以前在另一家實(shí)驗(yàn)室的時(shí)候，凍存細(xì)胞根本就沒(méi)有講究這些標(biāo)準(zhǔn)操作。凍存的細(xì)胞有293T、PT67、C2C12、MEF(鼠胚胎成纖維細(xì)胞）、HelaS3、HelaD、U2OS、HKC、RK3E、ECO、H292、HSY、COS7、SupT1等。將細(xì)胞酶消化后直接參與離心，加入凍存液（含90%的血清和10%的DMS0)，直接放在-80℃冰箱。兩三天后移入液氮中，較久保存，幾年后細(xì)胞的活力仍沒(méi)有什么受損，照常能復(fù)蘇，成活率高。但有三點(diǎn)須注意：（1）一是細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)要好，不能長(zhǎng)得過(guò)稀，同樣也不能過(guò)密，細(xì)胞的狀態(tài)看起來(lái)相當(dāng)健康。70%密度的要保存的細(xì)胞須再長(zhǎng)24h才能全滿，萬(wàn)一細(xì)胞狀態(tài)不好，可以酶消化后再繁殖一次；（2）凍存細(xì)胞的量要留心，不能太密也不能太稀，一般1OOmm培養(yǎng)皿的細(xì)胞凍存為3~4管；（3）存放在-80℃冰箱的時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)，一兩天后轉(zhuǎn)移到液氮罐里。我們也曾取出存放在-80℃冰箱的細(xì)胞，半年還有30%~50%的細(xì)胞有活性，但一年的細(xì)胞就沒(méi)有活的。無(wú)血清凍存液用途：為確保產(chǎn)品質(zhì)量，請(qǐng)避免反復(fù)凍融相關(guān)產(chǎn)品。唐山正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液?jiǎn)蝺r(jià)

無(wú)血清細(xì)胞凍存液凍存雜交瘤細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)：簡(jiǎn)單、方便、快捷。1.即用型，無(wú)需現(xiàn)配，可直接使用。2.可孔板原位凍存，可微量?jī)龃?，無(wú)需使用凍存管。3.無(wú)需程序降溫，可直接放置-80℃凍存，操作簡(jiǎn)單。4.不含血清，較大減少細(xì)胞污染。5.因不含血清，批次間差異小。6.無(wú)需液氮，-80℃冰箱長(zhǎng)期凍存。無(wú)血清細(xì)胞凍存液凍存雜交瘤細(xì)胞的方法：1.驗(yàn)證陽(yáng)性克隆的細(xì)胞培養(yǎng)孔，將培養(yǎng)基上清小心吸取干凈；2.加入適量Cellregen無(wú)血清細(xì)胞凍存液，充分浸潤(rùn)細(xì)胞（無(wú)需消化細(xì)胞）；3.蓋上蓋板，直接放入-80℃冰箱，長(zhǎng)期冷凍保存。金華正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液廠家批發(fā)價(jià)無(wú)血清細(xì)胞凍存液：凍存細(xì)胞復(fù)蘇率在90%以上。

干細(xì)胞無(wú)血清凍存液操作事項(xiàng)：使用說(shuō)明：1. 細(xì)胞消化和計(jì)數(shù)，用胰酶對(duì)待凍存的細(xì)胞進(jìn)行消化，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。2. 1000轉(zhuǎn)/min離心5分鐘（4℃），去掉上清。3. 根據(jù)細(xì)胞計(jì)數(shù)的情況，加入適量的干細(xì)胞無(wú)血清凍存液，使細(xì)胞密度在1×106左右（或根據(jù)自己希望達(dá)到的細(xì)胞密度）。4. 輕輕地重懸細(xì)胞（務(wù)必重懸均勻）。5. 將重懸的細(xì)胞按等份加入到滅菌的凍存管（需提前做好標(biāo)記或者貼上標(biāo)簽）中，旋緊凍存管蓋。6. 將凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒直接放入-80℃。7. 第二天將細(xì)胞從-80℃轉(zhuǎn)移到液氮中。注意事項(xiàng)：1.用處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行凍存。2.控制好胰酶的消化時(shí)間，切記消化過(guò)度，會(huì)影響復(fù)蘇效果。3.重懸細(xì)胞的過(guò)程中，請(qǐng)務(wù)必要輕柔，以免損傷細(xì)胞，但同時(shí)也一定要充分重懸，這樣細(xì)胞在復(fù)蘇時(shí)才不會(huì)成團(tuán)。4.細(xì)胞操作請(qǐng)注意無(wú)菌。

無(wú)血清細(xì)胞凍存液的使用方法及注意事項(xiàng)：1.將分裝好的細(xì)胞凍存管，直接置于-80 度冰箱過(guò)夜保存，次日投入液氮中保存即可 備注：1、凍存過(guò)程中，第2 步在冰袋附近操作時(shí)，低溫避免保護(hù)劑對(duì)細(xì)胞造成損傷。 2、細(xì)胞凍存管一定要保證完全密封，否則在復(fù)蘇過(guò)程中有可能會(huì)炸 （1）提前開(kāi)啟水浴鍋，溫度調(diào)節(jié)到37（2）將凍存的細(xì)胞冷凍管從液氮中取出，迅速置于水浴鍋中融化，盡量1min 融化，時(shí)間越短，對(duì)細(xì)胞影響越小。（3）將融化后的含細(xì)胞的冷凍保存液迅速析出置于新鮮培養(yǎng)基中充 分混勻，（如細(xì)胞冷凍保存液為500ul，則加入到5ml 新鮮培養(yǎng)基中， 如細(xì)胞冷凍保存液位1ml，則加入10ml 新鮮培養(yǎng)基中。）（4）混勻后立即離心，800 轉(zhuǎn)，3min 即可離心結(jié)束后棄上清，加入預(yù)溫的新鮮培養(yǎng)液。（5）混勻后分瓶置于二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（二氧化碳濃度根據(jù)培 養(yǎng)基要求決定，通常為5%【注意事項(xiàng)】細(xì)胞系 凍存密度 備注 正常人成纖維細(xì)胞 1～310 cells/ml雜交瘤細(xì)胞 1～310 cells/ml某些hybridoma 會(huì)因冷凍濃度 太高而在解凍24小時(shí)后死去。無(wú)血清凍存液特性：適合各種動(dòng)物細(xì)胞。

細(xì)胞凍存液的操作步驟：1.配置含10%DMSO或凡士林、10～20%小牛血清的凍存細(xì)胞培養(yǎng)液;2.取對(duì)數(shù)成長(zhǎng)期的體細(xì)胞，除去舊細(xì)胞培養(yǎng)液，用PBS清理。3.除去PBS，添加適量蛋白酶(遮蓋細(xì)胞培養(yǎng)皿表層)把單面生長(zhǎng)發(fā)育的體細(xì)胞消化吸收出來(lái);4.抽濾1000rpm，5min;5.除去蛋白酶，添加適量配置好的凍存細(xì)胞培養(yǎng)液，用塑料吸管輕輕地吹打使體細(xì)胞勻稱，記數(shù)，調(diào)整凍存液中體細(xì)胞的較后相對(duì)密度為5牙周106/ml～1牙周107/ml;6.將體細(xì)胞分裝進(jìn)凍存管中，每管1～1.5ml;7.在凍存管上標(biāo)出體細(xì)胞的名字，凍存時(shí)間及作業(yè)者;8.凍存：標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序流程為減溫速度-1～-2℃/min;當(dāng)溫度達(dá)-25℃下列時(shí)，可升至-5℃～-10℃/min;到-100℃時(shí)，則可快速滲入液態(tài)氮中。也可將配有體細(xì)胞的凍存管放進(jìn)-20℃電冰箱2h，隨后放進(jìn)-70℃電冰箱中留宿，取下凍存管，移進(jìn)液氮容器內(nèi)。無(wú)血清凍存液使用方法：儲(chǔ)存條件：2-8C保存，年有效：-20C保存，兩年有效。溫州正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液廠家推薦

無(wú)血清凍存液用途：本產(chǎn)品請(qǐng)于保質(zhì)期內(nèi)使用，超過(guò)保質(zhì)期，必須放棄使用。唐山正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液?jiǎn)蝺r(jià)

無(wú)血清細(xì)胞凍存液的用途：無(wú)血清細(xì)胞凍存液，含多種保護(hù)劑成分。一些保護(hù)劑，易于穿透細(xì)胞，避免細(xì)胞內(nèi)部水分子形成冰晶損傷細(xì)胞，同時(shí)另一些保護(hù)劑不能穿透細(xì)胞，但可以在冰晶形成之前，優(yōu)先結(jié)合細(xì)胞外的水分子，降低細(xì)胞外溶液的電解質(zhì)濃度，減少陽(yáng)離子進(jìn)入細(xì)胞的數(shù)量，為多種保護(hù)劑組合，在細(xì)胞內(nèi)外進(jìn)行雙重保護(hù)，較大提高了細(xì)胞復(fù)蘇存活率。無(wú)血清細(xì)胞凍存液不含牛血清，無(wú)動(dòng)物源組份。2-8℃即可穩(wěn)定保存，無(wú)需冷凍，即取即用。凍存細(xì)胞，無(wú)需程序降溫。凍存細(xì)胞復(fù)蘇率在90%以上。唐山正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液?jiǎn)蝺r(jià)

蘇州君欣生物科技有限公司位于江蘇省張家港市塘橋鎮(zhèn)東城科技創(chuàng)業(yè)園C幢二樓，是一家專業(yè)的蘇州君欣生物科技有限公司的經(jīng)營(yíng)范圍包括原代細(xì)胞的定制以及相關(guān)產(chǎn)品的配套銷售與服務(wù)，干細(xì)胞染色體核型分析與鑒定、無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基以及無(wú)血清細(xì)胞凍存等系列產(chǎn)品的生產(chǎn)與銷售，動(dòng)物疾病模型的構(gòu)建以及藥物效果的驗(yàn)證等領(lǐng)域。公司。致力于創(chuàng)造***的產(chǎn)品與服務(wù)，以誠(chéng)信、敬業(yè)、進(jìn)取為宗旨，以建蘇州君欣生物產(chǎn)品為目標(biāo)，努力打造成為同行業(yè)中具有影響力的企業(yè)。公司以用心服務(wù)為重點(diǎn)價(jià)值，希望通過(guò)我們的專業(yè)水平和不懈努力，將蘇州君欣生物科技有限公司的經(jīng)營(yíng)范圍包括原代細(xì)胞的定制以及相關(guān)產(chǎn)品的配套銷售與服務(wù)，干細(xì)胞染色體核型分析與鑒定、無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基以及無(wú)血清細(xì)胞凍存等系列產(chǎn)品的生產(chǎn)與銷售，動(dòng)物疾病模型的構(gòu)建以及藥物效果的驗(yàn)證等領(lǐng)域。等業(yè)務(wù)進(jìn)行到底。自公司成立以來(lái)，一直秉承“以質(zhì)量求生存，以信譽(yù)求發(fā)展”的經(jīng)營(yíng)理念，始終堅(jiān)持以客戶的需求和滿意為重點(diǎn)，為客戶提供良好的原代細(xì)胞，無(wú)血清細(xì)胞凍存液，干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基，動(dòng)物疾病模型，從而使公司不斷發(fā)展壯大。