植物、動(dòng)物、人類(lèi)都存在RNA干擾現(xiàn)象,這對(duì)于基因表達(dá)的管理、參與對(duì)病菌傳染的防護(hù)、控制活躍基因具有重要意義。RNA干擾是一個(gè)生物過(guò)程,在這個(gè)過(guò)程中雙鏈RNA以一種非常明確的方式壓制了基因表達(dá)。自1998年發(fā)現(xiàn)以來(lái),RNA干擾已經(jīng)作為一種強(qiáng)大的“基因沉默”技術(shù)而出現(xiàn)。RNA干擾作為研究基因運(yùn)行的一種研究方法已被普遍應(yīng)用于基礎(chǔ)科學(xué),它可能在將來(lái)產(chǎn)生更多更新的醫(yī)治方法??茖W(xué)家認(rèn)為,RNA干擾技術(shù)不僅是研究基因功能的一種強(qiáng)大工具,不久的未來(lái),這種技術(shù)也許能用來(lái)直接從源頭上讓致病基因“沉默”,以醫(yī)治病癥甚至一些病,在農(nóng)業(yè)上也將大有可為。當(dāng)然還有其它的進(jìn)口試劑盒,但是均存在價(jià)格高、訂貨周期長(zhǎng)的問(wèn)題。珠海正規(guī)RNA提取試劑哪里買(mǎi)
RNA提取試劑的選擇:首先,要確定材料的可用性。盡管現(xiàn)有的RNA提取試劑都用壓制RNase的成分,但提取的材料仍需謹(jǐn)慎處理。提取的材料的新鮮度是獲取完整RNA的關(guān)鍵,但是由于種種原因無(wú)法立即從新鮮材料中提取RNA時(shí),使用Takara公司的樣品保護(hù)劑SampleProtectorforRNA/DNA可以免去使用液氮或超低溫冰箱的不便,同時(shí)也可以有效解決組織、細(xì)胞樣品的短時(shí)間保存及運(yùn)輸問(wèn)題。此外,如果將不同時(shí)期收集的樣品都預(yù)先存放于本試劑中,可以做到立即終止并固定RNA表達(dá)的時(shí)序變化,減少實(shí)驗(yàn)組間的誤差寧波正規(guī)RNA提取試劑銷(xiāo)售廠家普通的提取實(shí)驗(yàn)用國(guó)產(chǎn)的試劑盒就足以,價(jià)格不高,基本上各地均有現(xiàn)貨。
動(dòng)物細(xì)胞RNA提?。?、懸浮細(xì)胞:可直接離心后棄掉培養(yǎng)基,用無(wú)菌PBS清洗1~2遍后,再用適量PBS懸浮起來(lái),然后再加入裂解液進(jìn)行裂解。千萬(wàn)不要完全棄掉液體后,往沉淀細(xì)胞里直接加入裂解液,這樣會(huì)使外表層的細(xì)胞裂解后釋放的組蛋白包裹粘附在沉淀細(xì)胞外側(cè),從而限制沉淀內(nèi)部的細(xì)胞與裂解液的接觸,從而導(dǎo)致細(xì)胞裂解不徹底,降低RNA得率。2、半貼壁或貼壁不緊的細(xì)胞:棄掉培養(yǎng)基后,用PBS洗1~2次,然后直接吸取適量PBS用吸管或者泵吹打培養(yǎng)皿,把細(xì)胞吹下來(lái),轉(zhuǎn)移到無(wú)RNA酶的EP管中,加裂解液進(jìn)行提取。3、貼壁細(xì)胞:需要先用胰酶消化,然后收集到無(wú)RNA酶的EP管中,離心去其上清,用PBS洗1~2次,去除多余的胰酶,以適量PBS重懸后繼續(xù)進(jìn)行提取步驟。
植物RNA提?。褐参锝M織中,富含酚類(lèi)化合物,或富含多糖,或含有某些尚無(wú)法確定的次級(jí)代謝產(chǎn)物,或RNase的活性較高。這些物質(zhì)在細(xì)胞裂解后與RNA緊密結(jié)合形成難溶復(fù)合物或者膠狀沉淀,很難將其去除。所以我們?cè)谔崛≈参锝M織時(shí),要選取針對(duì)植物的試劑盒,試劑盒里的裂解液能有效解決多酚易氧化、多糖化合物與核酸分離等難題。1、植物的果皮、果肉、種子、葉片等要在研缽中充分研磨,研磨過(guò)程中液氮要及時(shí)補(bǔ)充,避免樣品融化,研磨后的樣品應(yīng)迅速加入裂解液中震蕩混勻,避免RNA降解。2、像水稻及小麥葉片等富含纖維的樣本,則應(yīng)適當(dāng)減少提取用量,否則組織研磨及裂解不徹底,會(huì)使提取的RNA產(chǎn)量較低。3、含水分較多的植物組織例如石榴果實(shí)、西瓜果實(shí)、桃子果實(shí)等則應(yīng)當(dāng)適當(dāng)提高樣本量(可選100~200mg)。4、植物組織,如植物葉片、根莖、堅(jiān)硬的果實(shí)等材料一般建議使用液氮在研缽中徹底研缽成份,再繼續(xù)進(jìn)行提取步驟。常規(guī)的組織勻漿機(jī)對(duì)植物組織的勻漿效果可能不佳,一般不建議使用。RNA提取試劑TRIpure是基于世界上使用較普遍的異硫氰酸胍/酚法研制而成的總RNA抽提試劑。
安德魯·法爾稱:“克雷格和我的工作是研究為什么一些基因會(huì)停止運(yùn)行,我們?cè)噲D去控制它們,我們發(fā)現(xiàn)了一些東西可以有效地中止它們。這些基因并不能告訴你它們能做什么,所以如果你能中止它們,你就可以開(kāi)始了解它們能做什么。不過(guò),較初發(fā)現(xiàn)RNA現(xiàn)象的是一位華人學(xué)者,非??上?,他沒(méi)有進(jìn)一步弄清這是為什么?!倍税l(fā)現(xiàn)的是一個(gè)有關(guān)控制基因信息流程的關(guān)鍵機(jī)制。人們的基因組通過(guò)從細(xì)胞核里的DNA向蛋白質(zhì)的合成機(jī)制發(fā)出生產(chǎn)蛋白質(zhì)的指令,這些指令通過(guò)mRNA傳送。他們發(fā)現(xiàn)一種可以用特定基因降解mRNA的方式,在這種RNA干擾現(xiàn)象中,雙鏈RNA以一種非常明確的方式壓制了基因表達(dá)。這項(xiàng)技術(shù)被用于全球的實(shí)驗(yàn)室來(lái)確定在各種病癥中哪種基因起到了重要作用。很多RNA也需要通過(guò)堿基配對(duì)原則形成一定的二級(jí)結(jié)構(gòu)乃至三級(jí)結(jié)構(gòu)來(lái)行使生物學(xué)功能。南京RNA提取試劑價(jià)格
RNA提取試劑:在破碎和溶解細(xì)胞時(shí)能保持RNA的完整性。珠海正規(guī)RNA提取試劑哪里買(mǎi)
rRNA是細(xì)胞內(nèi)的一種基本RNA,與r蛋白一起構(gòu)成蛋白質(zhì)合成的場(chǎng)所—核糖體。隨著rRNA基因序列越來(lái)越了解,其在生物研究中也的得到了更普遍的應(yīng)用,主要表現(xiàn)在生物進(jìn)化研究和分子流行病研究。(1)rRNA在生物進(jìn)化上的研究。rRNA具有高度保守性,且普遍存在于各種生物中,rRNA提供了足夠的序列信息?,F(xiàn)在還可用于在細(xì)菌分類(lèi)、細(xì)菌鑒定等方面。(2)rRNA在分子流行病上的研究。目前,人們已經(jīng)把rRNA在進(jìn)化上的普遍差異應(yīng)用到了流行病學(xué)研究方面,通過(guò)對(duì)不同細(xì)菌進(jìn)行鑒定分類(lèi),從而明確病因,追蹤傳染源,進(jìn)一步控制及預(yù)防疾病。珠海正規(guī)RNA提取試劑哪里買(mǎi)
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