目前的主流觀點(diǎn)認(rèn)為，外泌體的產(chǎn)生過程為：細(xì)胞膜內(nèi)陷，形成內(nèi)體（endosome），再形成多泡體（multivesicularbodies，MVB），較后分泌到胞外成為外泌體。外泌體中攜帶有母細(xì)胞的多種蛋白質(zhì)、脂類、DNA和RNA等重要信息。外泌體較早見于1981年，EGTrams等在體外培養(yǎng)的綿羊紅細(xì)胞上清液中發(fā)現(xiàn)了有膜結(jié)構(gòu)的小囊泡，并命名為exosome。對于外泌體的作用，當(dāng)時(shí)推測為細(xì)胞排泄廢物的一種方式。1996年GRaposo等發(fā)現(xiàn)類似于B淋巴細(xì)胞的免疫細(xì)胞也會(huì)分泌抗原呈遞外泌體（antigenpresentingvesicle），所分泌的外泌體可以直接刺激效應(yīng)CD4+細(xì)胞的抗一些病癥反應(yīng)。2007年HValadi等進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)細(xì)胞之間可以通過外泌體中RNA交換遺傳物質(zhì)。隨著有關(guān)外泌體研究越來越多，研究者發(fā)現(xiàn)它普遍參與了機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原呈遞、細(xì)胞分化、一些病癥生長于侵襲等各種生物過程中。目前人們多采用超速離心、免疫磁珠、超濾、沉淀或試劑盒等方法實(shí)現(xiàn)外泌體的提取分離。外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物質(zhì)。長沙正規(guī)外泌體提取試劑推薦廠家

外泌體在肺病進(jìn)程中的作用：在一些病癥微環(huán)境中，一些病癥細(xì)胞來源的外泌體能夠誘導(dǎo)CD4+T分化為調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，壓制機(jī)體的抗一些病癥免疫反應(yīng)；肺病細(xì)胞分泌的外泌體含有miR-21和miR-29a，可在免疫細(xì)胞中結(jié)合并啟動(dòng)TLR8，使TLR介導(dǎo)的NF-κB信號(hào)通路活化，從而導(dǎo)致一些病癥的生長和轉(zhuǎn)移。在肺病的侵襲和轉(zhuǎn)移過程中，細(xì)胞間通訊扮演著重要的角色。據(jù)有關(guān)報(bào)道稱，NSCLC分泌的外泌體內(nèi)TGFβ和IL10的高表達(dá)與肺病的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。此外，啟動(dòng)的T細(xì)胞可以通過調(diào)控Fas信號(hào)通路增加基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP9）的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)肺病的轉(zhuǎn)移。這些機(jī)制有望成為肺病治病的潛在靶點(diǎn)。雖然大多數(shù)外泌體都是促進(jìn)一些病癥的侵襲與轉(zhuǎn)移，但也有報(bào)道稱，外泌體miR-302b可以通過壓制TGFβRⅡ來壓制肺病細(xì)胞的轉(zhuǎn)移與增殖。如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽性），顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合物。徐州正規(guī)外泌體提取試劑產(chǎn)品介紹外泌體的提取、分離方法：梯度密度離心法。

外泌體(Exosome)是由細(xì)胞分泌而來的微小囊泡，直徑約為30-200nm，密度在1.13-1.21g/ml，具有杯狀形態(tài)、雙層膜結(jié)構(gòu)，天然存在于血液、尿液、唾液、母乳和細(xì)胞培養(yǎng)基等生物體液中。包括瘤細(xì)胞在內(nèi)幾乎所有類型的細(xì)胞（免疫細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、干細(xì)胞)，都可以產(chǎn)生并釋放exosome。Exosome內(nèi)含有與細(xì)胞來源相關(guān)的蛋白質(zhì)rRNA和microRNA，Exosome可通過細(xì)胞膜受體直接受體細(xì)胞，也可運(yùn)輸?shù)鞍踪|(zhì)、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA，甚至細(xì)胞器進(jìn)入受體細(xì)胞，參與細(xì)胞間通訊。Exosome在免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)、血管生成、凋亡、凝血和廢物處理等生理過程發(fā)揮關(guān)鍵作用，不同細(xì)胞來源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不盡相同，可作為多種疾病的早期診斷標(biāo)記物，也能作為靶向藥物的載體進(jìn)行疾病。miRNA是一類22nt左右大小的非編碼分子，它可以通過外泌體從一個(gè)地方轉(zhuǎn)運(yùn)到另外一個(gè)地方行使基因沉默功能。通過檢測外泌體中miRNA表達(dá)變化，可以發(fā)現(xiàn)外泌體中miRNA特異性功能。

外泌體的形成與鑒定：首先，細(xì)胞膜內(nèi)陷形成一個(gè)杯狀結(jié)構(gòu)，包括細(xì)胞表面蛋白和與細(xì)胞外環(huán)境相關(guān)的可溶性蛋白，導(dǎo)致早期胞內(nèi)體(early-sortingendosome，ESE)的從頭形成，或者是杯狀結(jié)構(gòu)直接和已經(jīng)存在的ESEs融合；trans-高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)也能協(xié)助形成ESEs。ESE成熟后形成晚期胞內(nèi)體(late-sortingendosomes，LSEs)，較終形成MVBs(也稱為多囊內(nèi)小體)。MVBs是通過endosome限制膜向內(nèi)凹(即質(zhì)膜雙凹)形成的，這一過程導(dǎo)致MVBs含有多個(gè)ILVs。MVB可以與溶酶體或自噬體融合，較終降解或與質(zhì)膜融合釋放作為外泌體的ILVs。外泌體表面蛋白包括四聚體蛋白、整合蛋白、免疫調(diào)節(jié)蛋白等。外泌體可以包含不同類型的細(xì)胞表面蛋白、細(xì)胞內(nèi)蛋白、RNA、DNA、氨基酸和代謝物。使用可截留100KD分子量的膜，通過離心截留上清中的外泌體，截留完成后。外泌體的提取方法：超速離心法（差速離心）。

外泌體的提取方法：1、磁珠免疫法。外泌體表面有其特異性標(biāo)記物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合，即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高、操作簡便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點(diǎn)，但是效率低，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實(shí)驗(yàn)，難以普遍普及。2、多聚物沉淀法。聚乙二醇（PEG）為常用的多聚物，可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀，早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體，其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽性），顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合物，機(jī)械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會(huì)破壞外泌體等。外泌體提?。撼瑸V膜也可用于分離外泌體。廣州外泌體提取試劑平均價(jià)格

超離法是常用的外泌體純化手段，采用低速離心、高速離心交替進(jìn)行，可分離到大小相近的囊泡顆粒。長沙正規(guī)外泌體提取試劑推薦廠家

所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運(yùn)載物”和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開始研究。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡，參與細(xì)胞間通訊，對外泌體的研究興趣日益增長，無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。1983年，外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)，1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。長沙正規(guī)外泌體提取試劑推薦廠家