外泌體與肺病預(yù)后:外泌體mirRNA和蛋白質(zhì)被認為是NSCLC的預(yù)后因子。Dejima等在研究NSCLC患者預(yù)后的生物標志物時發(fā)現(xiàn),外泌體miR-4257和miR-21的含量顯著上升。此外,還有研究表明,低水平miR-146a-5p的NSCLC患者較高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的復發(fā)率。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血漿的外泌體時發(fā)現(xiàn),NY-ESO-1是其中對低生存率有顯著影響的標志物。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系統(tǒng)分析了28位NSCLC患者體內(nèi)的365種miRNA,其中l(wèi)et-7f、miR-30e-3p和miR-20b表達均下調(diào),進一步研究發(fā)現(xiàn),let-7f和miR-30e-3p水平可以區(qū)分早期和晚期NSCLC患者,高水平let-7f和miR-30e-3p與不良預(yù)后密切相關(guān)。首先在無菌條件下提取人體體液,并用PBS緩沖液進行稀釋。南京外泌體提取試劑廠家直銷
外泌體的提取、分離方法:超高速離心法。常用的是超高速離心法,該方法是被譽為分離外泌體的“金標準”。該方法利用離心力從細胞培養(yǎng)液或生物流體獲得外泌體,經(jīng)過400×g、2000×g、10000×g的低速離心,除去細胞及大的細胞分泌物;較后超高速100000×g離心得到外泌體[12]。超高速離心因操作簡單,不需要復雜的技術(shù)支持,并且成本相對較低而被普遍使用。但是該方法耗時、產(chǎn)率低,得到的外泌體的數(shù)量和質(zhì)量很大程度上受轉(zhuǎn)子的類型、轉(zhuǎn)子沉降角度等因素影響,其中較主要的問題就是差速離心法獲得的沉淀物是外泌體,但也會有其他的囊泡、蛋白質(zhì)或蛋白和RNA的聚集體。南昌外泌體提取試劑平均價格外泌體的提取方法:超速離心法(差速離心)。
外泌體與肺病預(yù)后:在當代精細醫(yī)療的大趨勢下,外泌體的發(fā)現(xiàn)和研究為肺病的早期診斷和治病提供了嶄新的方向。外泌體在液體活檢中的巨大潛力可以為肺病患者的早期發(fā)現(xiàn)和早期診療提供可靠依據(jù)。根據(jù)一些病癥來源的外泌體在肺病的發(fā)生的發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移過程中的作用及相關(guān)機制的研究,臨床醫(yī)療人員可以針對不同的患者制定較合適的治病方案,以達到改善肺病患者生存率,延長肺病患者生存時間的目的。但是,針對外泌體的研究還存在諸多的問題有待廣大研究者解決,如:外泌體的純化及標記方法、如何尋找外泌體的靶基因、外泌體的作用機制及信號通路等。總而言之,外泌體的研究有著廣闊的前景,基于外泌體與肺病的研究,有望研發(fā)出能夠應(yīng)用于肺病臨床診斷和治病的有效措施,造福更多的患者。
當其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時,外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等來調(diào)節(jié)受體細胞的生物學活性。外泌體介導的細胞間通訊主要通過以下三種方式:一是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結(jié)合,進而啟動靶細胞細胞內(nèi)的信號通路。二是在細胞外基質(zhì)中,外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結(jié)合,從而啟動細胞內(nèi)的信號通路。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細胞膜上未能檢測出。三是外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合,非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì)、mRNA以及microRNA。人體內(nèi)多種細胞及體液均可分泌外泌體,包括內(nèi)皮細胞、免疫細胞、血小板、平滑肌細胞等。外泌體的提取、分離方法:聚合物沉淀法。
外泌體的提取方法:1.超速離心法(差速離心)。超離法是較常用的外泌體純化手段,采用低速離心、高速離心交替進行,可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡單,獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎,但過程比較費時,且回收率不穩(wěn)定(可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)),純度也受到質(zhì)疑;此外,重復離心操作還有可能對囊泡造成損害,從而降低其質(zhì)量。2.密度梯度離心。在超速離心力作用下,使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,是一種區(qū)帶分離法。通過密度梯度離心,樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高,但步驟繁瑣,耗時,對離心時間極為敏感主要來源于細胞內(nèi)內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。珠海外泌體提取試劑哪家好
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外泌體(exosomes)是活細胞經(jīng)過"內(nèi)吞-融合-外排"等一系列調(diào)控過程而形成的膜性囊泡,來源于晚期核內(nèi)體(也稱為多囊泡體),直徑約為30-150nm,密度在1.13-1.21g/ml,天然存在于血液、唾液、尿液及母乳等體液中,同時外泌體也存在于組織和細胞間隙中。人體中幾乎所有類型的細胞均能產(chǎn)生外泌體,人體中大約有1014個外泌體,大約平均每個細胞產(chǎn)生1000-10000個。外泌體中含有核酸(DNA、miRNA、lncRNA、mRNA、tRF等)、蛋白和脂類,在細胞間物質(zhì)和信息轉(zhuǎn)導中發(fā)揮重要作用,研究表明其在干細胞、免疫調(diào)控、瘤轉(zhuǎn)移、血管生成以及生物標志物等領(lǐng)域都發(fā)揮著不可替代的作用南京外泌體提取試劑廠家直銷