糖原染色法:染色原理細(xì)胞胞漿中存在糖原或多糖類物質(zhì)(如糖蛋白、粘多糖、糖脂、粘蛋白等),過(guò)碘酸能使細(xì)胞內(nèi)的多糖乙二醇基氧化為二醛基,其與Schiff試劑中的無(wú)色品紅結(jié)合后呈現(xiàn)紫紅色,沉積在細(xì)胞內(nèi)多糖所在之處。染色步驟:1.組織石蠟包埋切片后脫蠟至水,蒸餾水洗2min(細(xì)胞爬片4%多聚甲醛固定后水洗);2.滴加過(guò)碘酸溶液,氧化5min;3.蒸餾水洗10min;4.滴加Schiff試劑,侵染10-20min;5.傾去Schiff試劑,流水沖洗10min;6.滴加蘇木素染色液,染核1-2min;7.流水沖洗5min;8.酸性乙醇分化液分化一般厚度不超過(guò)3mm,大小不超過(guò)5×5m㎡。上??诒玫奶窃旧噭┖蟹?wù)電話
特染的應(yīng)用價(jià)值:現(xiàn)代病理學(xué)中免疫組織化學(xué)技術(shù)、電子顯微鏡技術(shù)以及其它細(xì)胞及分子生物學(xué)技術(shù)應(yīng)用日益普遍,但由于這些技術(shù)要求一定的實(shí)驗(yàn)條件以及所需的試劑價(jià)格較為昂貴,對(duì)于一部分病人以及某一些基層醫(yī)院是比較難以接受的。而組織化學(xué)技術(shù)則具有無(wú)需復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)條件以及較為昂貴的試劑操作又比較簡(jiǎn)單的優(yōu)勢(shì),在臨床病理學(xué)診斷中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。比如,當(dāng)細(xì)胞中出現(xiàn)色素,是黑色素還是含鐵血黃素以及當(dāng)組織中出現(xiàn)均一化學(xué)物質(zhì)是否為淀粉樣變性等,用組織化學(xué)技術(shù)區(qū)別起來(lái)很簡(jiǎn)單,所以組織化學(xué)技術(shù),雖然已有幾十年到幾百年的歷史,仍是一個(gè)很有實(shí)用價(jià)值的技術(shù)~糖原染色試劑盒平均價(jià)格加入少量活性碳并震蕩、過(guò)濾,此時(shí)溶液應(yīng)為無(wú)色。
糖原pas染色液配制及使用方法:1、常規(guī)固定,常采用10%的福爾馬林,常規(guī)脫水包埋。2、石蠟切片脫蠟入蒸餾水;冰凍切片直接入蒸餾水。3、自來(lái)水沖洗2~3min,再用蒸餾水浸洗2次。4、入過(guò)碘酸溶液,室溫放置,一般不宜超過(guò)10min。5、自來(lái)水沖洗1次,再用蒸餾水浸洗2次。6、入SchiffReagent,置于室溫陰暗處浸染。7、自來(lái)水沖洗10min。8、入蘇木素染色液,染細(xì)胞核。9、酸性乙醇分化液分化。_x005f_x005f_x005f_x000c_10、自來(lái)水沖洗10~15min,更換蒸餾水清洗,使其返藍(lán)。11、逐級(jí)常規(guī)乙醇脫水。二甲苯透明,中性樹(shù)膠封固。
糖原D-PAS染色液注意事項(xiàng):1、切片脫蠟應(yīng)盡量干冷,否則影響染色效果。需使用一張陽(yáng)性對(duì)照片驗(yàn)證酶的活性。2、過(guò)碘酸氧化時(shí)間不宜過(guò)久,氧化時(shí)溫度以18~22℃較佳。3、試劑(A)、試劑(B)、試劑(C)、應(yīng)置于4℃密閉保存,使用時(shí)避免接觸過(guò)多的陽(yáng)光和空氣,使用前較好提前取出恢復(fù)到在室溫后,避光暗處使用。4、酸性乙醇分化液應(yīng)經(jīng)常更換新液,其分化時(shí)間應(yīng)該依據(jù)切片厚薄、組織的類別和酸性乙醇分化液的新舊而定,另外分化后自來(lái)水沖洗時(shí)間應(yīng)該足夠。5、在過(guò)碘酸溶液和SchiffReagent中作用時(shí)間非常重要,該依據(jù)切片厚薄、組織類別等決定。6、況冶切片染色時(shí)間盡量要短。冷凍切片染色時(shí)間盡量要短。
糖原染色(過(guò)碘酸-雪夫反應(yīng))原理多糖中乙二醇基經(jīng)過(guò)碘酸氧化成二醛基與無(wú)色品紅結(jié)合,形成紫紅色化合物。沉積于含糖原的胞漿中。結(jié)果:胞漿中出現(xiàn)彌散狀,顆粒狀,塊狀紅色為陽(yáng)性。無(wú)紅色顆粒為陰性_x005f_x005f_x005f_x000c_臨床意義1、正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)粒系:原粒細(xì)胞糖原含量很低,隨著細(xì)胞的分化成熟,糖原含量逐增加,至成熟階段糖原含量十分豐富。淋巴細(xì)胞:糖原常凝聚成顆?;驂K狀。巨核細(xì)胞-血小板系統(tǒng):PAS反應(yīng)呈粗大的紫色顆?;驁F(tuán)塊。正常紅系:陰性。對(duì)疾病診斷的意義白血病類型的鑒別:急性粒細(xì)胞白血病:原始粒細(xì)胞呈陰性或弱陽(yáng)性反應(yīng),以彌散性為主;急性淋巴細(xì)胞白血病原、幼淋巴細(xì)胞多呈粗顆粒、塊狀陽(yáng)性反應(yīng)。幫助鑒別白血病細(xì)胞和腺骨髓轉(zhuǎn)移的腺細(xì)胞,腺細(xì)胞呈陽(yáng)性反應(yīng)。哪家生產(chǎn)糖原染色試劑盒量大從優(yōu)
糖原染色顯示在肝或心肌細(xì)胞內(nèi)有大量糖原存在即可確診。上??诒玫奶窃旧噭┖蟹?wù)電話
PAS染色的臨床意義①幫助鑒別不典型巨核細(xì)胞和霍奇金細(xì)胞或Reed-Sternberg細(xì)胞,前者呈強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng),后者呈弱陽(yáng)性或陰性反應(yīng)。②幫助鑒別戈謝細(xì)胞和尼曼-匹克細(xì)胞,前者呈強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng),后者呈弱陽(yáng)性反應(yīng),且空泡中心為陰性反應(yīng)。③幫助鑒別白血病細(xì)胞和腺骨髓轉(zhuǎn)移的腺細(xì)胞,后者呈強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng),陽(yáng)性反應(yīng)物質(zhì)為紅色細(xì)顆粒狀或粗顆粒狀,有時(shí)呈紅色塊狀。白細(xì)胞系統(tǒng):急性淋巴細(xì)胞白血病時(shí)白血病性原始淋巴細(xì)胞的陽(yáng)性反應(yīng)物質(zhì)為紅色粗顆粒狀或紅色塊狀,底色不紅;急性粒細(xì)胞白血病時(shí),白血病性原始粒細(xì)胞的陽(yáng)性反應(yīng)物質(zhì)呈均勻分布的紅色細(xì)顆粒狀或呈均勻紅色;急性單核細(xì)胞白血病時(shí),白血病性原始單核細(xì)胞的陽(yáng)性反應(yīng)物質(zhì)呈紅色細(xì)顆粒狀,彌散分布,有時(shí)在胞漿的邊緣處顆粒較粗大。上??诒玫奶窃旧噭┖蟹?wù)電話