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來源: 發(fā)布時(shí)間:2023-08-30

外泌體的提取方法學(xué)規(guī)范、統(tǒng)一定量及鑒定等。關(guān)于外泌體的提取有超速離心、試劑盒、超濾法、蔗糖密度梯度離心等,然而各種方法均有其利弊。超速離心法是目前外泌體相關(guān)文章中的主流方法,由于離心步驟繁瑣,費(fèi)事費(fèi)力,而且步驟多導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)中容易污染,且損耗量大,使得較終回收的外泌體不穩(wěn)定。而且對于抽提細(xì)胞上清來說,更是極為不請便,試想用提取300ml的上清需要6個(gè)50ml離心管,無論是過濾還是后續(xù)的每一步的離心去沉淀,都具有操作極其不便的缺點(diǎn),總之非常麻煩。而超濾法存在外泌體會(huì)堵塞膜孔,造成濃縮效率低,濃縮管重復(fù)利用差,甚至堵塞在膜孔的外泌體還可能會(huì)粘連成團(tuán),造成損失及較后的數(shù)據(jù)有誤差,對于后續(xù)實(shí)驗(yàn)也有影響。外泌體提純試劑盒的特色與優(yōu)勢:適用于多種物種。天津正規(guī)外泌體提取試劑廠家直銷

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外泌體相關(guān)miRNA與肺病的診斷:miRNAs是一類含有20~25個(gè)核苷酸的非編碼小RNA,能夠通過下調(diào)或壓制靶mRNAs來調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄水平上的基因表達(dá),目前非編碼RNA被普遍發(fā)現(xiàn)存在于NSCLC患者外泌體中,參與一些病癥的形成和演化過程。單個(gè)miRNA可能通過壓制性復(fù)合物與多個(gè)mRNA結(jié)合,從而阻滯整個(gè)生物通路。因此,外泌體的miRNA具有成為NSCLC標(biāo)志物的優(yōu)勢。Chen等在152例肺病患者的研究中初次報(bào)道了循環(huán)游離miRNA的表達(dá),與75例健康者相比,發(fā)現(xiàn)了兩種高表達(dá)的miRNA(miR-25和miR-223)。Rabinonowits等對27例肺病患者和9例健康人的血漿外泌體中12個(gè)miRNA的表達(dá)進(jìn)行了評估,結(jié)果顯示,12個(gè)一些病癥相關(guān)的miRNA*在肺病患者中過度表達(dá)。Cazzoli等收集了30個(gè)血漿樣本,發(fā)現(xiàn)4種外泌體miRNA(miR-378a、-379a、-139-5p、-200b-5p)在肺病患者血清中明顯升高,用于篩查患者與健康人ROC曲線下面積(AUC)為0.908。離心除去細(xì)胞器,留取上清。溫州正規(guī)外泌體提取試劑價(jià)格現(xiàn)已證實(shí)可以分泌外泌體的細(xì)胞有:肥大細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、一些病癥細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞等。

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外泌體提純試劑盒的特色與優(yōu)勢:純化和富集的完整血漿/血清,尿液和細(xì)胞培養(yǎng)基中外泌體的可用于功能研究;樣本輸入量多樣;無需耗時(shí)的超速離心,過濾或特殊注射器;無需沉淀試劑,也無需過夜培養(yǎng);無需蛋白酶處理;適用于多種物種;外泌體被純化并且不含任何其他RNA結(jié)合蛋白;可以使用NanoSight®或電子顯微鏡分析純化的外泌體,以評估近似外泌體大小范圍和濃度。外泌體(exosomes)是一種能被機(jī)體內(nèi)大多數(shù)細(xì)胞分泌的直徑大約為30~150nm的具有脂質(zhì)雙層膜的微小膜泡。它普遍存在并分布于各種體液中,攜帶和傳遞重要的信號分子,形成了一種全新的細(xì)胞間信息傳遞系統(tǒng),影響細(xì)胞的生理狀態(tài)并與多種疾病的發(fā)生與進(jìn)程密切相關(guān)

外泌體與神經(jīng)退行性疾?。和饷隗w可能促進(jìn)或限制大腦中未折疊和異常折疊的蛋白質(zhì)的聚集。AD病人腦脊液外泌體中均可檢測到Tau和Aβ蛋白。類似的現(xiàn)象也在PD和ALS疾病中發(fā)現(xiàn)。PD病人腦脊液外泌體可檢測到α-synuclein,ALS病人外泌體中也可以檢測到SOD1或TDP-43。外泌體與疾病診斷(應(yīng)用潛能):外泌體生成機(jī)制表明,通過分析外泌體的組分,可以幫助識(shí)別其來源的細(xì)胞類型。這一特性已被應(yīng)用于開發(fā)心血管疾病,神經(jīng)系統(tǒng)疾病和一些病癥的分子診斷方法,也在肝腎肺相關(guān)疾病中進(jìn)行研發(fā)測試。將沉淀物用PBS緩沖液進(jìn)行懸浮,使外泌體懸浮于液體上層對外泌體的研究興趣日益增長,無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。

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外泌體在肺病進(jìn)程中的作用:在一些病癥微環(huán)境中,一些病癥細(xì)胞來源的外泌體能夠誘導(dǎo)CD4+T分化為調(diào)節(jié)性T細(xì)胞,壓制機(jī)體的抗一些病癥免疫反應(yīng);肺病細(xì)胞分泌的外泌體含有miR-21和miR-29a,可在免疫細(xì)胞中結(jié)合并啟動(dòng)TLR8,使TLR介導(dǎo)的NF-κB信號通路活化,從而導(dǎo)致一些病癥的生長和轉(zhuǎn)移。在肺病的侵襲和轉(zhuǎn)移過程中,細(xì)胞間通訊扮演著重要的角色。據(jù)有關(guān)報(bào)道稱,NSCLC分泌的外泌體內(nèi)TGFβ和IL10的高表達(dá)與肺病的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。此外,啟動(dòng)的T細(xì)胞可以通過調(diào)控Fas信號通路增加基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP9)的表達(dá),進(jìn)而促進(jìn)肺病的轉(zhuǎn)移。這些機(jī)制有望成為肺病治病的潛在靶點(diǎn)。雖然大多數(shù)外泌體都是促進(jìn)一些病癥的侵襲與轉(zhuǎn)移,但也有報(bào)道稱,外泌體miR-302b可以通過壓制TGFβRⅡ來壓制肺病細(xì)胞的轉(zhuǎn)移與增殖。如純度和回收率低,雜蛋白較多(假陽性),顆粒大小不均一,產(chǎn)生難以去除的聚合物。外泌體提取:高速離心以消除更大的囊泡。廣州外泌體提取試劑產(chǎn)品介紹

首先在無菌條件下提取人體體液,并用PBS緩沖液進(jìn)行稀釋。天津正規(guī)外泌體提取試劑廠家直銷

研究探討了外泌體是否可以作為RNAi的有效載體的可能性。與脂質(zhì)體和其他合成藥物納米顆粒載體不同,外泌體含有可能增強(qiáng)內(nèi)吞作用的跨膜和膜錨定蛋白,從而促進(jìn)其內(nèi)容物的遞送。CD47是外泌體蛋白質(zhì)之一,是一個(gè)普遍表達(dá)的整合素相關(guān)跨膜蛋白,其部分功能可以保護(hù)細(xì)胞免受吞噬作用。CD47是信號調(diào)節(jié)蛋白α(SIRPα,也稱為CD172a)的配體,CD47-SIRPα間的結(jié)合能夠發(fā)出“不要吃我”的信號,從而壓制吞噬作用。病基因RAS能夠促進(jìn)胰腺病細(xì)胞增殖,增強(qiáng)胞飲作用從而促進(jìn)一些病癥細(xì)胞攝取外泌體。合成納米顆粒對細(xì)胞有一定毒性作用,但使用外泌體能夠較小化對細(xì)胞的毒性。研究人員發(fā)現(xiàn),CD47和病基因KRAS驅(qū)動(dòng)的胞飲作用都會(huì)壓制外泌體被循環(huán)系統(tǒng)的清理,并增強(qiáng)胰腺病細(xì)胞對外泌體的特異性。所以,外泌體的這種特性增強(qiáng)了它們通過遞送RNAi來特異性靶向胰腺病中的KRAS的能力,并且使用外泌體作為單一靶向劑顯著改善了所有實(shí)驗(yàn)PDAC小鼠模型的總生存期。天津正規(guī)外泌體提取試劑廠家直銷

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