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來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2023-03-08

RNA提取注意事項(xiàng):1、組織樣本要盡可能的新鮮,避免反復(fù)凍融。2、提取時(shí)組織要充分研磨,組織量不宜過(guò)少,更不宜過(guò)多。3、加入裂解液后應(yīng)給予充分的孵育時(shí)間,使樣本充分裂解。4、在用Trizol法提取時(shí),分層后吸取上清的原則是“寧愿少吸,不能多吸”,千萬(wàn)不能提取到中間層,否則會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的基因組DNA污染。5、洗滌時(shí)洗滌液應(yīng)充分浸潤(rùn)到管壁的四周,確保洗滌徹底。6、柱式提取法,洗滌完后除了對(duì)柱子進(jìn)行空離后,還應(yīng)當(dāng)將吸附柱置于超凈臺(tái)內(nèi)吹風(fēng)5~10min,使有機(jī)溶劑充分揮發(fā)干。7、柱式法較后洗脫時(shí)候,當(dāng)加入DEPC水后還應(yīng)孵育3~5min,或者提前將DEPC水加熱至60℃,可提高洗脫得率。傳統(tǒng)的Trizol裂解異丙醇沉淀法較后RNA是用DEPC水溶解沉淀,則應(yīng)當(dāng)給予適當(dāng)溶解時(shí)間,并用泵頭不斷吹吸離心管底部。用于各種植物、動(dòng)物、微生物的RNA提取,在每個(gè)試劑盒里都有一份說(shuō)明使用說(shuō)明書(shū)。開(kāi)封正規(guī)RNA提取試劑報(bào)價(jià)

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與DNA不同,RNA一般為單鏈長(zhǎng)分子,很多RNA也需要通過(guò)堿基配對(duì)原則形成一定的二級(jí)結(jié)構(gòu)乃至三級(jí)結(jié)構(gòu)來(lái)行使生物學(xué)功能。RNA是以DNA的一條鏈為模板,以堿基互補(bǔ)配對(duì)原則,轉(zhuǎn)錄而形成的一條單鏈,主要功能是實(shí)現(xiàn)遺傳信息在蛋白質(zhì)上的表達(dá),是遺傳信息向表型轉(zhuǎn)化過(guò)程中的橋梁。在此過(guò)程中,轉(zhuǎn)運(yùn)RNA是攜帶與三聯(lián)體密碼子對(duì)應(yīng)的氨基酸殘基與正在進(jìn)行翻譯的mRNA結(jié)合,而后核糖體RNA將各個(gè)氨基酸殘基通過(guò)肽鍵連接成肽鏈進(jìn)而構(gòu)成蛋白質(zhì)分子。有些生物,例如一些病菌,也直接使用RNA作為遺傳信息的載體,而不是DNA。鄭州RNA提取試劑哪家便宜在勻質(zhì)化或溶解樣品中,Trizol試劑可保持RNA的完整性,同時(shí)能破壞細(xì)胞及溶解細(xì)胞成分。

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RNA提取醇沉淀不是越多就越好。有些實(shí)驗(yàn)方案會(huì)推薦,在異丙醇沉淀后,用乙醇沉淀兩次。實(shí)際上,任何提取實(shí)驗(yàn),都會(huì)在純度和得率這一對(duì)矛盾中取舍。醇沉淀會(huì)將脂溶性雜質(zhì)去掉,但部分非脂溶性的雜質(zhì)依然會(huì)連同RNA一起被沉淀下來(lái)。因此,多整幾次,并不會(huì)讓RNA的純度翻倍,反而還會(huì)有降低得率的風(fēng)險(xiǎn)。一般情況下,異丙醇和乙醇各沉淀一次即可。但是,倘若預(yù)計(jì)RNA濃度很低,那就只能放棄純度,在低溫沉淀數(shù)小時(shí),以換來(lái)較高的得率。圍繞DEPC的玄學(xué)。許多實(shí)驗(yàn)方案會(huì)推薦使用0.1%DEPC處理RNA相關(guān)用水,以滅活RNase。這一點(diǎn)是要肯定的。不過(guò),在使用DEPC的過(guò)程中,又充斥著一些玄學(xué)。高壓滅菌后的DEPC水,會(huì)有一股“香甜”的味道。許多人會(huì)以為那是殘留的DEPC而不敢用。實(shí)際上,這只是DEPC分解成CO2和乙醇后,產(chǎn)生的一些揮發(fā)性酯類副產(chǎn)物。

提取RNA的詳細(xì)步驟:首先,將研缽晾干夠,倒入1/3體積的液氮,加入0.2g均質(zhì)的植物材料,充分研磨后轉(zhuǎn)入一個(gè)含有300微升GMT的1.5ml的離心管中,搖勻。然后,加入30微升2mol/lNaAc進(jìn)行搖勻,加入300微升酸酚搖勻,加入100微升的氯仿?lián)u勻。然后,在四攝氏度12000r/min下離心二十分鐘,吸取上清液的3/4,加入等體積的異丙醇,于冰上放置十五分鐘。然后,在四攝氏度12000r/min下離心十分鐘,將沉淀懸浮于含100微升的4mol/lLiCl小試管中,于-20攝氏度下放置過(guò)夜。然后,在4攝氏度13000r/min下離心10-15min,將沉淀溶于0.4mlDEPC處理水中,加入1/2體積氯仿和1/2體積酸酚,搖勻,進(jìn)行抽提,在4攝氏度13000r/min下離心五分鐘。將上清液中加入等體積的氯仿?lián)u勻,進(jìn)行抽提,在四攝氏度13000r/min下離心五分鐘,上清液中加入1/10體積3mol/lNaAc和兩倍體積的午睡乙醇與-20攝氏度放置一小時(shí)。為了提高裂解效果,可以將裂解緩沖液與機(jī)械裂解步驟(研磨珠破碎)匹配。

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酵母總RNA快速提取試劑盒(離心柱型):一、原理簡(jiǎn)介。改進(jìn)的異硫氰酸胍/酚一步法裂解細(xì)胞和滅活RNA酶,然后總RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜,再通過(guò)一系列快速的漂洗-離心的步驟,去蛋白液和漂洗液將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除,較后低鹽的RNasefreewater將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。二、試劑盒特點(diǎn):1、離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界有名公司特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復(fù)性好。克服了國(guó)產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。2、結(jié)合了異硫氰酸胍/酚一步法試劑穩(wěn)定性好,純度高和離心柱方便快捷的優(yōu)點(diǎn),不需要異丙醇沉淀和乙醇洗滌過(guò)程,RNA可以直接從離心柱上洗脫避免了過(guò)度干燥不易溶解問(wèn)題。3、獨(dú)有的RL裂解液配方,可以有效的消除基因組污染。4、多次漂洗去蛋白過(guò)程,提取RNA純度更高。5、有效的去除了無(wú)用的5S在總RNA中含量,提高了純度。RNA提取試劑:在破碎和溶解細(xì)胞時(shí)能保持RNA的完整性。徐州RNA提取試劑直銷價(jià)

RNA提取試劑注意事項(xiàng):建議戴一次性口罩操作。開(kāi)封正規(guī)RNA提取試劑報(bào)價(jià)

RNA提?。侯A(yù)備工作(1)塑料制品:盡量使用一次性無(wú)菌塑料制品。已標(biāo)明RNase-free的塑料制品,如沒(méi)有開(kāi)封使用過(guò),通常不必再處理。處理的步驟如下:O在玻璃燒杯中注入去離子水,加入DEPC使其終濃度為0.05%~0.1%(DEPC-H2O)。(DEPC二乙基焦碳酸酯為活性很強(qiáng)的劇毒物,須在通風(fēng)櫥中小心使用)O將待處理的塑料制品放入一個(gè)可以高溫滅菌的容器中,注入DEPC-H2O,使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中,在通風(fēng)柜中37℃或室溫下處理過(guò)夜。O將DEPC-H2O小心倒入廢液瓶中,將裝有DEPC-H2O處理過(guò)的塑料制品的容器以鋁箔封口,高溫高壓蒸汽滅菌至少30分鐘。O滅菌塑料制品烘烤干燥,置潔凈處備用。(2)玻璃和金屬物品250℃烘烤3小時(shí)以上。開(kāi)封正規(guī)RNA提取試劑報(bào)價(jià)

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