外泌體（Exosomes）是細(xì)胞分泌到胞外的一種囊泡（ExtracellularVesicles，EVs），其大小為30-150nm，具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài)，含有豐富的內(nèi)含物（包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等），參與細(xì)胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中，包括血液、唾液、尿液、乳汁等，同時(shí)也存在于組織樣本中，如腦組織、肌肉組織、脂肪組織等。腦組織分離方法簡(jiǎn)述：將腦組織剪成薄片，放入離心管中加上消化液進(jìn)行消化，經(jīng)水浴、反復(fù)輕輕上下顛倒，再用移液間斷緩慢吹吸至消化結(jié)束。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中，混勻，置于冰上。再進(jìn)行一系列的差速超速離心過程，包括除雜、濾膜過濾、超離等。較后用PBS重懸外泌體，用重懸后的外泌體進(jìn)行下面的透射電鏡（TEM）、納米粒徑追蹤分子（NTA）和markerWB鑒定。來(lái)源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。外泌體提?。盒》肿涌蛇M(jìn)入凝膠中絕大部分孔洞，在柱中受到更強(qiáng)地滯留，更慢地被洗脫出。廈門外泌體提取試劑廠家

外泌體提?。?、過濾。超濾膜也可用于分離外泌體。根據(jù)外泌體的大小，從蛋白質(zhì)和其他大分子中分離外泌體。較常見的過濾膜具有0.8μm、0.45μm或0.22μm的孔徑，可用于收集大于800nm、400nm或200nm的外泌體，也有設(shè)計(jì)成微柱多孔硅纖毛結(jié)構(gòu)以分離40-100nm外泌體：不過，該方法由于過濾膜的粘附，可能會(huì)損失外泌體，并且過濾時(shí)的壓力和剪切力，可能會(huì)使外泌體變形受損。2、基于聚合物的沉淀技術(shù)。基于聚合物的沉淀技術(shù)通常包括將樣本與含聚合物的沉淀溶液混合，在4℃溫育并低速離心。用于聚合物沉淀的較常見聚合物之一是聚乙二醇（PEG）。用這種聚合物沉淀具有許多優(yōu)點(diǎn)，包括對(duì)分離的外泌體影響小、pH中性等。目前大多數(shù)快速分離外泌體的商品化試劑盒都是基于此方法。然而基于聚合物的沉淀方法可能會(huì)同時(shí)分離非囊泡污染物（包括脂蛋白）而且，聚合物材料的混雜可能會(huì)影響下游分析。唐山正規(guī)外泌體提取試劑廠家直銷超速離心法是目前外泌體相關(guān)文章中的主流方法，由于離心步驟繁瑣。

外泌體，是一種能被大多數(shù)細(xì)胞分泌的微小膜泡，具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu)，直徑大約40-100nm。盡管外泌體較初在1983年就被發(fā)現(xiàn)，但人們一直認(rèn)為它只是一種細(xì)胞的廢棄物。然而較近幾年，人們發(fā)現(xiàn)這種微小膜泡中含有細(xì)胞特異的蛋白、脂質(zhì)和核酸，能作為信號(hào)分子傳遞給其他細(xì)胞從而改變其他細(xì)胞的功能。這些發(fā)現(xiàn)點(diǎn)燃了人們對(duì)細(xì)胞分泌膜泡的興趣。較近的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在很多生理病理上起著重要的作用，如免疫中抗原呈遞、一些病癥的生長(zhǎng)與遷移、組織損傷的修復(fù)等。不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能，可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物。

外泌體表面有其特異性標(biāo)記物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合，即可將外泌體吸附并分離出來(lái)。磁珠法具有特異性高、操作簡(jiǎn)便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點(diǎn)，但是效率低，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實(shí)驗(yàn)，難以普遍普及。聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀，早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集菌類，現(xiàn)在也被用來(lái)沉淀外泌體，其原理可能與競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽(yáng)性），顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合物，機(jī)械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會(huì)破壞外泌體等，因此發(fā)表文章時(shí)易受質(zhì)疑。如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽(yáng)性），顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合物。外泌體提?。翰钏匐x心。差速離心仍然是較常見的外泌體分離技術(shù)之一。

外泌體的提取方法：1.超速離心法（差速離心）。超離法是較常用的外泌體純化手段，采用低速離心、高速離心交替進(jìn)行，可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡(jiǎn)單，獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎，但過程比較費(fèi)時(shí)，且回收率不穩(wěn)定（可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)），純度也受到質(zhì)疑；此外，重復(fù)離心操作還有可能對(duì)囊泡造成損害，從而降低其質(zhì)量。2.密度梯度離心。在超速離心力作用下，使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層，是一種區(qū)帶分離法。通過密度梯度離心，樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高，但步驟繁瑣，耗時(shí)，對(duì)離心時(shí)間極為敏感。外泌體的提取分離：密度梯度離心。武漢正規(guī)外泌體提取試劑

外泌體提?。好庖叻蛛x外泌體的原理大多是通過抗體包被的微球，特異性結(jié)合外泌體。廈門外泌體提取試劑廠家

外泌體（exosome）是所有細(xì)胞釋放出的菌類大小的顆粒。它們天然地存在于血液中。根據(jù)來(lái)自美國(guó)德州大學(xué)MD安德森一些疾病中心的一項(xiàng)新的研究，對(duì)外泌體進(jìn)行基因操縱可能提供一種新的胰腺病治病方法。論文通信作者為德州大學(xué)MD安德森一些疾病中心一些疾病生物學(xué)系研究員RaghuKalluri博士。在這項(xiàng)新的研究中，經(jīng)過基因修飾的外泌體（被稱作iExosome）能夠運(yùn)送特異性地靶向KRAS突變基因的小RNA分子，從而導(dǎo)致胰腺病模式小鼠病情緩解，增加它們的總存活率。這些研究人員采用了一種被稱作RNA干擾（RNAi）的靶向方法：利用這些天然的納米顆粒（即外泌體）運(yùn)送小干擾RNA（siRNA）或短發(fā)夾RNA（shRNA）分子來(lái)靶向胰腺病細(xì)胞中的KRAS突變基因，從而影響多種胰腺病模型的一些病癥負(fù)荷和存活。他們證實(shí)外泌體能夠作為一種高效的RNAi載體發(fā)揮作用，這是因?yàn)檫@些納米大小的囊泡（即外泌體）輕松地在體內(nèi)遷移和進(jìn)入靶細(xì)胞（包括病細(xì)胞）中。外泌體在免疫中抗原呈遞、一些病癥的生長(zhǎng)與遷移、組織損傷的修復(fù)等生理病理上起著重要的作用。廈門外泌體提取試劑廠家