如果您正在或者準(zhǔn)備或者計(jì)劃開(kāi)展外泌體研究，歡迎加入我們的外泌體小課堂。首先，來(lái)個(gè)自我介紹：(實(shí)物照)品牌背景FUJIFILMWako前身為和光純藥株式會(huì)社，企業(yè)，也是全球前列的試劑供應(yīng)商，在歐美都設(shè)有分公司。自成立以來(lái)一直致力于的試劑生產(chǎn)與開(kāi)發(fā)，并獲得ISO9001、ISO/IEC17025、ISO14000等多項(xiàng)國(guó)際認(rèn)證。2017年被大佬FUJIFILMGroup（富士膠片集團(tuán)）斥收購(gòu)（你沒(méi)看錯(cuò)，就是做相機(jī)、膠卷的那個(gè)富士），更名為富士フイルム和光純薬株式會(huì)社（FUJIFILMWako）。外泌體提取試劑盒是FUJIFILMWako的明星產(chǎn)品哦，有關(guān)外泌體、如何成功獲取高質(zhì)量的外泌體等問(wèn)題，請(qǐng)跟隨勤學(xué)好問(wèn)的小和同學(xué)一起進(jìn)入外泌體小課堂，學(xué)識(shí)淵博的將一一為您解答。外泌體提取：高速離心以消除更大的囊泡。溫州外泌體提取試劑廠家

具體步驟是:以下所有步驟都在4℃下進(jìn)行，1、300×g10min，棄沉淀，去除細(xì)胞2、2000×g20min，棄沉淀，去除死細(xì)胞3、10,000×g30min，棄沉淀，去除細(xì)胞碎片等亞細(xì)胞成分4、10,000×g70min，棄上清，沉淀即為外泌體5、PBS（每10ml細(xì)胞培養(yǎng)液用30mlPBS重懸）清洗沉淀物，混勻，10,000×g70min6、lmlPBS溶解沉淀（外泌體），立即使用或置于-80℃?zhèn)溆谩?、一般超速離心法會(huì)結(jié)合密度梯度離心，這樣得到的外泌體更純，具體做法第4步后蔗糖梯度離心，10,000×g70min，以去除密度大于1.21g/ml的顆粒。優(yōu)點(diǎn)是：成本低，操作簡(jiǎn)單，獲得的囊泡數(shù)較多。缺點(diǎn)是：耗時(shí)耗力（需用時(shí)8-30h，并且每次只能處理6個(gè)樣本），獲得的外泌體純度不是很高，高速及重復(fù)離心也會(huì)對(duì)外泌體產(chǎn)生很大的傷害，并且不適用于如血漿和血清等粘性液體生物樣本。合肥外泌體提取試劑直銷(xiāo)廠家利用PEG沉淀外泌體存在不少問(wèn)題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多。

外泌體提?。?、過(guò)濾。超濾膜也可用于分離外泌體。根據(jù)外泌體的大小，從蛋白質(zhì)和其他大分子中分離外泌體。較常見(jiàn)的過(guò)濾膜具有0.8μm、0.45μm或0.22μm的孔徑，可用于收集大于800nm、400nm或200nm的外泌體，也有設(shè)計(jì)成微柱多孔硅纖毛結(jié)構(gòu)以分離40-100nm外泌體：不過(guò)，該方法由于過(guò)濾膜的粘附，可能會(huì)損失外泌體，并且過(guò)濾時(shí)的壓力和剪切力，可能會(huì)使外泌體變形受損。2、基于聚合物的沉淀技術(shù)?；诰酆衔锏某恋砑夹g(shù)通常包括將樣本與含聚合物的沉淀溶液混合，在4℃溫育并低速離心。用于聚合物沉淀的較常見(jiàn)聚合物之一是聚乙二醇（PEG）。用這種聚合物沉淀具有許多優(yōu)點(diǎn)，包括對(duì)分離的外泌體影響小、pH中性等。目前大多數(shù)快速分離外泌體的商品化試劑盒都是基于此方法。然而基于聚合物的沉淀方法可能會(huì)同時(shí)分離非囊泡污染物（包括脂蛋白）而且，聚合物材料的混雜可能會(huì)影響下游分析

外泌體是一種存在于細(xì)胞外的多囊泡體，可通過(guò)細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成多泡內(nèi)涵體，內(nèi)涵體與細(xì)胞膜融合后釋放其中的小囊泡。外泌體的直徑在40-110nm之間，其中包含RNA、蛋白質(zhì)、microRNA、DN段等多種物質(zhì)，存在于血液、唾液、尿液、腦脊液和母乳等多種體液中。外泌體從發(fā)現(xiàn)至今已有30多年的歷史，雖然較初被認(rèn)為可能是細(xì)胞的“垃圾”，所以才被排出來(lái)，但是近年來(lái)研究表明外泌體具有功能活性并可進(jìn)行細(xì)胞間信息傳遞。如今，研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)外泌體在抗原提呈細(xì)胞中呈遞抗原程中、一些病癥細(xì)胞發(fā)生的發(fā)展、神經(jīng)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中都發(fā)揮著重要作用。外泌體提?。焊咚匐x心沉淀外泌體。

外泌體（Exosome）是細(xì)胞主動(dòng)分泌的囊泡樣小體，大小均一，直徑30-200nm，密度1.10-1.18g/ml，來(lái)源普遍，幾乎所有細(xì)胞都可分泌，在血液，尿液，唾液，腦脊液，腹水，乳汁等體液中普遍分布。外泌體較早在1986年發(fā)現(xiàn)于培養(yǎng)的綿羊紅細(xì)胞上清液中。1996年，研究者發(fā)現(xiàn)外泌體作為抗原呈遞因子參與T細(xì)胞依賴(lài)的抗一些病癥反應(yīng)，開(kāi)啟了外泌體蛋白研究的新天地。2013年諾貝爾生物/醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)解答了細(xì)胞如何組織其內(nèi)部較重要的運(yùn)輸系統(tǒng)之一——囊泡傳輸系統(tǒng)的奧秘。利用不同截留相對(duì)分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對(duì)樣品進(jìn)行選擇性分離，便可獲得外泌體。太原外泌體提取試劑廠家供應(yīng)

外泌體作為內(nèi)源性的天然藥物載體有著獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，表面由脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成。溫州外泌體提取試劑廠家

外泌體提?。撼叽缗抛枭V。尺寸排阻色譜（Size-exclusionchromatography，SEC）是基于大小而非分子量實(shí)現(xiàn)分離大分子。該技術(shù)應(yīng)用填充多孔聚合物微球的柱子，分子根據(jù)其直徑通過(guò)微球，半徑小的分子需要更長(zhǎng)的時(shí)間才能通過(guò)色譜柱的孔隙遷移，而大分子則從色譜柱中更早地洗脫。尺寸排阻色譜可以精確分離大小分子。此外，可以將不同的洗脫溶液應(yīng)用于該方法。與離心方法相比，色譜分離已被證明具有更多優(yōu)勢(shì)，因?yàn)橥ㄟ^(guò)色譜分離的外泌體不受剪切力的影響，這可能會(huì)改變囊泡的結(jié)構(gòu)。目前，SEC是一種普遍接受的分離血液和尿液中外泌體的技術(shù)。不過(guò)，該方法耗時(shí)較長(zhǎng)，不適合大量樣本處理溫州外泌體提取試劑廠家

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