原代細胞轉(zhuǎn)染實驗要點：轉(zhuǎn)染過程不可添加物品，否則會導致細胞死亡；開始實驗siRNA的用量設(shè)置在終濃度10nM、30nM、50nM、100nM進行摸索，后續(xù)實驗根據(jù)實驗結(jié)果修改。RFectPM可用來轉(zhuǎn)染siRNA、antisenseRNA、microRNA等200bp以內(nèi)的小分子RNA和DNA，可轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)原代細胞。對于大多數(shù)原代細胞，RFectPM的細胞轉(zhuǎn)染陽性率都在80%以上，而轉(zhuǎn)染細胞死亡率不到10%。RFectPM的使用也極其簡便，先將sRNA與RFectPM室溫混合，再將siRNA-RFectPM混合物直接加入含培養(yǎng)基的細胞，血清對轉(zhuǎn)染效果沒有影響，不必刻意添加或更換培養(yǎng)液。用專門的原代細胞培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，較大限度提高原代細胞的生長。南昌原代細胞分離試劑盒廠家批發(fā)價

原代細胞的培養(yǎng)條件：靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)：a.細胞要通過充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性。b.細胞接種時濃度要稍大一些，至少為5×108細胞/L。c.培養(yǎng)基可用Eagle(MEMCorning10-010-CVR)或DMEM(Corning10-013-CVR)培養(yǎng)。d.胎牛血清濃度為10%-80%。e.應(yīng)在37℃5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。f.在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落，漂浮。g.待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀，應(yīng)將原代細胞換液。h.用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時，應(yīng)將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液。南昌原代細胞分離試劑盒廠家批發(fā)價接種的細胞密度過大，會導致營養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)不足。

細胞傳代的方法都有哪些：根據(jù)不同的細胞采取不同的方法。貼壁生長的細胞用消化法傳代；部分貼壁生長的細胞用直接吹打即可傳代；懸浮生長的細胞可以采用直接吹打或離心分離后傳代，或用自然沉降法吸除上清后，再吹打。原代培養(yǎng)的開始傳代應(yīng)注意的問題？細胞沒有生長到足以覆蓋瓶底壁的大部分表面以前，不要急于傳代；原代培養(yǎng)時細胞多為混雜生長，不同的細胞有不同的消化時間，因此要根據(jù)需要注意觀察及時處理，并根據(jù)不同細胞對胰蛋白酶的耐受時間而分離和純化所需要的細胞；吹打細胞時動作要輕巧盡可能減少對細胞的損傷；開始傳代時細胞接種數(shù)量要多一些，使細胞能盡快適應(yīng)新環(huán)境而利于細胞生存和增值；

原代細胞在生物醫(yī)藥領(lǐng)域有不可替代性作用，市場前景廣闊。原代細胞的培養(yǎng)是指直接從機體取下細胞、組織和部位后立即進行培養(yǎng)。因此，較為嚴格地說是指成功傳代之前的培養(yǎng)，此時的細胞保持原有細胞的基本性質(zhì)，如果是正常細胞，仍然保留二倍體數(shù)。但實際上，通常把靠前代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細胞統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)。原代細胞如何傳代接種：原代細胞（primaryculturecell）是指從機體取出后立即培養(yǎng)的細胞。有人把培養(yǎng)的第1代細胞與傳10代以內(nèi)的細統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)。原代細胞不僅普遍應(yīng)用于分子、細胞生物學和生物醫(yī)學基礎(chǔ)研究，如蛋白質(zhì)組學、基因組學、細胞株（系）研究、DNA，RNA和遺傳學研究等，還可應(yīng)用于當今熱門的生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究、藥物的研究等較為嚴格地說是指成功傳代之前的培養(yǎng)，此時的細胞保持原有細胞的基本性質(zhì)。

取材的基本要求和注意事項敘述如下：一、取材的基本要求（1）取材要注意新鮮和保鮮新鮮組織易于培養(yǎng)成功，取材時應(yīng)盡量在4~6h內(nèi)能制作成細胞，盡快入箱培養(yǎng)，若不能即時培養(yǎng)，應(yīng)將組織浸泡于培養(yǎng)液內(nèi)，于4℃存放。若組織塊較大，應(yīng)在除去表面血塊、壞死組織、脂肪和結(jié)締組織后，切碎于培養(yǎng)液內(nèi)4℃存放，但時間不能超過24h。對于已切碎的組織或血液、淋巴組織應(yīng)加入含10%二甲基亞砜的培養(yǎng)基，按細胞凍存方式于液氮中冷凍保存。（2）取材應(yīng)嚴格無菌所取標本材料應(yīng)在無菌條件下進行，為了確保無菌，對所取材料若疑有污染的可能，應(yīng)將所取組織在含高濃。將一管細胞從液氮罐中取出，注意保護手和眼睛。南昌原代細胞分離試劑盒廠家批發(fā)價

會極大提高原代培養(yǎng)的細胞在體外存活率。南昌原代細胞分離試劑盒廠家批發(fā)價

原代細胞的幾大特點：1、干細胞功能表達體現(xiàn)出生命發(fā)育、成熟、衰老的不同階段由于早期的干細胞，增殖分化能力強，新生的細胞數(shù)量大于死亡的細胞數(shù)量，使生命處于生長發(fā)育的佳狀態(tài)。隨著個體發(fā)育的成熟，干細胞增殖分化能力趨于穩(wěn)定，這時的干細胞能及時分化出新的細胞替代衰老的細胞，保證了體內(nèi)細胞的穩(wěn)態(tài)更新，維持各系統(tǒng)的功能穩(wěn)定，使生命處于成熟階段。2、移植的干細胞歸巢與分化干細胞歸巢是由干細胞及其細胞，以及其增殖分化調(diào)控相關(guān)因子所組成的、并且具有動態(tài)平衡特性的局部環(huán)境。移植的自體干細胞，按機體需求遷移到體內(nèi)所需的位置，自行定位于各個組織部位的干細胞巢當中，這一過程稱為原代細胞的歸巢南昌原代細胞分離試劑盒廠家批發(fā)價