原代細胞轉染實驗要點：轉染過程不可添加物品，否則會導致細胞死亡；開始實驗siRNA的用量設置在終濃度10nM、30nM、50nM、100nM進行摸索，后續(xù)實驗根據(jù)實驗結果修改。RFectPM可用來轉染siRNA、antisenseRNA、microRNA等200bp以內(nèi)的小分子RNA和DNA，可轉染絕大多數(shù)原代細胞。對于大多數(shù)原代細胞，RFectPM的細胞轉染陽性率都在80%以上，而轉染細胞死亡率不到10%。RFectPM的使用也極其簡便，先將sRNA與RFectPM室溫混合，再將siRNA-RFectPM混合物直接加入含培養(yǎng)基的細胞，血清對轉染效果沒有影響，不必刻意添加或更換培養(yǎng)液。使細胞得以生存、生長和繁殖(注意整個過程無菌)。長沙原代細胞分離試劑盒供應商

原代細胞標準化培養(yǎng)：由于每種原代細胞培養(yǎng)的條件迥異，而且每個實驗室都摸索出自己的培養(yǎng)條件，而對于一個特定的組織塊，所用培養(yǎng)條件不一樣，得出的所需細胞族群就不一樣，因為每種組織塊都含有不同種類的細胞群，而每一種細胞群在所選定的培養(yǎng)條件下（比如所選蛋白分解酶的種類和條件，細胞因子的種類，基礎培養(yǎng)基的種類或者是培養(yǎng)時間長短）都會得出不同的結果。由于各實驗室采取不同的培養(yǎng)條件，即使是同一塊心組織就有可能造成A實驗室獲得30%的心肌細胞，70%其他種類細胞，而B實驗室卻能獲得70%所需心肌細胞，30%為成纖維、脂肪等種類。這樣的話，即使是做同一項目的實驗，就有可能得出相反的科學結論。因此，早在2004年，美國科學界就質疑之前以原代細胞為主的科研文章，并同時提出原代細胞標準化培養(yǎng)的概念。原代細胞分離試劑盒報價原代細胞來源于或是新近死亡的供體，通過機械或酶方法解離獲得。

原代細胞培養(yǎng)注意事項：1.收到細胞時，要鏡下觀察是否有污染情況；收到細胞的前幾天，要做好各種倍數(shù)的鏡下拍照記錄，以防細胞出現(xiàn)問題后，可以跟公司很好地溝通。2.收到細胞后，不要馬上處理。應置于培養(yǎng)箱中靜置4h以上再操作。如果不著急，可靜置過夜。3.細胞的靠前次傳代，一定要密度高一些傳代，原代細胞傳代密度低，很難長起來。建議1:2-1:3傳代。4.原代細胞傳代時（內(nèi)皮細胞，貼壁為例），0.25%+0.53nM的胰酶消化，1ml消化液37度培養(yǎng)箱內(nèi)消化30sec，再加入5ml培養(yǎng)基（正常消化貼壁細胞，我們使用胰酶和培養(yǎng)基的量是1:1，但是原代細胞必須用大量培養(yǎng)基中和胰酶）。5.原代細胞不建議凍存，因為凍存很容易復活不成功。如果要凍存的話，建議在P2或P3代凍存，凍存液中的血清越多越好，建議比例9（血清）:1（DMSO）。6.原代細胞復蘇時，置于37-38度水浴融化細胞，并加入10ml培養(yǎng)液（正常貼壁細胞復蘇時，也可以使用這種比例，復蘇成活率會較大提高），離心重懸鋪板。

原代細胞如何傳代接種：原代細胞（primaryculturecell）是指從機體取出后立即培養(yǎng)的細胞。有人把培養(yǎng)的第1代細胞與傳10代以內(nèi)的細統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)。原代細胞不僅普遍應用于分子、細胞生物學和生物醫(yī)學基礎研究，如蛋白質組學、基因組學、細胞株（系）研究、DNA，RNA和遺傳學研究等，還可應用于當今熱門的生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究、藥物的研究等。原代細胞在生物醫(yī)藥領域有不可替代性作用，市場前景廣闊。原代細胞的培養(yǎng)是指直接從機體取下細胞、組織和部位后立即進行培養(yǎng)。因此，較為嚴格地說是指成功傳代之前的培養(yǎng)，此時的細胞保持原有細胞的基本性質，如果是正常細胞，仍然保留二倍體數(shù)。但實際上，通常把靠前代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細胞統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)。體外分裂增殖的速度較快，營養(yǎng)成分消耗大，換液時間隔一般較短。

原代細胞的基本結構及作用：1.細胞壁（CellWall）【動物細胞沒有】位于植物細胞的外層,是一層透明的薄壁。它主要是由纖維素和果膠組成的，孔隙較大，物質分子可以自由透過。細胞壁對細胞起著支持和保護的作用。2.細胞膜（CellMembrane)細胞壁的內(nèi)側緊貼著一層極薄的膜，叫做細胞膜。這層由蛋白質分子和磷脂雙層分子組成的薄膜，水和氧氣等小分子物質能夠自由通過，而某些離子和大分子物質則不能自由通過，因此，它除了起著保護細胞內(nèi)部的作用以外，還具有控制物質進出細胞的作用：既不讓有用物質任意地滲出細胞，也不讓有害物質輕易地進入細胞它們產(chǎn)生的有毒物質會影響原代細胞的生長。濟南原代細胞分離試劑盒廠家

確定一種特定細胞類型在低至無血清培養(yǎng)基中正常生長和功能所需的較低條件。長沙原代細胞分離試劑盒供應商

細胞凍存：通常我們不推薦重新凍存原代細胞，因為這可以促進細胞衰老和/或導致功能變化。原代細胞非常敏感，重新凍結可能導致細胞死亡或損傷。與細胞系不同，原代細胞增殖有限，我們建議盡早使用原代細胞進行實驗以防止遺傳漂移，如果你正在使用一個增殖困難的細胞類型，你應該密切監(jiān)測細胞形態(tài)，因為少量混雜的細胞（如成纖維細胞）可能隨著時間的推移，大量生長從而成為主要細胞。正常的原代細胞培養(yǎng)，在無污染的情況下，建議培養(yǎng)基中不加抗體，抗體會影響細胞的某些基因變異從而導致實驗數(shù)據(jù)有差異，所以cellsystems的細胞在分離提取時就考慮到這點，他們不會采用任何抗體去分離和純化的同時，通過酶消化或者離心洗滌的方法讓細胞達到95%以上的純度，這樣得到的實驗數(shù)據(jù)更為準確~長沙原代細胞分離試劑盒供應商