RNA指的是核糖核酸。真核生物體的遺傳物質(zhì)存在于細胞核內(nèi),多數(shù)的真核生物使用DNA也就是脫氧核糖核酸來作為遺傳的中心物質(zhì),但是少量的病菌遺傳物質(zhì)可以是RNA。正因為病菌的遺傳物質(zhì)是RNA,所以可以通過檢測病菌的RNA是否存在,或者其濃度和含量來判斷是否存在相應(yīng)的病菌傳染,傳染的程度及病菌是否仍在大量復(fù)制。一個核糖核苷酸分子由磷酸,核糖和堿基構(gòu)成。RNA的堿基主要有4種,即A腺嘌呤、G鳥嘌呤、C胞嘧啶、U尿嘧啶,其中,U(尿嘧啶)取代了DNA中的T。RNA是核糖核酸的縮寫。存在于生物細胞以及部分病菌、類病菌中的遺傳信息載體。RNA由核糖核苷酸經(jīng)磷酸二酯鍵縮合而成長鏈狀分子。專門的高鹽緩沖系統(tǒng)允許RNA物質(zhì)基團結(jié)合到旋轉(zhuǎn)柱的玻璃纖維基質(zhì)上,同時使污染物通過柱被有效地洗去。RNA在260nm波長處有較大的吸收峰。重慶RNA提取試劑直銷廠家
眾所周知,RNA提取是一項困難的工作。常見的挑戰(zhàn)包括RNA降解、低產(chǎn)率和/或純度以及DNA污染。此外,不同的樣品類型有自己獨特的特性,需要特別注意。例如,微生物(如革蘭氏陽性/陰性細菌、菌類、古生菌等)的細胞壁堅硬,不易被化學(xué)和酶解。其他樣本類型,如糞便和植物含有壓制劑(如多酚類、腐殖酸/黃腐酸、單寧酸等),可與RNA共沉淀,并可壓制下游分析,如RT-qPCR。RNA是不穩(wěn)定的,極易降解。許多樣品含有高水平的RNase,會快速降解RNA。為了使之較小化,較好在采集時穩(wěn)定樣本中的RNA。常用的樣品穩(wěn)定方法包括液氮快速冷凍、干冰乙醇浴或-80°C冷凍室。然而,這些方法也有缺點,如核酸的凍融損傷,并不是所有的研究人員在采集樣品時都能立即使用這些方法。正規(guī)RNA提取試劑哪里買在裂解液上游加入酶裂解步驟(如蛋白酶 K、溶菌酶等)。
通用多糖多酚植物RNA提取試劑盒:1、多糖多酚植物RNA提取試劑盒整合了在提取過程中去除干擾物的技術(shù),已成功用于葡萄,中草藥等多糖含量高的樣品,成功用于棉花等多酚含量高的樣品。另外華越洋還開發(fā)了糖類清理劑,PCR壓制物清理劑,核酸提取優(yōu)化劑,樣品核酸穩(wěn)定劑,RNA組織樣品保存液等核酸提取輔助產(chǎn)品。2、適用材料普遍:尤其適合解決多醣多酚,色素等次級代謝物豐富的植物樣本難題。昆蟲RNA柱式提取試劑盒特點:操作簡單快速,處理一個樣品只需要約十分鐘。RNA純度高,平均OD260/280一般都在2.0左右,能夠有效去除大多數(shù)昆蟲中的多糖污染。適用于各種昆蟲組織,每100mg組織能提取到20~30μg總RNA。
總RNA提取試劑試劑能促進不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如,從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色,可見許多介于7kb和15kb之間不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),兩條優(yōu)勢核糖體~5kb(28S)和~2kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間(tRNA,5S)。當(dāng)抽提的RNA用TE稀釋時其A260/A280比值≥1.8。注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳,28S的位置大約在2kb,18S大約在1kb的位置,不同濃度的凝膠位置變化較大。注意事項:樣品用總RNA提取試劑勻漿后,如果不即刻加入氯仿之前,置于-70°C下可放置一個月以上。保存在75%乙醇中的RNA沉淀,2-8°C可以保存一周,-20°C條件下可以保存1年。RNA半衰期比較短,容易降解,建議提取后盡快進行后續(xù)實驗,如反轉(zhuǎn)錄成cDNA,NorthernBlot等。mRNA是依據(jù)DNA序列轉(zhuǎn)錄而成的蛋白質(zhì)合成模板。
RNA提取試劑注意事項:1、必須戴一次性手套操作,且盡量不要對著RNA樣品說話,以防RNA酶污染。建議戴一次性口罩操作。2、TRIReagent含有毒物質(zhì)苯酚,避免接觸皮膚或吸入。為防止濺入眼睛,請戴防護眼鏡或使用透明保護屏。如皮膚接觸TRIReagent,請立即用大量去垢劑和水沖洗,如仍有不適,請聽取醫(yī)生意見。3、TRIReagent抽提總RNA的同時,理論上也可抽提蛋白和DNA,但未經(jīng)測試。4、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。是基于異硫氰酸胍/苯酚法的一種即用的從細胞和組織中提取總RNA的試劑,在樣品裂解或勻漿過程中取出水相,用異丙醇可沉淀回收RNA;中間層用乙醇沉淀可回收DNA;有機相用異丙醇沉淀可回收蛋白。該EpiQuik?總RNA提取試劑盒提供了一種快速,簡單,經(jīng)濟有效的方法。南京RNA提取試劑銷售廠家
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拭子RNA提取試劑的選擇?拭子樣本的量與提取的核酸量成正比,如果要提高核酸得率,也可通過增加樣本量來實現(xiàn)。一般先取一根拭子的涮洗液樣本,然后進行提取,如結(jié)果不理想可考慮增加樣本量或重新采樣。但如果增加樣本量或重新采樣還不能得到滿意結(jié)果,應(yīng)及時考慮更換試劑盒。目前國內(nèi)常用的拭子核酸提取試劑有Q、Biog等。根據(jù)我們的經(jīng)驗,Q和T品牌試劑盒的拭子RNA提取得率(一根口腔拭子在口咽部來回刮擦10次)在0.5-3.5ug。同樣處理的口咽拭子,Biog試劑盒的提取得率在1-4ug,基本上都能滿足下游PCR相關(guān)實驗的要求。重慶RNA提取試劑直銷廠家