對(duì)RNA的科學(xué)研究,首先要從植物或者動(dòng)物等組織中提取出合格的RNA。在實(shí)際RNA提取中,有幾個(gè)提取原則:1、保證RNA一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性;2、提取的RNA樣品中不應(yīng)存在對(duì)酶存在壓制作用的有機(jī)溶劑及過高濃度的金屬離子;3、其他生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子的污染應(yīng)降低到較低程度;4、排除其它核酸分子(DNA)的污染。常用RNA提取方法有:1TRIzol法;2TRIzol+過柱法;3CTAB+過柱法;4試劑盒法。RNA提取試劑盒BiomarkerPlantTotalRNAIsolationKit(Polysaccharides&Polyphenolics–rich),能從植物組織,特別是富含多糖多酚或淀粉的植物組織(如成熟水稻葉片,棉花葉片,擬南芥種子,香蕉,馬鈴薯塊莖,蘋果,西瓜果肉,獼猴桃,梨,月季等)中快速提取總RNA,同時(shí)可以處理大量不同樣品。RNA提?。簾o論是從細(xì)胞、血液、還是組織等高難度樣本提取RNA。濟(jì)南正規(guī)RNA提取試劑廠家供應(yīng)
血漿/血清中miRNA提取試劑盒:是專門針對(duì)血清、血漿樣本中miRNA提取而開發(fā)的,利用吸附柱法從血清、血漿樣品中簡(jiǎn)單快捷提取高純度高質(zhì)量的miRNA。該試劑盒中的裂解液miRBP1及柱結(jié)合液miRBP2具有高效裂解及提取效果。試劑盒中的吸附柱采用特殊的硅基質(zhì)膜材料,對(duì)RNA尤其是smallRNA(<200nt)具有結(jié)合能力,與常用的抗凝劑(包括肝素、EDTA、檸檬酸鈉、草酸鈉)兼容,得到的miRNA可直接用于RT-PCR和Northern雜交等后續(xù)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)操作。普通植物總RNA提取試劑盒:采用進(jìn)口硅基質(zhì)膜制作的總RNA吸附柱,可以從普通植物的根、莖、葉中快速提取總RNA,30~40分鐘內(nèi)即可完成提取過程,提取的總RNA純度高,沒有DNA和蛋白質(zhì)的污染,適用于RT-PCR、qRT-PCR、芯片分析、Northernblot雜交等實(shí)驗(yàn)??俁NA吸附柱保證RNA提取速度快,提取效率高。高效去除植物組織中的色素、酚類等雜質(zhì),提取RNA的純度高,產(chǎn)量大。深圳正規(guī)RNA提取試劑生產(chǎn)廠家即用型RNA,可在絕大多數(shù)下游應(yīng)用。
植物RNA快速提取試劑盒:1.固體組織破碎設(shè)備??捎孟铝醒b置之一:1)玻璃勻漿器。泡酸清潔,用高壓滅菌蒸餾水洗滌數(shù)次。2)研缽。適用于液氮凍存組織的研磨,清洗方法同玻璃勻漿器。3)高速機(jī)械勻漿器(Polytron,Tekmar或類似產(chǎn)品),打開開關(guān),在蒸餾水中清洗分散器頭數(shù)次。2.高壓蒸汽30分鐘消毒一次性吸頭離心管。RNA沉淀溶解之后,應(yīng)嚴(yán)格使用高壓消毒的一次性用品。然而PlantRNAtrip能在RNA酶污染環(huán)境下工作,在裂解步驟可使用未高壓但潔凈的一次性吸頭和離心管,但光推薦在緊急情況下這樣做。3.普通雙蒸水,高壓消毒20分鐘。用于沖洗器皿,配制瓊脂糖凝膠和電泳用緩沖液。DEPC處理的雙蒸水。加DEPC到水中至終濃度為0.01%v/v,室溫過夜,高壓消毒30分鐘。用于溶解RNA,配制TE緩沖液和75%乙醇。4.濕冰。在冰上進(jìn)行操作有助于減少RNA降解。5.其它用品。電泳槽,雙蒸水沖洗。離心機(jī)和加樣器,無需處理。6.戴手套。注意某些實(shí)驗(yàn)如提取質(zhì)粒DNA如使用極大量RNA酶,為防污染,須較全仔細(xì)清洗實(shí)驗(yàn)器具和實(shí)驗(yàn)區(qū)域。
RNA提?。侯A(yù)備工作(1)塑料制品:盡量使用一次性無菌塑料制品。已標(biāo)明RNase-free的塑料制品,如沒有開封使用過,通常不必再處理。處理的步驟如下:O在玻璃燒杯中注入去離子水,加入DEPC使其終濃度為0.05%~0.1%(DEPC-H2O)。(DEPC二乙基焦碳酸酯為活性很強(qiáng)的劇毒物,須在通風(fēng)櫥中小心使用)O將待處理的塑料制品放入一個(gè)可以高溫滅菌的容器中,注入DEPC-H2O,使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中,在通風(fēng)柜中37℃或室溫下處理過夜。O將DEPC-H2O小心倒入廢液瓶中,將裝有DEPC-H2O處理過的塑料制品的容器以鋁箔封口,高溫高壓蒸汽滅菌至少30分鐘。O滅菌塑料制品烘烤干燥,置潔凈處備用。(2)玻璃和金屬物品250℃烘烤3小時(shí)以上。RNase主要來自樣品的細(xì)胞。
與DNA不同,RNA一般為單鏈長(zhǎng)分子,不形成雙螺旋結(jié)構(gòu),但是很多RNA也需要通過堿基配對(duì)原則形成一定的二級(jí)結(jié)構(gòu)乃至三級(jí)結(jié)構(gòu)來行使生物學(xué)功能。RNA的堿基配對(duì)規(guī)則基本和DNA相同,不過除了A-U、G-C配對(duì)外,G-U也可以配對(duì)。在細(xì)胞中,根據(jù)結(jié)構(gòu)功能的不同,RNA主要分三類,即tRNA(轉(zhuǎn)運(yùn)RNA),rRNA(核糖體RNA),mRNA(信使RNA)。mRNA是合成蛋白質(zhì)的模板,內(nèi)容按照細(xì)胞核中的DNA所轉(zhuǎn)錄;tRNA是mRNA上堿基序列(即遺傳密碼子)的識(shí)別者和氨基酸的轉(zhuǎn)運(yùn)者;rRNA是組成核糖體的組分,是蛋白質(zhì)合成的工作場(chǎng)所。拭子RNA提取試劑的選擇?應(yīng)有較高的提取得率。長(zhǎng)沙正規(guī)RNA提取試劑廠家直銷
這種情況下,可以在裂解緩沖液中立即進(jìn)行溶解。濟(jì)南正規(guī)RNA提取試劑廠家供應(yīng)
通用多糖多酚植物RNA提取試劑盒:1、多糖多酚植物RNA提取試劑盒整合了在提取過程中去除干擾物的技術(shù),已成功用于葡萄,中草藥等多糖含量高的樣品,成功用于棉花等多酚含量高的樣品。另外華越洋還開發(fā)了糖類清理劑,PCR壓制物清理劑,核酸提取優(yōu)化劑,樣品核酸穩(wěn)定劑,RNA組織樣品保存液等核酸提取輔助產(chǎn)品。2、適用材料普遍:尤其適合解決多醣多酚,色素等次級(jí)代謝物豐富的植物樣本難題。昆蟲RNA柱式提取試劑盒特點(diǎn):操作簡(jiǎn)單快速,處理一個(gè)樣品只需要約十分鐘。RNA純度高,平均OD260/280一般都在2.0左右,能夠有效去除大多數(shù)昆蟲中的多糖污染。適用于各種昆蟲組織,每100mg組織能提取到20~30μg總RNA。得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern雜交、cDNA合成等實(shí)驗(yàn)。濟(jì)南正規(guī)RNA提取試劑廠家供應(yīng)
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