細胞凍存是細胞培養(yǎng)技術(shù)中細胞進行保種并長期保存的常用方法，其中細胞凍存液，作為細胞凍存時必須使用的一種溶液，不光光是說只是用來進行細胞的保存，在細胞的購買、寄贈、交換和運送過程中也起著關(guān)鍵作用，因此選擇一款好的細胞凍存液就尤為重要。如果不加任何條件直接凍存細胞，細胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會形成冰晶，能導致細胞內(nèi)發(fā)生機械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、pH值改變、蛋白變性等，從而引起細胞死亡。而細胞凍存液就相當于細胞的保護劑，在凍存細胞時將細胞懸浮于凍存液中，可使冰點降低，提高細胞膜對水的通透性，在緩慢的凍結(jié)條件下，能使細胞內(nèi)水份在凍結(jié)前透出細胞，可以防止或減少冷凍冰晶對細胞的損傷作用。這樣就使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來，在需要時直接復蘇就可恢復細胞活性。無血清細胞凍存液使用方法：緩慢地混合均勻，制成細胞混合液。珠海無血清細胞凍存液供應商

無血清細胞凍存液與含血清細胞凍存液對比：傳統(tǒng)的細胞凍存液是使用培養(yǎng)基、血清和DMSO按照一定的比例混合，其中DMSO的含量是10%，血清的含量是10%，統(tǒng)稱為含血清細胞凍存液。含血清細胞凍存液的一般的凍存方法是梯度降溫凍存法，如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘，然后移至-20℃冰箱30分鐘，再移至-80℃冰箱保存16-18個小時（或隔夜），較后才移至液氮罐中進行長期的儲存?？梢?，含血清細胞凍存液凍存細胞時遇到的問題：1.凍存細胞時需現(xiàn)配凍存液(如購買市面上通用的含血清細胞凍存液，此步可省略)。2.需要程序降溫（4℃→-20℃→-80℃→液氮），步驟繁瑣，耗時耗力。3.含血清，細胞污染(病毒、霉菌和支原體等)的風險更高。4.血清批次、品質(zhì)間差異導致凍存液的批次間差異。5.需液氮凍存，且不能原位（如孔板）凍存。珠海無血清細胞凍存液供應商無血清細胞凍存液的優(yōu)勢：無血清細胞凍存液是不含血清和動物源成分。

永生化的細胞系往往相當健壯，因此，使用實驗室自制的凍存培養(yǎng)基，效果也不錯。典型的配方是在生長培養(yǎng)基中加入5%到10%的DMSO和5%到40%的血清，或只是在血清中加入10%的DMSO。DMSO的作用是取代細胞中的一些水，以防止冰晶形成，刺穿細胞。據(jù)賽默飛世爾科技的較深科學家RhondaNewman介紹，DMSO還能防止細胞在冷凍期間發(fā)生收縮，而后在解凍時又變得腫脹。血清，這種富含營養(yǎng)成分的物質(zhì)，直接支持細胞?！爱敿毎幱谶@種營養(yǎng)豐富的環(huán)境時，它們能夠更好地復蘇。

無血清細胞凍存液凍存細胞實驗步驟：選擇凍存處于對數(shù)生長期的細胞有助于提高復蘇細胞存活率。1.按照常用方法收集懸浮細胞或貼壁細胞于試管中。2.按照培養(yǎng)細胞密度和所用細胞凍存管的尺寸計算所需凍存細胞數(shù)。（參考：5×105至5×106cells/ml）。3.取相當于所需細胞數(shù)的細胞懸浮液量，置于離心管中，離心收集培養(yǎng)細胞（參考離心條件：1,000~2,000rpm，4℃，3~5min）。移去離心管中的上清液。4.加入適量的無血清型細胞凍存液于離心管中，使細胞濃度為5×105至5×106cells/ml。緩慢地混合均勻，制成細胞混合液。5.將離心管中的細胞混合液分裝于已標示完全的冷凍保存管中。6.直接將含細胞混合液的凍存管放入-80℃冰箱，長期冷凍保存。7.若研究者需要液氮保存時，可將完全凍結(jié)的凍存管（放入-80℃冰箱后至少一晝夜）移至-196℃液氮罐。清洗細胞，充分洗凈殘留凍存液。

細胞凍存注意事項：離心問題：目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng)，第二天換液。因為離心的目的是兩個，去除DMSO，去除死細胞，這個是標準流程，但對一般人來說，把握不好離心轉(zhuǎn)速和時間，轉(zhuǎn)的不夠活細胞沉底的少，細胞就全被扔掉了，轉(zhuǎn)過了活細胞會受壓過大，死亡。此外在操作過程中容易污染，所以不推薦。另一種說法為細胞懸液中含有二甲基亞砜（DMSO），DMSO對細胞有一定的毒副作用，所以須將離心后的液體前倒凈，且一定倒干凈。我在試驗中按照常規(guī)的離心分裝的方法進行復蘇，結(jié)果無有異常。無血清細胞凍存液可用于造血干細胞、間充質(zhì)干細胞等干細胞的儲存。杭州成都無血清細胞凍存液

無血清凍存液注意事項：若需長期凍存細胞，請轉(zhuǎn)移至液氮罐中貯存。珠海無血清細胞凍存液供應商

細胞凍存時間和操作步驟：1、首先我們需要凍存培養(yǎng)液，通常細胞凍存液含10%的DMSO，或者是甘油、10-20%的小牛血清；、取對數(shù)生長期細胞，并且還需要用PBS進行清洗，需要注意在這里要丟棄掉舊的細胞凍存液；3.去除PBS，加入適量的胰蛋白酶，以覆蓋住培養(yǎng)皿表面為宜，然后把單層生長的細胞消化掉；然后離心1000rpm5min時間；4、去除胰蛋白酶，加入凍存培養(yǎng)液，輕輕吹打使細胞的分布變得均勻，調(diào)節(jié)細胞較終的密度為5×106/ml-1×107/ml，需要注意這是較佳的細胞密度；5、將細胞裝入凍存管之中，每管的含量應該保持在1～1.5ml之間。在凍存管上標明細名稱、時間、操作者；6、較后要說的就是細胞凍存的時間了，對于標準的凍存程序來說，需要進行梯度降溫，降溫速率-1～-2℃/min，一旦溫度達到-25℃以下時，那么就可增至-5℃～-10℃/min；等到-100℃的時候，可迅速的放入到液氮之中。珠海無血清細胞凍存液供應商