質(zhì),進(jìn)行密度梯度超速離心,RNA沉淀于管底,而DNA與蛋白質(zhì)在上清液中。使用這種方法,不但能得到高質(zhì)量的RNA,而且能同時分離出細(xì)胞染色體DNA。RNA提取試劑注意事項:盡量不要對著RNA樣品說話,以防RNA酶污染。唐山正規(guī)RNA提取試劑哪里買

其價格比進(jìn)口試劑盒要便宜許多,且效果還不錯,性價比還可以。上海正規(guī)RNA提取試劑廠家推薦

昆蟲RNA柱式提取試劑盒使用方法:RNA完整性的電泳檢測:如果需要做Northern雜交,強(qiáng)烈建議用戶使用甲醛變性膠進(jìn)行RNA電泳,因為非變性膠不能分離所有的RNA分子。注意:大部分昆蟲的28SRNA被切割成兩個小的片段,彼此用氫鍵相連,所以在甲醛變性膠中,沒有28S帶出現(xiàn)。RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測定:將5~10μLRNA溶于TE緩沖液中(pH7.5~8.2之間)檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度(1OD260的RNA=40μg/mL),進(jìn)而計算出RNA的產(chǎn)量(濃度X體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。RNA純度測定:無污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8~2.1之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān)),高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染,但一般不影響RT-PCR等反應(yīng)。上海正規(guī)RNA提取試劑廠家推薦