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來源: 發(fā)布時間:2024-03-18

外泌體(exosomes)是活細胞經過"內吞-融合-外排"等一系列調控過程而形成的膜性囊泡,來源于晚期核內體(也稱為多囊泡體),直徑約為30-150nm,密度在1.13-1.21g/ml,天然存在于血液、唾液、尿液及母乳等體液中,同時外泌體也存在于組織和細胞間隙中。人體中幾乎所有類型的細胞均能產生外泌體,人體中大約有1014個外泌體,大約平均每個細胞產生1000-10000個。外泌體中含有核酸(DNA、miRNA、lncRNA、mRNA、tRF等)、蛋白和脂類,在細胞間物質和信息轉導中發(fā)揮重要作用,研究表明其在干細胞、免疫調控、瘤轉移、血管生成以及生物標志物等領域都發(fā)揮著不可替代的作用如何高效地提取外泌體是實現(xiàn)這項新興液體活檢技術臨床常規(guī)化應用的關鍵。溫州外泌體提取試劑推薦廠家

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外泌體(Exosomes)是細胞分泌到胞外的一種囊泡(ExtracellularVesicles,EVs),其大小為30-150nm,具有雙層膜結構和茶托狀形態(tài),含有豐富的內含物(包括核酸、蛋白和脂質等),參與細胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,包括血液、唾液、尿液、乳汁等,同時也存在于組織樣本中,如腦組織、肌肉組織、脂肪組織等。腦組織分離方法簡述:將腦組織剪成薄片,放入離心管中加上消化液進行消化,經水浴、反復輕輕上下顛倒,再用移液間斷緩慢吹吸至消化結束。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中,混勻,置于冰上。再進行一系列的差速超速離心過程,包括除雜、濾膜過濾、超離等。較后用PBS重懸外泌體,用重懸后的外泌體進行下面的透射電鏡(TEM)、納米粒徑追蹤分子(NTA)和markerWB鑒定。來源于細胞內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體,經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中。合肥外泌體提取試劑同時對超速離心機的設備要求以及操作程序的培訓較大提高了提取成本。

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外泌體的提取方法:1、色譜法。色譜法是利用根據(jù)凝膠孔隙的孔徑大小與樣品分子尺寸的相對關系而對溶質進行分離的分析的方法。樣品中大分子不能進入凝膠孔,只能沿多孔凝膠粒子之間的空隙通過色譜柱,首先被流動相洗脫出來;小分子可進入凝膠中絕大部分孔洞,在柱中受到更強地滯留,更慢地被洗脫出。分離到的外泌體在電鏡下大小均一,但是需要特殊的設備,應用不普遍。2、超濾離心。由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,大于一般蛋白質,利用不同截留相對分子質量(MWCO)的超濾膜對樣品進行選擇性分離,便可獲得外泌體。超濾離心法簡單高效,且不影響外泌體的生物活性,是提取細胞外泌體的一種新方法。

人體幾乎所有類型的細胞都能分泌外泌體,外泌體普遍存在并分布于各種體液中,攜帶多種蛋白質、mRNA、miRNA和脂質類物質等,作為重要的傳遞信號分子,形成了一種全新的細胞-細胞間信息傳遞系統(tǒng),可參與細胞通訊、細胞遷移、血管新生和一些病癥細胞生長等過程。外泌體與微泡:我們知道,細胞間相互作用可以通過釋放蛋白質、核酸、脂質等分子到胞外與受體結合從而介導胞內細胞傳導。除此之外,細胞還可以釋放膜囊泡,外泌體與微泡就是其中兩種,二者相似但形成方式不同:外泌體是細胞內內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體,經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中的膜囊泡,而微泡則是細胞出芽與細胞膜融合后直接脫落形成的囊泡,且外泌體大小均一,直徑在40~100nm,其大小取決于其起源部位以及細胞中的脂質雙層結構;而微泡大小不一,直徑在50~1000nm之間。唐山正規(guī)外泌體提取試劑產品介紹在超速離心力作用下,使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,是一種區(qū)帶分離法同時可獲得高純度和高回收率的外泌體——如新西蘭IZON開發(fā)的系列的外泌體排阻劑。

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外泌體的提取、分離方法:開發(fā)高效、快速、穩(wěn)定,并且保持外泌體結構和生物功能完整性的方法,是目前外泌體應用于臨床的基礎和前提。從細胞上清和體液中提取分離外泌體的方法很多,但是外泌體的純度和產量卻和分離方法息息相關。通常分離步驟少、產率高,但是純度會受到影響。鑒于每種分離方法都有其優(yōu)缺點,實驗可以根據(jù)樣本來源、下游實驗目的等,選擇合適的外泌體分離方法。2015年,國際囊泡組織(InternationSocietyforExtracelluarVesicles,ISEV)指出,簡單依靠一種分離方法得到的外泌體的純度和產量都難滿足實驗的需求。因此,推薦聯(lián)合使用各種方法,從而得到高純度和高產量的外泌體。有關他們分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應功能的精確分子機制剛剛開始研究。濟南正規(guī)外泌體提取試劑價格

超速離心法是目前外泌體相關文章中的主流方法,由于離心步驟繁瑣。溫州外泌體提取試劑推薦廠家

外泌體(exosome),特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。其主要來源于細胞內內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體,經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中?,F(xiàn)已證實可以分泌外泌體的細胞有:肥大細胞、淋巴細胞、樹突狀細胞、瘤細胞、間充質干細胞等。外泌體在免疫中抗原呈遞、瘤的生長與遷移、組織損傷的修復等生理病理上起著重要的作用。同時,不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標志物。細胞外囊泡是蛋白質、mRNA、miRNA和脂質運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介,根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類,包括外泌體、微泡和凋亡小體。其中,外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡,由多種細胞分泌,內含有特定的蛋白質、脂質、細胞因子或遺傳物質。來源于不同的組織的外泌體不光具有其特異性蛋白分子,而且還包含其行使功能的關鍵分子。溫州外泌體提取試劑推薦廠家