細胞凍存步驟說明：配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液;取對數(shù)生長期的細胞，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗。去除PBS，加入適量胰蛋白酶(覆蓋培養(yǎng)皿表面)把單層生長的細胞消化下來;離心1000rpm，5min;去除胰蛋白酶，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數(shù)，調(diào)節(jié)存液中細胞的較終密度為5×106/ml~1×107/ml;將細胞分裝入凍存管中，每管1~1.5ml;在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者;凍存:標準的凍存程序為降溫速率-1~-2℃/min;當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。無血清細胞凍存液產(chǎn)品特色：不含動物源成分，病毒、霉菌和支原體等污染可能性低。昆明正規(guī)無血清細胞凍存液直銷廠家

細胞凍存液是如何保護細胞的：當溫度進一步下降，細胞內(nèi)外都結(jié)冰，產(chǎn)生冰晶損傷。但是如果在溶液中加入冷凍保護劑，則可保護細胞免受溶質(zhì)損傷和冰晶損傷。因為冷凍保護劑容易同溶液中的水分子結(jié)合，從而降低冰點，減少冰晶的形成，并且通過其摩爾濃度降低未結(jié)冰溶液中電解質(zhì)的濃度，使細胞免受溶質(zhì)損傷，細胞得以在較低溫條件下保存。在復蘇時，一般以很快的速度升溫，1-2分鐘內(nèi)即恢復到常溫，細胞內(nèi)外不會重新形成較大的冰晶，也不會暴露在高濃度的電解質(zhì)溶液中過長的時間，從而無冰晶損傷和溶質(zhì)損傷產(chǎn)生，凍存的細胞經(jīng)復蘇后仍保持其正常的結(jié)構(gòu)和功能。冷凍保護劑對細胞的冷凍保護效果還與冷凍速率、冷凍溫度和復溫速率有關(guān)。而且不同的冷凍保護劑其冷凍保護效果也不一樣。長沙無血清細胞凍存液進貨價待凍存管中細胞混合液完全融化后，立即加入1 ml細胞培養(yǎng)基于該冷凍管中與細胞混合。

血清血液成分（加入抗凝劑）血液凝固析出的淡黃色透明液體。如將血液自血管內(nèi)抽出，放入試管中，不加抗凝劑，則凝血反應，血液迅速凝固，形成膠凍。凝血塊收縮，其周圍所析出之淡黃色透明液體即為血清，也可于凝血后經(jīng)離心取得。在凝血過程中，纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白塊，所以血清中無纖維蛋白原，這一點是與血漿比較大的區(qū)別。而在凝血反應中，血小板釋放出許多物質(zhì)，各凝血因子也都發(fā)生了變化。這些成分都留在血清中并繼續(xù)發(fā)生變化，如凝血酶原變成凝血酶，并隨血清存放時間逐漸減少以至消失。這些也都是與血漿區(qū)別之處。但大量未參加凝血反應的物質(zhì)則與血漿基本相同。為避免抗凝劑的干擾，血液中許多化學成分的分析，都以血清為樣品。

細胞凍存配制含10%DMSO或甘油的細胞凍存液，4℃預冷（新鮮配制的凍存液會產(chǎn)生大量的熱）；取對數(shù)生長期的細胞，用細胞消化酶將單層生長的細胞消化下來；懸浮細胞則直接將細胞收集到離心管中；離心1200rpm，6min；去除上清液，逐漸加入適量預冷的細胞凍存液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中的細胞終濃度為5×10e6/ml~1×10e7/ml；將細胞分裝入凍存管中，每管1~1.5ml；在凍存管上標明細胞的名稱、凍存時間及操作人員姓名；凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1~-2℃/min；到達-80℃時，則可迅速放入液氮中。開蓋之前，用70%的乙醇或異丙醇擦拭瓶身。

無血清細胞凍存液，含多種保護劑成分。一些保護劑，易于穿透細胞，避免細胞內(nèi)部水分子形成冰晶損傷細胞，同時另一些保護劑不能穿透細胞，但可以在冰晶形成之前，優(yōu)先結(jié)合細胞外的水分子，降低細胞外溶液的電解質(zhì)濃度，減少陽離子進入細胞的數(shù)量，為多種保護劑組合，在細胞內(nèi)外進行雙重保護，較大提高了細胞復蘇存活率。無血清細胞凍存液不含牛血清，無動物源組份。2-8℃即可穩(wěn)定保存，無需冷凍，即取即用。凍存細胞，無需程序降溫。凍存細胞復蘇率在90%以上。將融化后的含細胞的冷凍保存液迅速析出置于新鮮培養(yǎng)基中充分混勻。南昌無血清細胞凍存液

同時血清中未知成分和細菌等傳染物質(zhì)會給凍存帶來影響與風險。昆明正規(guī)無血清細胞凍存液直銷廠家

細胞凍存液的配制可選用10%的DMSO加上90%的小牛血清，可以現(xiàn)用現(xiàn)配。除了這個方式，還可選擇20%的DMSO機上80%的小牛血清，配成兩倍的儲存液，在使用時細胞懸液和凍存液按照1:1的比例混勻使用，特別的方便。凍存液可直接置于-20攝氏度的環(huán)境中保存。使用細胞凍存液需要注意以下幾點：1、在使用凍存液前，需要確保細胞凍存液已經(jīng)完全融化，并要輕輕的混勻。對融化后的細胞凍存液要置于4℃的環(huán)境中保存。2、使用凍存液之前應該確保凍存前的細胞生長情況比較良好，比如說細胞需要處于對數(shù)生長期，并且凍存的時候存活率大于90%。3、在使用細胞凍存液期間，為了保證可以發(fā)揮較佳的效果，建議將細胞凍存在液氮之中，這樣可以長時間的進行保存。如果說將細胞置于-80℃的環(huán)境下保存，那么保存的時間大約為1年。4、細胞凍存液如果需要做標記的話，要使用耐受有機溶劑的馬克筆進行標記，以防被酒精或異丙醇等擦掉，不能辨識。昆明正規(guī)無血清細胞凍存液直銷廠家