膠原蛋白的提取方法：酸法提?。核岱ㄌ崛≈饕捎玫碗x子濃度酸性條件浸漬處理原料，從而破壞分子間的鹽鍵和希夫堿，而引起纖維膨脹、溶解。作為溶劑使用的酸，主要有鹽酸或亞硫酸、磷酸、硫酸、醋酸、檸檬酸和甲酸等。酸法是提取膠原蛋白比較常用和有效的方法，用酸法提取的膠原較大程度地保持了其三股螺旋結(jié)構(gòu)。此法處理快速，所得產(chǎn)品的分子量是連續(xù)的，適用于醫(yī)用生物材料及原料的制備，但產(chǎn)品得率低，設(shè)備腐蝕嚴重，污染重。趙蒼碧等[2]采用0.3 %的醋酸溶液在4 ℃下從牛腱中提取膠原蛋白，得到高純度的膠原蛋白溶液?？芍苯踊蜷g接參與細胞的附著。溫州鼠尾膠原銷售廠家

鼠尾膠原蛋白I型，用那一種膠原酶可以溶解：1．將膠原加入到0.1M 的醋酸中，制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解。2．建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動或攪拌。在2-8度中放置過夜。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會導致丟失蛋白。3．稀釋一定數(shù)量的膠原溶液。 4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時或者2-8度過夜。5．從包被表面除去多余的液體。過夜干燥。如果膠原溶液不是無菌的，這時候可以在無菌細胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒。 在接種細胞前用無菌的水漂洗。唐山正規(guī)鼠尾膠原廠家直銷制備鼠尾膠原：吸取上清，分裝成小瓶，4℃保存。

膠原蛋白（Collagen）是結(jié)締組織和內(nèi)臟部位外基質(zhì)的主要成分，但在皮膚、肌腱、骨骼中分布*為普遍。膠原蛋白在結(jié)構(gòu)和遺傳學上被分為不同類型，I型膠原蛋白（Collagen, Type I）結(jié)構(gòu)上是由2個α1鏈和1個α2鏈組成的異源多聚體，在37℃中性條件下可形成3股螺旋結(jié)構(gòu)，被普遍用于多種細胞的培養(yǎng)基質(zhì)，如肝細胞、纖維細胞、脊髓神經(jīng)節(jié)、雪旺氏細胞等。另外，I型膠原蛋白在細胞生長、分化、遷移和組織態(tài)的發(fā)生等方面也具有重要應(yīng)用。注意事項：1） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。2） 整個操作請于冰上進行，因室溫下鼠尾膠原I可迅速成膠。3） 整個操作請在無菌環(huán)境下無菌操作，避免污染以影響細胞生長。

膠原的立體結(jié)構(gòu)與一般的球狀蛋白質(zhì)完全不同，每一條亞基形成一股左手旋轉(zhuǎn)的螺旋，其中每 3個氨基酸殘基形成一圈螺旋。3 條左手螺旋再扭在一起形成一個右手大螺旋。這樣的螺旋稱為 3股螺旋。小的甘氨酸殘基位于3股螺旋內(nèi)部。3股螺旋式的棒狀膠原分子的大小約是3000×15埃，這些棒狀分子首尾相連，并側(cè)向排列形成膠原微絲（其直徑可從50埃至數(shù)千埃）。膠原分子在兩端及沿軸向每隔 680埃的距離存在極性區(qū)，這些極性區(qū)能和重金屬離子結(jié)合，使膠原纖維在電子顯微鏡下形成間距為680埃的明暗相間的特征性的橫紋結(jié)構(gòu)。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便，成本低廉。將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中，制備成濃度為0.1%的溶液。

膠原蛋白分離提純實驗方案：提取鼠尾膠原蛋白的實驗步驟： 1、使用溶解有一定比例胃蛋白酶的酸溶液對初步處理的鼠尾腱進行 酶解， 持續(xù)一段時間待混合物變成無色、 透明、 粘稠液體后即可在 4℃， 5000g 的離心力下離心 20min， 收集上清即為粗制鼠尾膠原蛋白原液。 2、將一定濃度的氯化鈉溶液加入其中，持續(xù)攪拌直至白色絮狀沉淀 從溶液中析出，繼續(xù)加入氯化銨直至沉淀不在析出為止，4℃，5000g 的離心力下離心 20min 后獲得白色沉淀。 沉淀物加入一定濃度的醋酸 溶液中溶解。 3、將溶解后的鼠尾膠原蛋白溶液繼續(xù)反復進行鹽析處理，重復步驟 2 的過程 2~4 次。 _x000c_鼠尾膠原蛋白經(jīng) SDS- PAGE 蛋白質(zhì)電泳。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便，成本低廉。鼠尾膠原醋酸溶解：在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液。南京貴陽鼠尾膠原

鼠尾膠原醋酸溶解：在2-8度中放置過夜。溫州鼠尾膠原銷售廠家

鼠尾膠原在心肌細胞氧化損傷中的保護作用：膠原蛋白具有抗氧化作用，但既往在實驗室主要將鼠尾膠原用于促進細胞貼壁和支架構(gòu)建，對于其抗氧化作用目前尚無相關(guān)研究。目的：探討鼠尾膠原對過氧化氫導致離體心肌細胞氧化損傷的保護作用。方法：將原代培養(yǎng)的SD大鼠乳鼠心肌細胞隨機接種到鋪有鼠尾膠原的培養(yǎng)皿（實驗組）和普通培養(yǎng)皿（對照組）中，并且均用0，10，100μmol/L H2O2誘導。24 h后，以電子顯微鏡觀察各組乳鼠心肌細胞的形態(tài)，應(yīng)用MTT 比色法檢測心肌細胞存活率，TUNEL 法檢測心肌細胞凋亡形態(tài)，流式細胞技術(shù)檢測心肌細胞凋亡率，黃嘌呤氧化酶法檢測超氧化物歧化酶活力，硫代巴比妥比色法檢測丙二醛水平，Western-Blot 檢測凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表達。溫州鼠尾膠原銷售廠家