那RNA到底是什么呢?它又和基因有什么關(guān)系呢?基因的表達(dá).其實(shí)人體內(nèi)的RNA主要和基因的表達(dá)有關(guān)系。不知道你思考過(guò)這么一個(gè)問(wèn)題沒(méi)有,基因是我們體內(nèi)的遺傳物質(zhì),它如何來(lái)表達(dá)自己呢?事實(shí)上,這個(gè)過(guò)程是需要用到RNA的。具體來(lái)說(shuō)是這樣的,由于染色體是存在于細(xì)胞核當(dāng)中的,而根據(jù)上述的內(nèi)容,我們知道,基因其實(shí)是存在于染色體上的。如果一個(gè)基因要表達(dá),只有兩種辦法,一個(gè)就是它親自到細(xì)胞核外去完成一切的生命活動(dòng),另一個(gè)辦法就是找個(gè)幫手來(lái)完成。而我們的基因選擇的是第二條路徑,也就是找一個(gè)幫手,這個(gè)幫手就是RNA,更準(zhǔn)確地說(shuō)是信使RNA(mRNA),基因會(huì)通過(guò)轉(zhuǎn)錄,利用堿基互補(bǔ)原則,合成一條信使RNA,這個(gè)過(guò)程都是在細(xì)胞核內(nèi)部完成的。血漿/血清RNA提取試劑盒:該試劑盒中的裂解液P1及柱結(jié)合液P2具有高效裂解及提取效果。寧波正規(guī)RNA提取試劑廠家
細(xì)胞外RNA(exRNA)已成為研究界的新寵。近年來(lái),人們?cè)谘獫{或血清樣本中成功檢測(cè)到疾病相關(guān)的exRNA,使其有望成為非侵入性的生物標(biāo)志物。然而,從血漿或血清中分離exRNA仍頗具挑戰(zhàn)性,這一方面是因?yàn)閑xRNA豐度低,另一方面是因?yàn)檠褐械奈廴疚飼?huì)壓制PCR。商品化的試劑盒能簡(jiǎn)化和加速exRNA提取過(guò)程,已成為循環(huán)exRNA研究不可缺少的工具。然而,這些試劑盒的提取效率如何,是否能去除血漿中的污染物,是否會(huì)偏向特定的RNA,都沒(méi)有經(jīng)過(guò)評(píng)估,而這類評(píng)估對(duì)于結(jié)果解釋和實(shí)驗(yàn)之間的比較都很關(guān)鍵。合肥昆明RNA提取試劑拭子RNA提取試劑的選擇?洗脫液洗脫能力好,核酸的提取得率就高。
常用總RNA提取試劑:異硫氰酸胍法和Trizol法是動(dòng)物組織及動(dòng)物細(xì)胞總RNA提取較常用的方法,異硫氰酸胍法操作簡(jiǎn)單快捷,適用于樣本足夠大的常規(guī)動(dòng)物組織;Trizol法裂解能力較強(qiáng),尤其適合小樣本及特別難提取的組織,如兔子皮膚,動(dòng)物結(jié)締組織等總RNA的提??;另外Trizol作為一種通用型的裂解試劑,還可以用于植物組織、細(xì)菌、菌類等組織的提取。對(duì)于含多糖多酚的植物組織如油茶、茶葉、油菜等還可以使用CTAB法進(jìn)行總RNA的提取。提取RNA時(shí)我們經(jīng)常遇到的問(wèn)題是:(1)RNA產(chǎn)量較低;(2)RNA有嚴(yán)重的鹽類污染;(3)RNA有嚴(yán)重的有機(jī)溶劑污染;(4)樣品降解等問(wèn)題。
miRNA是一類內(nèi)源性的約22個(gè)核苷酸的非編碼RNA分子,可參與轉(zhuǎn)錄后的基因調(diào)控。在細(xì)胞的分化和發(fā)育,細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和對(duì)傳染的應(yīng)答等生物學(xué)過(guò)程中,miRNA發(fā)揮了重要作用。成熟的miRNA主要通過(guò)翻譯壓制來(lái)調(diào)控內(nèi)源性基因的表達(dá)。miRNA的應(yīng)用有miRNA模擬物和壓制劑。miRNA模擬物是化學(xué)合成的雙鏈RNA分子,通過(guò)傳染到細(xì)胞中,模擬成熟的內(nèi)源性miRNA分子;miRNA壓制劑是單鏈經(jīng)過(guò)修飾的RNA分子,通過(guò)傳染到細(xì)胞中,特異性的壓制miRNA的功能。miRNA模擬物和壓制劑可以用于研究單個(gè)miRNA錯(cuò)誤調(diào)節(jié)所造成的生物學(xué)影響,也能用于確定某個(gè)miRNA分子的特異性靶標(biāo)基因。同時(shí)有研究發(fā)現(xiàn)miR-143可調(diào)控KRAS原病基因,為病癥的醫(yī)治提供了新的靶點(diǎn)和醫(yī)治方法。細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核RNA提取試劑盒特點(diǎn):細(xì)胞質(zhì)RNA不含DNA,直接用于RT-PCR/qRT-PCR。
RNA提取試劑注意事項(xiàng):1、必須戴一次性手套操作,且盡量不要對(duì)著RNA樣品說(shuō)話,以防RNA酶污染。建議戴一次性口罩操作。2、TRIReagent含有毒物質(zhì)苯酚,避免接觸皮膚或吸入。為防止濺入眼睛,請(qǐng)戴防護(hù)眼鏡或使用透明保護(hù)屏。如皮膚接觸TRIReagent,請(qǐng)立即用大量去垢劑和水沖洗,如仍有不適,請(qǐng)聽取醫(yī)生意見。3、TRIReagent抽提總RNA的同時(shí),理論上也可抽提蛋白和DNA,但未經(jīng)測(cè)試。4、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。是基于異硫氰酸胍/苯酚法的一種即用的從細(xì)胞和組織中提取總RNA的試劑,在樣品裂解或勻漿過(guò)程中取出水相,用異丙醇可沉淀回收RNA;中間層用乙醇沉淀可回收DNA;有機(jī)相用異丙醇沉淀可回收蛋白。好的試劑盒價(jià)格比較貴,在實(shí)驗(yàn)室可以根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要來(lái)定奪試劑盒的使用。成都RNA提取試劑廠家推薦
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細(xì)胞RNA提取的方法:實(shí)驗(yàn)提取步驟:標(biāo)準(zhǔn)Trizol提取步驟為液氮研磨--加入Trizol裂解--加入氯仿抽提--離心--加入氯丙醇沉淀--離心--酒精洗滌--離心。將細(xì)胞培養(yǎng)皿置于冰上,加入Trizol裂解5-10分鐘,用泵頭輕輕吹打后吸取液體放入進(jìn)口EP管中。加入1/5體積的氯仿,上下混勻液體,4度靜置10-15分鐘。(氯仿為有機(jī)溶劑,有效的使有機(jī)相和無(wú)機(jī)相迅速分離。有機(jī)相中主要是酚和蛋白結(jié)合,從而使得蛋白和RNA脫離,RNA進(jìn)入水相)。4度離心15分鐘,一定注意選擇低溫離心。離心后分成三層,RNA在上清里,從離心機(jī)輕輕拿出EP管,以免管內(nèi)物質(zhì)震蕩導(dǎo)致下層沉淀激起。吸取上清的時(shí)候一定要?jiǎng)幼鬏p柔,切忌吸取太多,一般吸到400-500ul,避免吸到下層沉淀,將液體置于新的EP管中。加入等體積異丙醇,4度靜置10min,然后12000rpm離心10min。寧波正規(guī)RNA提取試劑廠家
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