研究中研究人員發(fā)現(xiàn),胃病細胞周圍富含TAM。TAM以M2極化表型為特征,并促進胃病細胞在體外和體內(nèi)的遷移。此外,研究人員發(fā)現(xiàn)M2衍生的外泌體決定了TAMs介導的遷移活動。通過使用質(zhì)譜方法,研究人員確定載脂蛋白E(ApoE)是M2巨噬細胞衍生的外泌體中高度特異性和有效的蛋白質(zhì)。ApoE是一種M2特異性且高度豐富的來源于M2外泌體的蛋白質(zhì),是決定胃病細胞遷移潛力的主要驅(qū)動因素。然而,來自ApoE-/-的小鼠M2巨噬細胞的外泌體在體外和體內(nèi)對胃病細胞的遷移沒有顯著影響。在機制上,M2巨噬細胞衍生的外泌體介導ApoE啟動的PI3K-Akt信號通路,并在TAM和受體胃病細胞之間進行細胞間轉(zhuǎn)移,促進細胞骨架的遷移??偟膩碚f,該研究發(fā)現(xiàn)外泌體介導的功能性ApoE蛋白從TAM轉(zhuǎn)移到一些病癥細胞,促進了胃病細胞的遷移。外泌體提純試劑盒的特色與優(yōu)勢:純化和富集的完整血漿/血清,尿液和細胞培養(yǎng)基中外泌體可用于功能研究。唐山外泌體提取試劑廠家現(xiàn)貨
外泌體的提取、分離方法:開發(fā)高效、快速、穩(wěn)定,并且保持外泌體結(jié)構(gòu)和生物功能完整性的方法,是目前外泌體應(yīng)用于臨床的基礎(chǔ)和前提。從細胞上清和體液中提取分離外泌體的方法很多,但是外泌體的純度和產(chǎn)量卻和分離方法息息相關(guān)。通常分離步驟少、產(chǎn)率高,但是純度會受到影響。鑒于每種分離方法都有其優(yōu)缺點,實驗可以根據(jù)樣本來源、下游實驗?zāi)康牡龋x擇合適的外泌體分離方法。2015年,國際囊泡組織(InternationSocietyforExtracelluarVesicles,ISEV)指出,簡單依靠一種分離方法得到的外泌體的純度和產(chǎn)量都難滿足實驗的需求。因此,推薦聯(lián)合使用各種方法,從而得到高純度和高產(chǎn)量的外泌體。濟南外泌體提取試劑哪家好聚乙二醇(PEG)可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀。
外泌體的提取方法:1.超速離心法(差速離心)。超離法是較常用的外泌體純化手段,采用低速離心、高速離心交替進行,可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡單,獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎,但過程比較費時,且回收率不穩(wěn)定(可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)),純度也受到質(zhì)疑;此外,重復離心操作還有可能對囊泡造成損害,從而降低其質(zhì)量。2.密度梯度離心。在超速離心力作用下,使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,是一種區(qū)帶分離法。通過密度梯度離心,樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高,但步驟繁瑣,耗時,對離心時間極為敏感
外泌體(exosomes)是活細胞經(jīng)過"內(nèi)吞-融合-外排"等一系列調(diào)控過程而形成的膜性囊泡,來源于晚期核內(nèi)體(也稱為多囊泡體),直徑約為30-150nm,密度在1.13-1.21g/ml,天然存在于血液、唾液、尿液及母乳等體液中,同時外泌體也存在于組織和細胞間隙中。人體中幾乎所有類型的細胞均能產(chǎn)生外泌體,人體中大約有1014個外泌體,大約平均每個細胞產(chǎn)生1000-10000個。外泌體中含有核酸(DNA、miRNA、lncRNA、mRNA、tRF等)、蛋白和脂類,在細胞間物質(zhì)和信息轉(zhuǎn)導中發(fā)揮重要作用,研究表明其在干細胞、免疫調(diào)控、瘤轉(zhuǎn)移、血管生成以及生物標志物等領(lǐng)域都發(fā)揮著不可替代的作用。這些試劑盒不需要特殊設(shè)備,隨著產(chǎn)品不斷更新?lián)Q代,提取效率和純化效果逐漸提高。
外泌體在肺病進程中的作用:在一些病癥微環(huán)境中,一些病癥細胞來源的外泌體能夠誘導CD4+T分化為調(diào)節(jié)性T細胞,壓制機體的抗一些病癥免疫反應(yīng);肺病細胞分泌的外泌體含有miR-21和miR-29a,可在免疫細胞中結(jié)合并啟動TLR8,使TLR介導的NF-κB信號通路活化,從而導致一些病癥的生長和轉(zhuǎn)移。在肺病的侵襲和轉(zhuǎn)移過程中,細胞間通訊扮演著重要的角色。據(jù)有關(guān)報道稱,NSCLC分泌的外泌體內(nèi)TGFβ和IL10的高表達與肺病的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。此外,啟動的T細胞可以通過調(diào)控Fas信號通路增加基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP9)的表達,進而促進肺病的轉(zhuǎn)移。這些機制有望成為肺病治病的潛在靶點。雖然大多數(shù)外泌體都是促進一些病癥的侵襲與轉(zhuǎn)移,但也有報道稱,外泌體miR-302b可以通過壓制TGFβRⅡ來壓制肺病細胞的轉(zhuǎn)移與增殖。如純度和回收率低,雜蛋白較多(假陽性),顆粒大小不均一,產(chǎn)生難以去除的聚合物用于外泌體提取的體液收集注意事項:抽血技巧。溫州正規(guī)外泌體提取試劑價格
外泌體的提取、分離方法:梯度密度離心法。唐山外泌體提取試劑廠家現(xiàn)貨
外泌體的提取方法:1.超速離心法(差速離心)。超離法是較常用的外泌體純化手段,采用低速離心、高速離心交替進行,可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡單,獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎,但過程比較費時,且回收率不穩(wěn)定(可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)),純度也受到質(zhì)疑;此外,重復離心操作還有可能對囊泡造成損害,從而降低其質(zhì)量。2.密度梯度離心。在超速離心力作用下,使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,是一種區(qū)帶分離法。通過密度梯度離心,樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高,但步驟繁瑣,耗時,對離心時間極為敏感。唐山外泌體提取試劑廠家現(xiàn)貨