外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法，這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多，但是純度不足，電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn)，也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心，這種操作簡單、省時，不影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高，但是前期準(zhǔn)備工作繁雜，耗時，量少。、機(jī)械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會破壞外泌體等，因此發(fā)表文章時易受質(zhì)疑。成都外泌體提取試劑廠家直銷

外泌體是一種存在于細(xì)胞外的多囊泡體，可通過細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成多泡內(nèi)涵體，內(nèi)涵體與細(xì)胞膜融合后釋放其中的小囊泡。外泌體的直徑在40-110nm之間，其中包含RNA、蛋白質(zhì)、microRNA、DN**段等多種物質(zhì)，存在于血液、唾液、尿液、腦脊液和母乳等多種體液中。外泌體從發(fā)現(xiàn)至今已有30多年的歷史，雖然較初被認(rèn)為可能是細(xì)胞的“垃圾”，所以才被排出來，但是近年來研究表明外泌體具有功能活性并可進(jìn)行細(xì)胞間信息傳遞。如今，研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)外泌體在抗原提呈細(xì)胞中呈遞抗原程中、一些病癥細(xì)胞發(fā)生的發(fā)展、神經(jīng)細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中都發(fā)揮著重要作用。專利申請利用分離培養(yǎng)人尿液來源細(xì)胞并收集培養(yǎng)基來進(jìn)行體外培養(yǎng)。杭州外泌體提取試劑廠家直銷由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體，大于一般蛋白質(zhì)。

外泌體相關(guān)蛋白質(zhì)與肺病的診斷：近年來，高通量質(zhì)譜分析被普遍地應(yīng)用于篩選NSCLC外泌體蛋白的研究，這為我們揭示了更多具有生物標(biāo)志物價值的分子。Birgitte等采用微陣列芯片技術(shù)研究了431例肺病患者和150例對照者血漿外泌體中的蛋白表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)CD151、CD171和TSPAN8這三種蛋白表達(dá)不光能區(qū)分一些病癥與正常組織，同時也能區(qū)分各種肺病的組織亞型。此外，聯(lián)合應(yīng)用這三種蛋白診斷NSCLC的AUC達(dá)到0.74。Clark等采用納升液聯(lián)用技術(shù)（nano-ESI-LC-MS/MS）分析了來自正常支氣管上皮細(xì)胞系和兩個攜帶NSCLC細(xì)胞系的外泌體的蛋白表達(dá)譜，從中篩選出如細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子、溶酶體膜糖蛋白2等多種存在顯著性差異表達(dá)的蛋白，同時檢測分析這些蛋白有助于提高NSCLC診斷的敏感性和特異性。由于國內(nèi)有關(guān)外泌體提取試劑的缺乏，我國對外泌體的研究還基本依賴于過程繁瑣的超速離心和進(jìn)口提取試劑盒。

外泌體的提取、分離方法：免疫親和層析法。免疫親和層析法是利用生物體內(nèi)存在的抗原、抗體之間高度特異性的親和力進(jìn)行分離的方法，主要用于生物大分子的分離、純化。將其應(yīng)用于外泌體的分離主要是借助外泌體表面的特異性抗體，如TSG101或四跨膜蛋白。此方法的原理是利用抗原抗體的特異性結(jié)合，只有囊泡表面有特異性的抗體才可以被識別，這使得提取的外泌體純度高，但是產(chǎn)量低。Zarovni等分別用超速離心、密度梯度離心和免疫層析法，從血漿和細(xì)胞上清中提取外泌體蛋白，結(jié)果表明，免疫親和層析法得到的外泌體表面存在多種標(biāo)記蛋白(Alix、CD9、CD63)，同時，ELISA和PCR結(jié)果也證明了該方法的可行性。也可以作為治病手段，未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床治病。

外泌體的提取方法：1、色譜法。色譜法是利用根據(jù)凝膠孔隙的孔徑大小與樣品分子尺寸的相對關(guān)系而對溶質(zhì)進(jìn)行分離的分析的方法。樣品中大分子不能進(jìn)入凝膠孔，只能沿多孔凝膠粒子之間的空隙通過色譜柱，首先被流動相洗脫出來；小分子可進(jìn)入凝膠中絕大部分孔洞，在柱中受到更強地滯留，更慢地被洗脫出。分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設(shè)備，應(yīng)用不普遍。2、超濾離心。由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體，大于一般蛋白質(zhì)，利用不同截留相對分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對樣品進(jìn)行選擇性分離，便可獲得外泌體。超濾離心法簡單高效，且不影響外泌體的生物活性，是提取細(xì)胞外泌體的一種新方法通過超速離心(120000g/分鐘)20小時以上才能獲得足夠的外泌體量。濟(jì)南外泌體提取試劑直銷廠家

外泌體提?。夯诰酆衔锏某恋砑夹g(shù)通常包括將樣本與含聚合物的沉淀溶液混合。成都外泌體提取試劑廠家直銷

2015年，隨著精細(xì)醫(yī)學(xué)概念的提出，越來越多的人開始關(guān)注如何能做到疾病的精確診斷和治病。外泌體作為一個新型的研究熱點，由于它在體內(nèi)存在的普遍性和獲取的便捷性，已經(jīng)成為了疾病診斷治病的潛在有效方式，在精細(xì)醫(yī)學(xué)發(fā)展上有著光明的前景。多泡內(nèi)體的腔內(nèi)囊泡，要么分選進(jìn)溶酶體將物質(zhì)降解，要么作為外泌體分泌到胞外環(huán)境中。將膜分選到不同的腔內(nèi)囊泡群中的機(jī)制尚不清楚。該研究發(fā)現(xiàn)物質(zhì)被分選到內(nèi)體膜上的不同子域中，并且外泌體相關(guān)結(jié)構(gòu)域向內(nèi)體腔的轉(zhuǎn)移不取決于ESCRT（運輸所需的內(nèi)體分選復(fù)合體）的功能，但是需要鞘脂神經(jīng)酰胺。純化的外體富含神經(jīng)酰胺，并且在神經(jīng)鞘磷脂酶被壓制后外泌體釋放減少。這些結(jié)果確定了內(nèi)體內(nèi)膜運輸和外泌體形成的途徑。成都外泌體提取試劑廠家直銷