原代細(xì)胞體外培養(yǎng)現(xiàn)狀:原代細(xì)胞自然生長(zhǎng)有兩種方式,錨定依賴或非錨定依賴,這主要取決于它們?cè)隗w內(nèi)的組織來(lái)源:外周血(非錨定依賴)或固體組織部位(錨定依賴)。原代細(xì)胞一旦分離后,24-48h內(nèi)需要進(jìn)行貼壁或起始,開(kāi)始培養(yǎng)。廣義地說(shuō),所有的哺乳動(dòng)物細(xì)胞,無(wú)論其類型或來(lái)源,都需要在與人類生理?xiàng)l件(即37°C,5%CO2)非常相似的條件下生長(zhǎng)。此外,它們還需要一個(gè)pH可調(diào)節(jié)的生長(zhǎng)環(huán)境,并且培養(yǎng)基中需包含細(xì)胞類型特定的營(yíng)養(yǎng)因子、生長(zhǎng)因子、葡萄糖和/或物品。為了確定一種特定細(xì)胞類型在低至無(wú)血清培養(yǎng)基中正常生長(zhǎng)和功能所需的較低條件,相關(guān)研究工作已經(jīng)揭示了生長(zhǎng)培養(yǎng)基必須包含的基本成分:胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白、葡萄糖和各種鹽、維生素和氨基酸1。然而,除此之外培養(yǎng)基也可以含有組織和細(xì)胞特異性細(xì)胞因子和增殖、生存所需的生長(zhǎng)因子。例如,原代內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞都需要添加L-谷氨酰胺和成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF),但是,應(yīng)該添加額外的組織特異性因子,以防止成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)。原代細(xì)胞是出了名的難養(yǎng),對(duì)培養(yǎng)環(huán)境和實(shí)驗(yàn)操作的要求更苛刻。青島正規(guī)原代細(xì)胞分離試劑盒廠家直銷
原代細(xì)胞如何傳代接種:原代細(xì)胞(primaryculturecell)是指從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞。有人把培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以內(nèi)的細(xì)統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。原代細(xì)胞不僅普遍應(yīng)用于分子、細(xì)胞生物學(xué)和生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究,如蛋白質(zhì)組學(xué)、基因組學(xué)、細(xì)胞株(系)研究、DNA,RNA和遺傳學(xué)研究等,還可應(yīng)用于當(dāng)今熱門(mén)的生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究、藥物的研究等。原代細(xì)胞在生物醫(yī)藥領(lǐng)域有不可替代性作用,市場(chǎng)前景廣闊。原代細(xì)胞的培養(yǎng)是指直接從機(jī)體取下細(xì)胞、組織和部位后立即進(jìn)行培養(yǎng)。因此,較為嚴(yán)格地說(shuō)是指成功傳代之前的培養(yǎng),此時(shí)的細(xì)胞保持原有細(xì)胞的基本性質(zhì),如果是正常細(xì)胞,仍然保留二倍體數(shù)。但實(shí)際上,通常把靠前代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。昆明正規(guī)原代細(xì)胞分離試劑盒供應(yīng)商很適合用于藥物測(cè)試、細(xì)胞分化和轉(zhuǎn)化等實(shí)驗(yàn)研究。
細(xì)胞傳代的方法都有哪些:根據(jù)不同的細(xì)胞采取不同的方法。貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞用消化法傳代;部分貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞用直接吹打即可傳代;懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞可以采用直接吹打或離心分離后傳代,或用自然沉降法吸除上清后,再吹打。原代培養(yǎng)的開(kāi)始傳代應(yīng)注意的問(wèn)題?細(xì)胞沒(méi)有生長(zhǎng)到足以覆蓋瓶底壁的大部分表面以前,不要急于傳代;原代培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞多為混雜生長(zhǎng),不同的細(xì)胞有不同的消化時(shí)間,因此要根據(jù)需要注意觀察及時(shí)處理,并根據(jù)不同細(xì)胞對(duì)胰蛋白酶的耐受時(shí)間而分離和純化所需要的細(xì)胞;吹打細(xì)胞時(shí)動(dòng)作要輕巧盡可能減少對(duì)細(xì)胞的損傷;開(kāi)始傳代時(shí)細(xì)胞接種數(shù)量要多一些,使細(xì)胞能盡快適應(yīng)新環(huán)境而利于細(xì)胞生存和增值;隨消化分離而脫落的組織塊也可一并傳入新的培養(yǎng)瓶。
膠原酶的配制:建議看相關(guān)的文獻(xiàn)進(jìn)行膠原酶的配制。小編常用的是DMEM進(jìn)行配制,配制好的膠原酶消化液放置在37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱(注意現(xiàn)用現(xiàn)配)。胰酶(酶聯(lián)合法獲取原代細(xì)胞中會(huì)加入胰酶,相關(guān)文章也蠻多的)膠原酶消化時(shí)間:根據(jù)組織特性,消化時(shí)間會(huì)有差異。以小鼠腎細(xì)胞為例,加入膠原酶Ⅰ進(jìn)行消化后,放入37℃培養(yǎng)箱中消化45min~1h左右,期間每10min中震蕩一次,知道組織塊幾乎完全消失為止(若是組織塊剪得非常細(xì)小,時(shí)間可以短一些,30min左右即可)。原代細(xì)胞的獲?。好赶ǎ核迷噭耗z原酶和胰酶。永生化細(xì)胞系通常具有更快的倍增時(shí)間并可持續(xù)地分裂。
原代細(xì)胞的小知識(shí):凍存通常我們不推薦重新凍存原代細(xì)胞,因?yàn)檫@可以促進(jìn)細(xì)胞衰老和/或?qū)е鹿δ茏兓?。原代?xì)胞非常敏感,重新凍結(jié)可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡或損傷。與細(xì)胞系不同,原代細(xì)胞增殖有限,我們建議盡早使用原代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以防止遺傳漂移,如果你正在使用一個(gè)增殖困難的細(xì)胞類型,你應(yīng)該密切監(jiān)測(cè)細(xì)胞形態(tài),因?yàn)樯倭炕祀s的細(xì)胞(如成纖維細(xì)胞)可能隨著時(shí)間的推移,大量生長(zhǎng)從而成為主要細(xì)胞。正常的原代細(xì)胞培養(yǎng),在無(wú)污染的情況下,建議培養(yǎng)基中不加抗體,抗體會(huì)影響細(xì)胞的某些基因變異從而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)有差異,所以cellsystems的細(xì)胞在分離提取時(shí)就考慮到這點(diǎn),他們不會(huì)采用任何抗體去分離和純化的同時(shí),通過(guò)酶消化或者離心洗滌的方法讓細(xì)胞達(dá)到95%以上的純度,這樣得到的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)更為準(zhǔn)確。貼壁細(xì)胞多來(lái)自部位組織,而懸浮細(xì)胞多來(lái)自血液系統(tǒng)的細(xì)胞。昆明正規(guī)原代細(xì)胞分離試劑盒供應(yīng)商
能夠進(jìn)行懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞,其生命力一般都比較旺盛。青島正規(guī)原代細(xì)胞分離試劑盒廠家直銷
細(xì)胞凍存:通常我們不推薦重新凍存原代細(xì)胞,因?yàn)檫@可以促進(jìn)細(xì)胞衰老和/或?qū)е鹿δ茏兓?。原代?xì)胞非常敏感,重新凍結(jié)可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡或損傷。與細(xì)胞系不同,原代細(xì)胞增殖有限,我們建議盡早使用原代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以防止遺傳漂移,如果你正在使用一個(gè)增殖困難的細(xì)胞類型,你應(yīng)該密切監(jiān)測(cè)細(xì)胞形態(tài),因?yàn)樯倭炕祀s的細(xì)胞(如成纖維細(xì)胞)可能隨著時(shí)間的推移,大量生長(zhǎng)從而成為主要細(xì)胞。正常的原代細(xì)胞培養(yǎng),在無(wú)污染的情況下,建議培養(yǎng)基中不加抗體,抗體會(huì)影響細(xì)胞的某些基因變異從而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)有差異,所以cellsystems的細(xì)胞在分離提取時(shí)就考慮到這點(diǎn),他們不會(huì)采用任何抗體去分離和純化的同時(shí),通過(guò)酶消化或者離心洗滌的方法讓細(xì)胞達(dá)到95%以上的純度,這樣得到的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)更為準(zhǔn)確~青島正規(guī)原代細(xì)胞分離試劑盒廠家直銷