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外泌體(exosomes)是活細(xì)胞經(jīng)過(guò)"內(nèi)吞-融合-外排"等一系列調(diào)控過(guò)程而形成的膜性囊泡,來(lái)源于晚期核內(nèi)體(也稱為多囊泡體),直徑約為30-150nm,密度在1.13-1.21g/ml,天然存在于血液、唾液、尿液及母乳等體液中,同時(shí)外泌體也存在于組織和細(xì)胞間隙中。人體中幾乎所有類(lèi)型的細(xì)胞均能產(chǎn)生外泌體,人體中大約有1014個(gè)外泌體,大約平均每個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生1000-10000個(gè)。外泌體中含有核酸(DNA、miRNA、lncRNA、mRNA、tRF等)、蛋白和脂類(lèi),在細(xì)胞間物質(zhì)和信息轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要作用,研究表明其在干細(xì)胞、免疫調(diào)控、瘤轉(zhuǎn)移、血管生成以及生物標(biāo)志物等領(lǐng)域都發(fā)揮著不可替代的作用。這些試劑盒不需要特殊設(shè)備,隨著產(chǎn)品不斷更新?lián)Q代,提取效率和純化效果逐漸提高。南京外泌體提取試劑
外泌體的提取方法學(xué)規(guī)范、統(tǒng)一定量及鑒定等。關(guān)于外泌體的提取有超速離心、試劑盒、超濾法、蔗糖密度梯度離心等,然而各種方法均有其利弊。超速離心法是目前外泌體相關(guān)文章中的主流方法,由于離心步驟繁瑣,費(fèi)事費(fèi)力,而且步驟多導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)中容易污染,且損耗量大,使得較終回收的外泌體不穩(wěn)定。而且對(duì)于抽提細(xì)胞上清來(lái)說(shuō),更是極為不請(qǐng)便,試想用提取300ml的上清需要6個(gè)50ml離心管,無(wú)論是過(guò)濾還是后續(xù)的每一步的離心去沉淀,都具有操作極其不便的缺點(diǎn),總之非常麻煩。而超濾法存在外泌體會(huì)堵塞膜孔,造成濃縮效率低,濃縮管重復(fù)利用差,甚至堵塞在膜孔的外泌體還可能會(huì)粘連成團(tuán),造成損失及較后的數(shù)據(jù)有誤差,對(duì)于后續(xù)實(shí)驗(yàn)也有影響廣州正規(guī)外泌體提取試劑哪里買(mǎi)如純度和回收率低,雜蛋白較多(假陽(yáng)性),顆粒大小不均一,產(chǎn)生難以去除的聚合物。
所有的細(xì)胞都能分泌外泌體,但是不同細(xì)胞分泌的外泌體不管在數(shù)量上還是在內(nèi)含物中都具有很大的差異性,這也決定了每種外泌體所行使的功能不一樣。外泌體普遍參與細(xì)胞間物質(zhì)運(yùn)輸與信息傳遞,調(diào)控細(xì)胞生理活動(dòng)。同時(shí),外泌體具有抗原提呈、免疫逃逸、誘導(dǎo)正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化、促進(jìn)一些病癥發(fā)生和轉(zhuǎn)移等作用;此外,外泌體還可以作為“天然的納米粒子”來(lái)進(jìn)行藥物遞送。外泌體相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)有哪些?lexoRBase數(shù)據(jù)庫(kù)收集和描述人類(lèi)血液外泌體中所有長(zhǎng)的RNA,包括circRNA、lncRNA和mRNA。lEVpedia和Vesiclepedia數(shù)據(jù)庫(kù)匯總了不同囊泡研究中發(fā)現(xiàn)的蛋白、mRNA、miRNA、脂類(lèi)等信息。lExoCarta數(shù)據(jù)庫(kù)主要收錄了包括人、大鼠、小鼠、綿羊等幾個(gè)物種的286個(gè)研究結(jié)果,涉及蛋白、mRNA、miRNA、脂類(lèi)等信息。
外泌體的提取、分離方法:尺寸排阻色譜法和超濾法;尺寸排阻色譜法是利用分子篩理論,較初是根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小分離蛋白質(zhì)的色譜技術(shù)。該方法的主要優(yōu)點(diǎn)是不需要很大的離心力,從而保證了外泌體的完整性。Mol等[13]對(duì)比超高速離心和尺寸排阻色譜法得到的外泌體蛋白,結(jié)果顯示,后者得到的外泌體的蛋白豐度高于前者。這些基于過(guò)濾或尺寸排阻色譜的新方法為外泌體大規(guī)模的生產(chǎn)和臨床應(yīng)用提供了可能。超濾也是根據(jù)外泌體的尺寸將其分離出來(lái)的一種方法,超濾一般被認(rèn)為是外泌體分離過(guò)程中的一個(gè)準(zhǔn)備過(guò)程,通過(guò)超濾除去大分子和小分子的蛋白質(zhì)。不過(guò)連續(xù)的超濾可以分離出外泌體,和超高速離心相比,超濾不需要特殊的設(shè)備就可以較短時(shí)間內(nèi)分離出外泌體。但是,超濾膜對(duì)外泌體的黏附作用會(huì)降低外泌體的產(chǎn)量,并且超濾過(guò)程中施加的外力可能會(huì)使外泌體變形或者破裂。首先在無(wú)菌條件下提取人體體液,并用PBS緩沖液進(jìn)行稀釋。
外泌體與肺病預(yù)后:在當(dāng)代精細(xì)醫(yī)療的大趨勢(shì)下,外泌體的發(fā)現(xiàn)和研究為肺病的早期診斷和治病提供了嶄新的方向。外泌體在液體活檢中的巨大潛力可以為肺病患者的早期發(fā)現(xiàn)和早期診療提供可靠依據(jù)。根據(jù)一些病癥來(lái)源的外泌體在肺病的發(fā)生的發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中的作用及相關(guān)機(jī)制的研究,臨床醫(yī)療人員可以針對(duì)不同的患者制定較合適的治病方案,以達(dá)到改善肺病患者生存率,延長(zhǎng)肺病患者生存時(shí)間的目的。但是,針對(duì)外泌體的研究還存在諸多的問(wèn)題有待廣大研究者解決,如:外泌體的純化及標(biāo)記方法、如何尋找外泌體的靶基因、外泌體的作用機(jī)制及信號(hào)通路等。總而言之,外泌體的研究有著廣闊的前景,基于外泌體與肺病的研究,有望研發(fā)出能夠應(yīng)用于肺病臨床診斷和治病的有效措施,造福更多的患者。通過(guò)超速離心(120000g/分鐘)20小時(shí)以上才能獲得足夠的外泌體量。濟(jì)南外泌體提取試劑價(jià)格
外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物質(zhì)。南京外泌體提取試劑
外泌體在肺病進(jìn)程中的作用:在一些病癥微環(huán)境中,一些病癥細(xì)胞來(lái)源的外泌體能夠誘導(dǎo)CD4+T分化為調(diào)節(jié)性T細(xì)胞,壓制機(jī)體的抗一些病癥免疫反應(yīng);肺病細(xì)胞分泌的外泌體含有miR-21和miR-29a,可在免疫細(xì)胞中結(jié)合并啟動(dòng)TLR8,使TLR介導(dǎo)的NF-κB信號(hào)通路活化,從而導(dǎo)致一些病癥的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。在肺病的侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程中,細(xì)胞間通訊扮演著重要的角色。據(jù)有關(guān)報(bào)道稱,NSCLC分泌的外泌體內(nèi)TGFβ和IL10的高表達(dá)與肺病的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。此外,啟動(dòng)的T細(xì)胞可以通過(guò)調(diào)控Fas信號(hào)通路增加基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP9)的表達(dá),進(jìn)而促進(jìn)肺病的轉(zhuǎn)移。這些機(jī)制有望成為肺病治病的潛在靶點(diǎn)。雖然大多數(shù)外泌體都是促進(jìn)一些病癥的侵襲與轉(zhuǎn)移,但也有報(bào)道稱,外泌體miR-302b可以通過(guò)壓制TGFβRⅡ來(lái)壓制肺病細(xì)胞的轉(zhuǎn)移與增殖。如純度和回收率低,雜蛋白較多(假陽(yáng)性),顆粒大小不均一,產(chǎn)生難以去除的聚合物。南京外泌體提取試劑