鼠尾膠原包被培養(yǎng)板：胎干細胞在體外可誘導分化為血管內皮細胞,進而形成血管,因而成為血管組織工程理想的種子細胞來源之一。目的:探討建立定向誘導人胚胎干細胞向血管內皮細胞分化的方法。方法:在小鼠胚胎成纖維細胞飼養(yǎng)層上培養(yǎng)人胚胎干細胞H1,將H1細胞團塊轉移到鼠尾膠原包被的培養(yǎng)板,貼壁24-48h后,培養(yǎng)基換為含不同輔助因子和內皮細胞生長添加劑的EGM-2內皮細胞培養(yǎng)基。結果與結論:①在EGM-2內皮細胞培養(yǎng)基誘導下,細胞逐步表達內皮細胞特異性標記基因VEGFR-2、PECAM1、vWF、CD34、VE-cadherin、GATA-2。②分化細胞表達內皮細胞特異性標記VE-cadherin、CD31。③分化細胞具有吞噬低密度脂蛋白功能。說明將人胚胎干細胞接種在鼠尾膠原包被培養(yǎng)板上,通過EGM-2內皮培養(yǎng)體系誘導,可直接分化為功能性血管內皮細胞。為研究胞外基質對誘導胚胎干細胞血管內皮細胞分化的作用以及相關信號分子機制打下了基礎。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便，成本低廉。鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基，它具有促進體外培養(yǎng)細胞（特別是上皮細胞）貼壁的作用。重慶正規(guī)鼠尾膠原廠家

鼠尾膠原，10mg包裝，配制方法如下：1.配0.1M的乙酸溶液100ml。即取575ul冰乙酸加超純水至100ml，容量瓶配制比較準確。2.用吸管吸取10ml剛配好的0.1M乙酸溶液（不要用*加，吸十次不如加一次z準確），加入盛膠原的瓶中，輕輕顛倒，不要震蕩，蛋白 容易起泡。幾分鐘即可，蛋白質非常好溶解。3.將膠原溶液移入事先壓好的玻璃瓶中，比青霉素瓶大點的就行。用*在瓶底加1ml氯仿，打到一檔就行，避免加入氣泡。然后4度過夜除菌。4.第二天將上層膠原溶液分裝進EP管中。用封口膜封口，4度保存，勿冷凍。珠海鼠尾膠原廠家現貨它是研究成纖維細胞與細胞外基質之間以及細胞之間相互作用的良好模型。

鼠尾膠原的提取步驟：離心膠原溶液(1600rpm，15 min)，取上清；置300 目篩網于濾器（高壓滅菌）中，抽濾上清 每600mL 上述粗提液中加100 mL 0.14 mol/L NaOH 溶液，離心(18000 rpm，12 min)，棄上 清，留絮狀沉淀；將絮狀沉淀轉移至錐形瓶中，用0.1 mol/L 的醋酸溶液(200 mL)振搖促其重新 溶解。 膠原醋酸液在-70較低溫冰凍兩天。 用一次性注射器戳洞封蓋冰凍好的含膠原培養(yǎng)皿保鮮膜，真空冷凍干燥呈干棉花樣外觀（至少24 準確稱取配置3mg/mL 的膠原醋酸液，加入消毒過的攪拌子，冷房攪拌數日得絮狀膠原。 10. 膠原蛋白凝膠制備預試- 膠原液：5*DMEM：血清：10*HEPES 液=6：2：1：1，充分混勻； 0.5 NaOH調定pH 值至7.2（綜合DMEM顏色變化和pH試紙判斷。

一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法：1.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸溶液溶解沉淀物，成透明澄清黏稠溶液；在冰水浴中，調節(jié)pH = 6.5，用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中，不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出，4°C沉淀10小時，去除上清液，去除上清液，絮狀溶液高速冷凍離心處理，收集沉淀； 2.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸再次溶液溶解沉淀物，成透明澄清黏稠溶液，冰水浴中，調節(jié)PH = 6.5 ;溶液依次通過陽離子交換樹脂、陰離子交換樹脂進行脫鹽處理； (8)將脫鹽后的膠原蛋白溶液，-40至-20°C預凍2?4小時，然后真空冷凍干燥，凍干產品經進一步處理得到含水率在3%以下的膠原蛋白微粉，滅菌、包裝，得到成品膠原蛋白粉末?？梢栽跓o菌細胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒。在接種細胞前用無菌的水漂洗。

三維膠原的制備：鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上，pH 7左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L 乙酸中，在成膠過程中需要加入0.06X 體積的 0.1mol/L NaOH 來中和。需要的溶液 ( 均需要 無菌 、 預冷 ):10xPBS( 可含10 mg/L的酚紅用于 pH 指示 )或 10x 培養(yǎng)液 , 0.1mol/L NaOH, 0.1mol/L 乙酸(一般不用), 雙蒸水A．不含細胞的三維膠原的制備（以配制1毫升，1mg/ml三維膠為例）：將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中，加入690ul H2O。然后加到12ul 0.1mol/L NaOH中（如果反過來把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結），立即混勻。鼠尾膠原醋酸溶解：建議將溶液轉移到擰口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。貴陽正規(guī)鼠尾膠原哪里買

鼠尾膠原醋酸溶解：在2-8度中放置過夜。重慶正規(guī)鼠尾膠原廠家

含細胞三維膠原凝膠的制備（以配制1mg/mL三維膠1mL為例）準備好懸浮于培養(yǎng)液的細胞，并放置于冰浴中。將200μL本品加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結），立即混勻。再加入23μL10×PBS或10×培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中（混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時需要測定pH值）。加入760μL的細胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后，加入適當體積的細胞培養(yǎng)液，轉移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。本品在室溫下pH中性時可迅速成膠，在操作過程中要盡量保持低溫。保存條件4℃保存，切勿凍存，有效期一年。重慶正規(guī)鼠尾膠原廠家

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